陳 超 任 俊 朱建華 賈 珉，#

結(jié)直腸癌組織乳脂肪球表皮生長(zhǎng)因子8蛋白表達(dá)與臨床病理特征和患者生存率的關(guān)系*

陳 超1任 俊2朱建華1賈 珉1，#

目的：探討乳脂肪球表皮生長(zhǎng)因子8(MFG-E8)蛋白在結(jié)直腸癌(CRC)組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征和患者生存率的關(guān)系。方法：留取手術(shù)切除CRC癌組織(CRC組)及相應(yīng)癌旁組織(Control組)各88例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測(cè)癌組織及癌旁組織MFG-E8蛋白表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析各組MFG-E8蛋白高表達(dá)率的差異，以及CRC組中MFG-E8低表達(dá)組、陽(yáng)性表達(dá)組和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組患者臨床病理因素和總生存率的差異。結(jié)果：CRC組癌組織MFG-E8蛋白高陽(yáng)性表達(dá)率為73.86%(65/88)，顯著高于Control組28.41%(25/88)(P<0.01)。MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、臨床T和M分類(lèi)、臨床分期及腫瘤分型無(wú)顯著相關(guān)(P>0.05)；MFG-E8陰性表達(dá)組及強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組患者總生存率均顯著低于陽(yáng)性表達(dá)組(P<0.01)。結(jié)論：MFG-E8在CRC患者癌組織中陰性表達(dá)及強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)均可促進(jìn)CRC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并提示預(yù)后較差。

結(jié)直腸癌；乳脂肪球表皮生長(zhǎng)因子8；預(yù)后

結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer，CRC)是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在國(guó)內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響著國(guó)民健康[1]。腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移難以治療。其侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程包含癌細(xì)胞的黏附、運(yùn)動(dòng)、基質(zhì)降解和新生血管形成等環(huán)節(jié)。乳脂肪球表皮生長(zhǎng)因子8(MFG-E8)是一種存在于多種物種體內(nèi)的親脂性多效糖蛋白，可促進(jìn)吞噬性清除凋亡細(xì)胞，維持正常組織穩(wěn)態(tài)[2]。目前，其與腸道癌癥方面的作用，如與CRC的關(guān)系尚不清楚。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)法測(cè)定MFG-E8在CRC組織的表達(dá)情況，分析其與CRC臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源及分組

收集2006-07-2009-05武漢市第一醫(yī)院病理確診的結(jié)直腸癌手術(shù)切除癌組織(CRC組)及癌旁組織(Control組)各88例。CRC患者中男47例，女41例。年齡24-90歲，中位年齡71歲。按1992版Dukes分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：1 期8例，2期48例，3期30例，4期2例。要求術(shù)前未做放化療，術(shù)后行以氟尿嘧啶為主的方案化療并隨訪，隨訪截止日期為2014-08 CRC組依據(jù)癌組織中MIG-E8強(qiáng)度分為3個(gè)亞組，即陰性表達(dá)組、弱陽(yáng)性+陽(yáng)性表達(dá)組(陽(yáng)性表達(dá)組)和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組。

1.2 主要試劑

鼠抗人MFG-E8多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司(SC-8029)，鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(SP)試劑盒購(gòu)自上海長(zhǎng)島公司(B1012)，抗體稀釋液、 DAB顯色劑購(gòu)自美國(guó)DAKO公司(GT100920、002948)。

1.3 SP染色及結(jié)果判讀

1.3.1 SP染色：4μm 厚石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，3% H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10min，微波爐加熱修復(fù)抗原3min，加一抗(MFG-E8 1∶50 稀釋)4℃冰箱過(guò)夜，加二抗37℃ 10min，DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明封片，以抗體稀釋液代替一抗做陰性對(duì)照,以已知陽(yáng)性的胃癌組織免疫SP染色切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.2 結(jié)果判定：細(xì)胞漿中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。染色后，10×40高倍視野下，隨機(jī)選取4個(gè)視野，先行三方面染色情況評(píng)分[3]：(1)著色：無(wú)染色，0 分；淡黃色，1 分；棕黃色，2 分；棕褐色，3 分。(2)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，0 分；<10%，1 分；10%-50%，2 分；50%-90%，3 分；≥90%，4 分。(3)染色方式評(píng)分：無(wú)染色，0 分；散在染色，1 分；局灶染色，2 分；彌漫染色，3分。再按以上3項(xiàng)評(píng)分的乘積判斷陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度?！?分為陰性(-)表達(dá)；5-8 分為弱陽(yáng)性(±)表達(dá)，9-18 分為陽(yáng)性(+)表達(dá)，19-36 分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)表達(dá)，見(jiàn)圖1。以上結(jié)果均至少由兩位病理科醫(yī)生以盲法觀察確定。

圖1 CRC組和Control組MFG-E8蛋白各種表達(dá)強(qiáng)度(SP，×400)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)數(shù)資料用百分率(%)表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman，生存率分析應(yīng)用Kaplan-meier法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CRC組與Control組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較

統(tǒng)計(jì)分析以陰性表達(dá)+弱陽(yáng)性表達(dá)為低表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)+強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為高表達(dá)。CRC組MFG-E8高表達(dá)率明顯高于Control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 MFG-E8在CRC組織及癌旁組織中的表達(dá)情況(n，%)

注：與Control組比較，1)P<0.01

2.2 CRC組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理因素分析

從表2可見(jiàn)，MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N分類(lèi))相關(guān)(P<0.05)，MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與其它臨床病理特征：年齡、T分類(lèi)、M分類(lèi)、臨床分類(lèi)、腫瘤分型均無(wú)關(guān)(P>0.05)。

表2 MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CRC組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與患者生存率分析

CRC組不同MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度患者總生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陰性表達(dá)組和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組患者總生存率均明顯短于陽(yáng)性表達(dá)組患者(P<0.01)，而陰性表達(dá)組與強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組患者總生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖2。

圖2 CSC患者癌組織MFG-E8蛋白不同表達(dá)強(qiáng)度者生存曲線(xiàn)

3 討論

MFG-E8蛋白于1990年在哺乳動(dòng)物的乳腺中被首先發(fā)現(xiàn)[4]，是一種分泌型的多效糖蛋白, 分子量約為53kDa，其基因位于人類(lèi)15號(hào)染色體。有研究表明，MFG-E8在多種腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，如惡性黑色素瘤[5]、甲狀腺癌[6]、乳腺癌[7,8]等，并對(duì)預(yù)后有一定影響。但其在腸道腫瘤如CRC的表達(dá)及與病理因素和預(yù)后的關(guān)系少有報(bào)道。

本研究中CRC患者癌組織MFG-E8蛋白高表達(dá)率為73.86%，顯著高于癌旁組織28.41%，提示高表達(dá)的MFG-E8蛋白可能參與CRC的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。同時(shí), MFG-E8蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)僅與病理因素中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而與年齡、T分期、臨床分期、腫瘤分型之間無(wú)明顯關(guān)系，表明MFG-E8蛋白在結(jié)腸癌組織中的高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，(M分類(lèi)由于M1數(shù)量太少，而無(wú)法獲得有意義的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù))，而且MFG-E8蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組患者總生存率低于陽(yáng)性表達(dá)組，這與已有文獻(xiàn)報(bào)道[6,8]對(duì)其它腫瘤研究的結(jié)果相近。

腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移不僅與腫瘤自身特性有關(guān)，還與腫瘤所處微環(huán)境穩(wěn)定性密不可分。合適強(qiáng)度的MFG-E8表達(dá)，在吞噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間起橋連作用，MFG-E8蛋白既與腫瘤細(xì)胞外翻的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，同時(shí)與吞噬細(xì)胞的αvβ3/αvβ5整合素受體結(jié)合，導(dǎo)致整合素構(gòu)象變化，通過(guò)CrkⅡ-DOCK180-Rac1復(fù)合物活化Rac1,使吞噬細(xì)胞的細(xì)胞骨架發(fā)生重組，促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞[10,11]，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，減少或阻止腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。但MFG-E8蛋白過(guò)度表達(dá)可能不利于兩細(xì)胞間的橋連，引起吞噬障礙，阻止機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬清除及炎癥反應(yīng)，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力[12]。因而出現(xiàn)MFG-E8表達(dá)增強(qiáng)時(shí)，機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬清除發(fā)生障礙，加快腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后較差。

本文結(jié)果還表明CRC患者M(jìn)FG-E8陰性表達(dá)組與患者臨床病理特征和總生存率的關(guān)系與強(qiáng)陽(yáng)性組表現(xiàn)相同，即MFG-E8陰性表達(dá)僅與CRC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且總生存率顯著低于陽(yáng)性表達(dá)組。 推測(cè)其原因可能由于MFG-E8陰性表達(dá)時(shí)，沒(méi)有足夠數(shù)量的MFG-E8作為αvβ3和αvβ5整合子的配體，來(lái)介導(dǎo)黏著蛋白的聚集以及細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)起始過(guò)程[13]，導(dǎo)致在吞噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間建立橋連作用不足，降低了機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除能力，導(dǎo)致CRC患者預(yù)后較差。

綜上所述，檢測(cè)CRC患者癌組織中MFG-E8蛋白的表達(dá)水平，可預(yù)測(cè)患者預(yù)后，并為個(gè)體化治療提供重要的理論依據(jù)。

本文第一作者簡(jiǎn)介：

陳 超(1984-)，男，漢族，碩士，主要從事腫瘤免疫學(xué)診斷工作

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·信 息 欄·

CNKI研制成功《醫(yī)院科研成果統(tǒng)計(jì)分析與評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)》，日前通過(guò)專(zhuān)家鑒定

2017年7月20日，同方知網(wǎng)(CNKI)中國(guó)科學(xué)文獻(xiàn)計(jì)量評(píng)價(jià)研究中心研發(fā)的《醫(yī)院科研成果統(tǒng)計(jì)分析與評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)》召開(kāi)了專(zhuān)家鑒定會(huì)。來(lái)自衛(wèi)生和醫(yī)療主管部門(mén)、醫(yī)院科研處、學(xué)協(xié)會(huì)等18個(gè)單位的20位專(zhuān)家參會(huì)，并對(duì)該項(xiàng)成果給予高度評(píng)價(jià)，認(rèn)為其達(dá)到國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平。

該數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)了全國(guó)11 863家醫(yī)院(包括1 647家三級(jí)醫(yī)院、6 357家二級(jí)醫(yī)院)及其200萬(wàn)名學(xué)者近10年的科研產(chǎn)出成果數(shù)，并對(duì)其學(xué)術(shù)影響力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。統(tǒng)計(jì)的科研成果類(lèi)型包括國(guó)內(nèi)期刊發(fā)文、SCI論文、國(guó)內(nèi)會(huì)議和ISTP國(guó)際會(huì)議論文，以及專(zhuān)利、基金和獎(jiǎng)勵(lì)等。除了統(tǒng)計(jì)成果數(shù)量以外，該數(shù)據(jù)庫(kù)還統(tǒng)計(jì)了期刊論文的被引頻次、下載頻次等影響力指標(biāo)，并發(fā)布了醫(yī)院和學(xué)者的h指數(shù)、綜合指數(shù)等綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。為了滿(mǎn)足醫(yī)院各科室及細(xì)分學(xué)科領(lǐng)域的評(píng)價(jià)需求，數(shù)據(jù)庫(kù)按臨床科室情況設(shè)計(jì)了28個(gè)一級(jí)學(xué)科進(jìn)行分類(lèi)評(píng)價(jià)。

該數(shù)據(jù)庫(kù)為醫(yī)院科研績(jī)效評(píng)價(jià)與管理提供了豐富、全面的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)?；?科研結(jié)果管理"的理念，該數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)布了大量客觀事實(shí)數(shù)據(jù)。主要用途可以概括為：首先，支持醫(yī)院的學(xué)科發(fā)展水平評(píng)價(jià)。既能縱向比較各年各學(xué)科發(fā)展趨勢(shì)，又能橫向與全國(guó)同學(xué)科醫(yī)院發(fā)展水平進(jìn)行對(duì)比分析，從而知彼知己，找準(zhǔn)醫(yī)院學(xué)科建設(shè)的重點(diǎn)方向。其次，支持專(zhuān)家學(xué)者評(píng)價(jià)。該數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)醫(yī)院科研人員近10年的科研產(chǎn)出和學(xué)術(shù)影響力進(jìn)行了全面統(tǒng)計(jì)分析，方便醫(yī)院了解和管理本院各科室學(xué)者，也方便評(píng)估和尋找學(xué)科帶頭人和專(zhuān)家。第三，支持學(xué)者成果的快捷匯總和統(tǒng)計(jì)，把科研人員從整理自己成果的繁瑣工作中解放出來(lái)。只需輕輕一點(diǎn)，即可輕松完成了科研成果及影響力數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和導(dǎo)出！

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Study on the Correlation between MFG-E8 Protein Expression with Clinicopathological Features and Survival in Colorectal Cancer

CHEN Chao1, REN Jun2, ZHU Jian-hua1, JIA Min1,#

1Department of Clinical Laboratory;2Department of Surgery,Wuhan First Hospital, Wuhan 430030,China;#

Objective: To explore the expression of milk fat globule EGF factor Ⅷ (MFG-E8) in colorectal cancer (CRC) tissues and the correlation with clinicopathological features and survival in CRC patients.Method: 88 CRC-related cases with follow-up information were made into tissue microarrays according to the paired principle of cancer tissues and the adjacent tissues. The expression of MFG-E8 was detected with immunohistochemical analysis and SPSS software was finally utilized to analyze the relationships between experimental data and clinical indicatives.Results:MFG-E8 expression increased significantly in colorectal cancer compared with normal mucosa tissues(control group) (P<0.01). In addition, both strong positive and negative expression of MFG-E8 were correlated with lymph node metastasis (P<0.05). Furthermore, patients with strong positive or negative expression of MFG-E8 showed shortened overall survivals (P<0.01),compared with patients with weakly positive and positive expression of MFG-E8.Conclusion: Both strong positive expression and negative expression of MFG-E8 might be involved in the progression of CRC and they were associated with patients' poor overall survivals.

Colorectal cancer;Milk fat globule-epidermal growth factor 8; Prognosis

武漢市衛(wèi)計(jì)委課題(武衛(wèi)2007-43號(hào))

武漢市第一醫(yī)院，武漢 43000;1檢驗(yàn)科；2外科；#

,E-mail:Pollyann@126.com

本文2017-04-03收到，2017-07-16修回

R735.3

A

1005-1740(2017)03-0038-05