王紅旭 賴曉霏

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，重慶400016)

血清IL- 34水平與SLE疾病活動度關(guān)系的研究

王紅旭 賴曉霏

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，重慶400016)

目的：檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)患者血清白細胞介素(Interleukin，IL)- 34水平，并進一步探討IL- 34與臨床和實驗室指標及SLE疾病活動度的關(guān)系。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme- linked immunosorbent assay，ELISA)測定78例SLE組及53名正常對照組血清IL- 34水平,SLE組與正常組血清IL- 34水平分析采用曼- 惠特尼U檢驗(Mann- WhitneyUtest)。結(jié)果：與正常對照相比，SLE組血清IL- 34水平明顯高于正常對照組[(Median,128.9 pg/ml) vs (Median,52.4 pg/ml),P<0.001]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。IL- 34水平與SLE疾病活動度、雙鏈DNA抗體(anti- double stranded DNA antibody，anti- dsDNA)滴度、C反應(yīng)蛋白(C- reactive protein，CRP)呈正相關(guān)，與C3水平呈負相關(guān)。結(jié)論：血清IL- 34可能成為SLE的一血清標志物，因其在SLE患者中升高，且與疾病活動度相關(guān)。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡;白細胞介素34;活動度

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種多克隆T、B淋巴細胞激活自身抗體產(chǎn)生及免疫復(fù)合物生成而導(dǎo)致組織器官損傷的異質(zhì)性的系統(tǒng)性自身免疫性疾病。SLE的病理機制復(fù)雜，包括遺傳、激素、免疫和環(huán)境因素[1,2]。然而，SLE的發(fā)病機制尚不明確，大量研究顯示，細胞因子在其發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。

白細胞介素(Interleukin，IL)- 34是2008年發(fā)現(xiàn)的白介素家族的新成員,它是集落刺激因子受體1(Colony stimulating factor 1receptor,CSF- 1R)的另一個配體[3]。目前,已知IL- 34和巨噬細胞集落刺激因子受體(Macrophage- colony stimulating factor,M- CSF)的功能相似,在各種炎性和自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要的作用[4,5]。IL- 34可促進單核巨噬細胞、破骨細胞分化。研究顯示，IL- 34在類風濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)中發(fā)揮重要作用[6]，同時在SLE中升高，但是SLE血清IL- 34水平與臨床和實驗室指標的關(guān)系尚不明確。因此，本研究通過檢測SLE患者與正常對照組血清IL- 34水平，分析探討血清IL- 34水平與SLE臨床和實驗室指標的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2014年1月至2015年12月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的SLE門診及住院患者，診斷均符合1997年美國風濕病協(xié)會(American College of Rheumatology)制定的SLE分類標準，均排除感染、腫瘤、糖尿病及其他自身免疫性疾病。正常對照組均來自同期本院體檢中心的健康人群，無風濕病史及風濕病家族史。兩組一般資料具有可比性。SLE病人疾病活動度依據(jù)SLE疾病活動指數(shù)(SLEDAI)計算，SLEDAI≥6分定義為活動患者。

1.2 方法

1.2.1 臨床指標檢測方法 所有SLE患者接受標準的病史采集和體格檢查。所有受檢者晨起抽取靜脈血4 ml，離心取其血清，標本放置于-20℃保存待測。應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清IL- 34水平(R&D Systems,USA)；anti- dsDNA抗體滴度檢測采用ELISA(Euroummun,USA)；血清補體3(Complement 3,C3)、C4和C反應(yīng)蛋白(C- reactive protein，CRP)水平檢測采用免疫比濁法(Beckman Immage 800)；血沉(Erythrocyte sedimentation,ESR)檢測采用魏氏法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料結(jié)果以[中位數(shù)(四分位數(shù)范圍)][Median(interquartile range)],[median(IQR)]表示，兩組間比較及IL- 34與其他連續(xù)變量間關(guān)系分析均采用曼- 惠特尼U檢驗(Mann- WhitneyUtest)。多組間比較采用Bonferroni法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 共有131個對象被納入本研究，其中SLE組78例，監(jiān)控對照組53例。SLE組中有20例SLE疾病活性患者，58例非活動患者，SLE組病程為7(3.6-12.1)年[Median(IQR)]。SLE組和對照組年齡分別為55.2(48.1～66.7)歲，57.6(45.5～66.1)歲[Median(IQR)]。SLE組和對照組性別比例分別為9/69和6/47(男/女)。SLE組與對照組的年齡、性別均無統(tǒng)計學(xué)差異。RA疾病組與對照組的指標水平見表1，疾病組的RF、ESR、CRP和CCP水平較對照組均明顯增加，并且疾病組穩(wěn)定期與活動期的CRP和ESR有明顯差別。但是SLE組的疾病組和對照組的anti- dsDNA、C3、C4、CRP and ESR水平有顯著性差異(P<0.001，表1)。

2.2 SLE患者血清IL- 34水平升高 比較SLE組和健康對照組血清IL- 34水平，結(jié)果顯示SLE組IL- 34水平(Median,128.9 pg/ml)顯著高于健康對照組(Median,52.4 pg/ml;P<0.001，圖1)，所有健康對照組血清IL- 34水平不高于80 pg/ml。進一步分析SLE活動組和非活動組血清IL- 34水平，統(tǒng)計結(jié)果為SLE活動組血清IL- 34水平(Median,312 pg/ml)顯著高于非活動組(Median,97 pg/ml;P<0.001，圖2)。

2.3 血清IL- 34水平與SLE疾病活動度指標的關(guān)系 血清IL- 34水平與SLEDAI呈顯著正相關(guān)(rs=0.62，P=0.001 1，圖3A)，同時血清IL- 34還與anti- dsDNA(rs=0.45，P=0.012，圖3B)和CRP(rs=0.65，P=0.0013，圖3C)呈正相關(guān)，但與C3呈負相關(guān)(rs=0.54，P=0.002，圖3D)。但是，血清IL- 34水平與C4(rs=0.26;P=0.055;圖3E),ESR(rs=0.21;P=0.053;圖3F)和水平無顯著性差異。因此，血清IL- 34水平反應(yīng)SLE疾病活動度。

表1 SLE患者與健康對照組的臨床資料比較

Tab.1 Demographic and clinical characteristics of study subjects

FeaturesMean(95%CI)HealthycontrolsSLEgroupAge,years[median(IQrange)]57.6(45.5-66.1)55.2(48.1-66.7)Male/female6/479/69Diseaseduration,years[median(IQrange)]No7(3.6-12.1)Anti-dsDNAAb,IU/mL[median(IQrange)]14(9-22)30.1(7.9-678)1)IL-34,pg/mL[median(IQrange)]41.2(31.3-77)91.3(32.1-498.4)1)ESR,mm/h[median(IQrange)]7(5-15)26(12.0-67.0)1)CRP,mg/L[median(IQrange)]<911.0(3.0-112.0)1)C3,g/L[median(IQrange)]1.21(0.79-1.32)0.8(0.1-1.23)1)C4,g/L[median(IQrange)]0.25(0.21-0.38)0.32(0.02-0.4)1)

Note：Anti- dsDNA Ab,anti- double-stranded DNA antibody;IL- 34, interleukin- 34;ESR,erythrocyte sedimentation rate;CRP,C- reactive protein;C3,complement 3;C4,complement 4.IQ,interquartile.1)P<0.001 vs control.

2.5 血清IL- 34水平與SLE臨床表現(xiàn)的關(guān)系 SLE患者依據(jù)其臨床表現(xiàn)的個數(shù)計分，進而SLE患者依據(jù)其得分被分為3組，再比較這3組SLE患者的IL- 34水平。陽性臨床表現(xiàn)包括:頰部紅斑、盤狀紅斑、脫發(fā)、口腔或鼻腔潰瘍、漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、活動性腎炎、血管炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、溫度>38℃，血小板減少(<100×109L-1)，白細胞減少(<3×109L-1)，貧血(<100 g/L)。統(tǒng)計結(jié)果顯示血清IL- 34水平隨著臨床表現(xiàn)個數(shù)增加而升高(P<0.001;表 2)。因此，高水平的血清IL- 34與SLE臨床表現(xiàn)的增多有關(guān)系。

圖1 IL- 34在健康對照組和SLE組中的血清分布情況Fig.1 Scatter- plots of serum interleukin- 34(IL- 34)levels in healthy control subjects and SLE(systemic lupus erythematosus)patientsNote: The differences between SLE patients and controls were deter mined by non- parametric Mann- Whitney rank sum test.The horizontal lines indicate the median concentration for each group.

圖2 IL- 34在SLE活動組和非活動組中的血清分布情況Fig.2 Scatter- plots of serum interleukin- 34(IL- 34)levels in active SLE(systemic lupus erythematosus)patients and inactive SLE patientsNote: The horizontal lines indicate the median concentration for each group.The differences between active SLE patients and inactive SLE patients were deter mined by non- parametric Mann- Whitney rank sum test.

圖3 患者血清中IL- 34與SLE疾病活動指數(shù)的相關(guān)性分析(n=78)Fig.3 Correlation of serum IL- 34 concentrations with systemic lupus erythematosus disease activity index(SLEDAI)in all systemic lupus erythemato- sus(SLE)patients(n=78)Note: Spearman′s rank correlation coefficient was employed to assess correlations;P- values are shown.

表2 血清IL- 34水平與SLE臨床表現(xiàn)的關(guān)系

Tab.2 Associations between SLE clinical features and titer of IL- 34

ClinicalfeaturesNumberMedianIL-34(95%CI)01443(30.1-50.3)1)1-244124.2(50.5-202.4)1)3-820312.0(193.5-498.4)1)

Note：Number of positive clinical features including malar rash/discoid rash,alopecia,oral or nasal ulcers,serositis,arthritis,active nephritis,CNS(central nervous system) lupus,vasculitis,temperature >38℃,thrombocytopenia,leukopenia,anemia.1)P<0.001，Bonferroni test was employed to compared the three clinical feature groups.

3 討論

細胞因子調(diào)節(jié)多種免疫功能，當其異常分泌時，可致機體免疫功能失調(diào)，甚至誘發(fā)自身免疫性疾病。近年來大量研究表明，諸多細胞因子參與SLE發(fā)病和疾病進展，許多細胞因子能促進自身反應(yīng)性T、B 細胞活化，進而破壞免疫穩(wěn)態(tài)，最終導(dǎo)致細胞、組織和臟器損傷。

IL- 34是CSF- 1R的另一個配體，主要表達于單核巨噬細胞、成纖維細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞[4]。IL- 34有促進炎癥的作用。IL- 34能促進單核- 巨噬細胞增殖及分化，后者能產(chǎn)生多種細胞因子，比如TNF和IL- 6[3,7]。另外，IL- 34能誘導(dǎo)炎癥因子，比如IL- 6、IL- 8[8]。IL- 34和M- CSF的功能相似，在各種炎性和自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要的作用[4]，比如RA、干燥綜合征、狼瘡腎炎。IL- 34與RA的發(fā)病及炎癥反應(yīng)相關(guān)[5]，RA患者關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞表達IL- 34，且與滑膜炎的嚴重程度相關(guān)[6]。同時IL- 34還可促進破骨細胞形成[9]。有研究提示，SLE患者IL- 34水平升高，但是其與SLE臨床和實驗室指標的關(guān)系尚無相關(guān)研究。我們研究證實IL- 34水平在SLE患者中升高，特別是在活動性SLE患者中。同時血清IL- 34水平還與SLE活動度呈正相關(guān)，且與臨床癥狀累積數(shù)量相關(guān),IL- 34水平可在一定程度上提示SLE病情。因此，IL- 34可能在SLE的發(fā)病中起重要作用，血清IL- 34可能成為反映SLE疾病活動度的生物學(xué)標志物。然而，該研究未覆蓋SLE治療干預(yù)前后IL- 34與疾病轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性。在后續(xù)研究中，應(yīng)納入IL- 34在治療前后的變化。另外，目前極少有IL- 34與SLE在細胞水平、動物模型中的研究，因此對IL- 34在SLE的發(fā)病中的具體機制需要更深入的研究與探索。

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[收稿2017- 02- 16 修回2017- 03- 19]

(編輯 許四平 劉格格)

Relationship between levels of serum IL- 34 and disease activity of systemic lupus erythematosus

WANG Hong- Xu,LAI Xiao- Fei.

Department of Laboratory Medicine,the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China

Objective:To investigate levels of serum IL- 34 in SLE patients,and correlation between concentrations of serum IL- 34 and other established serum markers and disease activity indexes.Methods: In all,78 SLE patients and 53 healthy controls were enrolled in the research.Enzyme- linked immunosorbent assay(ELISA) was employed to measuring the concentrations of serological IL- 34.Then,serum IL- 34 levels between SLE group and healthy controls were analyzed by Mann- WhitneyUtest.Meanwhile,the correlation between the serum IL- 34 levels and disease activity indexes and other established serum markers were assessed.Serum IL- 34 levels were significantly higher in SLE patients compared to healthy controls[(Median,128.9 pg/ml) vs (Median,52.4 pg/ml),P<0.001].Results: Their levels were remarkably associated with accumulation of the clinical features of SLE.Additionally,IL- 34 titers were positively correlated with the SLE disease activity indexes,anti- double stranded DNA antibody(anti- dsDNA)titers and C- reactive protein(CRP)levels,but inversely with C3 levels.Conclusion: Serum IL- 34 could be a candidate biomarker for SLE as the elevated serum levels in treatment- naive SLE patients and its association with SLE disease activity.

Systemic lupus erythematosus;IL- 34；Activity index

10.3969/j.issn.1000- 484X.2017.08.023

王紅旭(1987年-)，女，碩士，檢驗醫(yī)師，主要從事自身免疫性疾病研究。

及指導(dǎo)教師：賴曉霏(1982年-)，女，碩士，主管技師，主要從事自身免疫性疾病的研究，E- mail：87936966@qq.com。

R593.24

A

1000- 484X(2017)08- 1232- 04