軒轅歡，董文杰，劉 沖，霍仕霞（.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 80002；2.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，烏魯木齊 80004；.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊 80049）

水提取和半仿生提取盒果藤中7種微量元素的形態(tài)分析比較Δ

軒轅歡1＊，董文杰1，劉 沖2#，霍仕霞3（1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 830002；2.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，烏魯木齊 830004；3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊 830049）

目的：研究水提取和半仿生提取后盒果藤中與抗白癜風(fēng)有關(guān)的元素提取率及存在形態(tài)。方法：分別采用水提法和半仿生提取法。用微孔濾膜分離盒果藤提取液中的可溶態(tài)與懸浮態(tài)元素；大孔樹(shù)脂分離可溶態(tài)中有機(jī)態(tài)和無(wú)機(jī)態(tài)微量元素；火焰原子吸收光譜法測(cè)定盒果藤中銅、鋅、鐵、鈣、鎂、錳、鍶7種元素的含量并進(jìn)行形態(tài)分析。結(jié)果：水提后，盒果藤中7種微量元素的提取率為40.47%～72.49%；懸浮顆粒比例為3.69%～8.78%；鍶元素可溶態(tài)中有機(jī)態(tài)/無(wú)機(jī)態(tài)比例為104.36%，銅、鋅、鐵、鈣、鎂、錳可溶態(tài)中有機(jī)態(tài)/無(wú)機(jī)態(tài)比例為3.94%～48.39%。半仿生提取后，除錳元素外，盒果藤中微量元素提取率均高于水提法，銅、鋅、鐵、鈣、鎂、鍶的提取率為77.69%～90.19%；各元素懸浮顆粒比例為0.39%～8.57%；可溶態(tài)中有機(jī)態(tài)/無(wú)機(jī)態(tài)比例為72.74%～180.79%。結(jié)論：盒果藤中銅、鋅、鐵、鈣、鎂、錳、鍶等元素較易溶出，且溶出后主要以無(wú)機(jī)態(tài)形式存在。半仿生提取后，除錳元素外，其他元素溶出率均顯著上升，且溶出后微量元素的有機(jī)態(tài)比例顯著提高，微量元素的溶出和有效利用率均高于水提法。

盒果藤；水提??；半仿生提?。晃⒘吭?；火焰原子吸收光譜法；形態(tài)分析

盒果藤（Opercalina turperthum L.）為維吾爾醫(yī)常用藥材，維吾爾醫(yī)認(rèn)為盒果藤具有燥濕作用，能排出體內(nèi)濕寒性物質(zhì)，也能排出體內(nèi)黏稠性的津液和灼燒津液（腐敗津液），常用于治療白癜風(fēng)[1]。目前，關(guān)于盒果藤化學(xué)成分及藥理藥效方面的研究較少。筆者前期對(duì)盒果藤中與白癜風(fēng)相關(guān)的微量元素進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)盒果藤中除含有豐富的鈣（Ca）、鎂（Mg）等常量元素外，還含有鐵（Fe）、銅（Cu）、鋅（Zn）、錳（Mn）、鍶（Sr）等微量元素[2]。但是，這些微量元素的生物可利用度與其化學(xué)形態(tài)有很大關(guān)系。近年來(lái)，微量元素化學(xué)形態(tài)分析日益受到人們的關(guān)注，對(duì)中藥活性成分的認(rèn)識(shí)也不僅局限于微量元素的總量，還在于微量元素在中藥不同的存在狀態(tài)。有機(jī)態(tài)的微量元素易絡(luò)合，可增強(qiáng)生物活性，提高微量元素的利用率，從而提高藥效。Cu2+是形成酪氨酸酶的重要輔基離子；某些遞氫的氧化酶中均含有Zn2+，Zn2+減少可能導(dǎo)致色素形成障礙；Fe、Ca、Mg參與機(jī)體正常生理功能，構(gòu)成體內(nèi)重要的載體、參與電子傳遞，對(duì)黑素的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)有著至關(guān)重要的作用；Sr參與黑素合成和轉(zhuǎn)運(yùn)；Mn具有較強(qiáng)的清除自由基作用。而這些元素均以有機(jī)態(tài)的形式發(fā)揮生物活性，同時(shí)有機(jī)態(tài)的元素也易與植物中的化合物形成絡(luò)合物，易于溶出而被機(jī)體吸收。因此，在本研究中筆者對(duì)盒果藤中的Cu、Zn、Fe、Ca、Mg、Mn、Sr 7種元素進(jìn)行形態(tài)分析，比較了水提和半仿生提取后這7種元素的提取率、浸留顆粒吸附率，為其抗白癜風(fēng)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TAS-990型原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；ML-1.5-4型可調(diào)式電熱板（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；DHG-9123型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；Cu、Zn、Fe、Ca、Mg、Mn、Sr空心陰極燈（上海威格拉斯儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑

單元素標(biāo)準(zhǔn)液：Cu（批號(hào)：GBW08615）、Zn（批號(hào)：GBW08620）、Fe（批號(hào)：GBW08616）、Ca（批號(hào)：GBW080118）、Mg（批號(hào)：GBW080126）、Mn（批號(hào)：GBW080157）、Sr（批號(hào)：GBW080565）均購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心（質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL）；LSA-10大孔吸附樹(shù)脂（西安藍(lán)曉科技有限公司）；盒果藤購(gòu)自新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院，經(jīng)該院藥劑科艾尼瓦爾主任藥師鑒定為真品；硝酸、高氯酸均為優(yōu)級(jí)純；水為二次去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的制備

分別精密移取Cu、Zn、Fe、Ca、Mg、Mn、Sr標(biāo)準(zhǔn)液10 mL置于100 mL量瓶中，0.1%硝酸定容，作為各元素標(biāo)準(zhǔn)貯備液。分別精密移取Cu、Zn、Mn、Sr貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，F(xiàn)e、Ca貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，Mg貯備液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，置于100 mL量瓶中，0.1%硝酸定容，即配制成Cu、Zn、Mn、Sr質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，F(xiàn)e、Ca質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，Mg質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

2.2 儀器工作條件

[3-7]，采用火焰原子吸收光譜法。原子吸收分光光度儀工作條件見(jiàn)表1[3-7]。

表1 各元素所用原子吸收分光光度儀工作條件Tab 1 Working conditions of flame atomic absorption spectrophotometry for each element

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 以各元素標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、吸光度值為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab 2 Linear relationship of each element

2.3.2 精密度試驗(yàn) 在規(guī)定的條件下，分別對(duì)各元素中間濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD分別為Cu 0.90%、Zn 1.10%、Fe 0.76%、Ca 0.62%、Mg 0.79%、Mn 0.89%、Sr 0.43%（n＝6）。各元素測(cè)定結(jié)果的精密度均符合分析要求。

2.3.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱定盒果藤粉末0.5 g，共9份，分別加入3個(gè)不同體積的標(biāo)準(zhǔn)貯備液（Cu 0.32、0.40、0.64 mL；Zn、Mg 0.8、1.0、1.2 mL；Mn 1.2、1.5、1.8 mL；Fe 0.72、0.90、1.20 mL；Ca 3.6、4.5、5.4 mL；Sr 2.4、3.0、3.6 mL），按“2.4”項(xiàng)下方法處理后，按表1工作條件測(cè)定，進(jìn)行回收率試驗(yàn)。結(jié)果7種元素的平均加樣回收率為98.92%～100.96%（RSD≤10%，n＝9），表明該方法準(zhǔn)確、可行。

2.4 盒果藤中微量元素總含量的測(cè)定

將盒果藤藥材粉碎后過(guò)80目藥篩，精密稱取0.5 g于高腳燒杯中，共3份，依次加入濃硝酸25 mL、高氯酸0.5 mL，蓋上表面皿，冷浸過(guò)夜。次日于電熱板上加熱消解，保持液體呈微沸狀態(tài)，直至變成無(wú)色透明液體，再繼續(xù)加熱，待蒸發(fā)至近干為止。冷卻后，用少量去離子水沖洗，轉(zhuǎn)移定容至10 mL比色管中，備用。同時(shí)按相同方法制備空白溶液（不加樣品處理）作為對(duì)照[8]。盒果藤中各元素總含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 盒果藤中微量元素測(cè)定結(jié)果（μg/g）Tab 3 Determination results of speciation analysis of trace elements in O.turperthum（μg/g）

2.5 盒果藤中微量元素的提取與測(cè)定

2.5.1 水提取 將盒果藤藥材粉碎后，過(guò)40目藥篩，準(zhǔn)確稱取100 g，加500 mL去離子水浸泡1 h后，加熱煮沸。冷卻后，用300目紗布過(guò)濾，再加適量去離子水淋洗3～4次，共煎煮3次，每次1 h，合并濾液，濃縮后定容至100 mL量瓶中。離心（離心半徑為40 cm，轉(zhuǎn)速為10 000 r/min，下同）30 min，取離心液用0.45 μm濾膜過(guò)濾，濾液中的微量元素為可溶態(tài)，濾渣中的微量元素為懸浮態(tài)[9-10]。水提液可溶態(tài)和懸浮態(tài)中7種微量元素的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5.2 半仿生提取 準(zhǔn)確稱取盒果藤粉末100 g，水煎煮3次，每次的煎煮水溶液調(diào)節(jié)pH分別為3、7、9，每次加水500 mL，煎煮1 h。每次煎煮冷卻后，用300目紗布過(guò)濾，再加適量去離子水淋洗3～4次，合并濾液，濃縮后定容100 mL量瓶中，離心30 min。將離心液用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，濾液中的微量元素為可溶態(tài)，濾渣中的微量元素為懸浮態(tài)[11]。半仿生提取液可溶態(tài)提取液和懸浮態(tài)提取液中7種微量元素的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

2.6 可溶態(tài)中無(wú)機(jī)態(tài)和有機(jī)態(tài)微量元素的分離與測(cè)定

用稀鹽酸和氫氧化鈉溶液將“2.5.1”“2.5.2”項(xiàng)下可溶態(tài)部分的pH調(diào)節(jié)至3.0。將LSA-10大孔吸附樹(shù)脂用95%乙醇浸泡24 h，裝柱，去離子水沖洗干凈后，將可溶態(tài)溶液上樣。用去離子水洗脫至中性，收集即得可溶無(wú)機(jī)態(tài)，再用甲醇洗脫即得可溶有機(jī)態(tài)[12]。可溶無(wú)機(jī)態(tài)和可溶有機(jī)態(tài)中7種微量元素的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

2.7 形態(tài)分析

根據(jù)表3中測(cè)定結(jié)果，分別計(jì)算2種提取方法中各微量元素的提取率、顆粒吸附率和有機(jī)態(tài)/無(wú)機(jī)態(tài)等形態(tài)分析參數(shù)[13-15]，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

本研究采用常規(guī)的濕法消解處理樣品，采用硝酸-高氯酸消化液體系，同時(shí)進(jìn)行空白對(duì)照以減少試劑及操作帶來(lái)的干擾和誤差，避免高壓消解造成的消解不完全。

表4 盒果藤中微量元素形態(tài)分析參數(shù)（%%）Tab 4 Parameters of speciation analysis of trace elements in O.turperthum（%%）

采用原子吸收光譜法對(duì)盒果藤及各提取液中的Cu、Zn、Fe、Ca、Mg、Mn、Sr 7種元素進(jìn)行測(cè)定，精密度和回收率良好，滿足微量元素分析的要求，盒果藤中微量元素含量高低排序：Ca＞Mg＞Fe＞Sr＞Mn＞Zn＞Cu。

盒果藤是維吾爾醫(yī)常用藥材，大多以原藥材粉碎入藥，本研究采用常規(guī)的水提取方法提取其微量元素，為今后進(jìn)行工藝研究提供了參考依據(jù)。結(jié)果除Fe、Mn元素外，其他元素提取率均大于50%，表明盒果藤中的微量元素較易溶出，可能是Cu、Zn、Ca、Mg、Sr元素在藥材中與其他物質(zhì)的結(jié)合方式較簡(jiǎn)單，易被加熱破壞，故易溶出；各元素水提取后懸浮態(tài)顆粒吸附率為3.69%～8.78%，原因可能是微量元素與藥材中的纖維素、蛋白質(zhì)等膠體在被提取時(shí)，吸附了部分的微量元素，形成了假膠體分散體系?？扇軕B(tài)微量元素中，除Sr元素外，其他元素主要以無(wú)機(jī)態(tài)形式存在，大量的有機(jī)態(tài)Sr元素和部分其他元素的有機(jī)態(tài)的存在，可與盒果藤中的有機(jī)成分形成配位化合物，進(jìn)入機(jī)體后，受到機(jī)體內(nèi)各種生理因素的影響，改變其脂溶性或分子大小等特征，易與機(jī)體內(nèi)的某些特定的酶、受體等結(jié)合，從而發(fā)揮藥效。

本研究采用半仿生提取法提取盒果藤中的微量元素，從生物藥劑學(xué)的角度模仿口服藥物在胃腸道的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程進(jìn)行提取，依次在酸性及堿性環(huán)境下提取，體外模擬人體的酸堿環(huán)境，考察盒果藤中微量元素的溶出特點(diǎn)及形態(tài)變化。結(jié)果半仿生提取后，除Mn元素外，其他元素的提取率均較水提取率高，可能是改變提取溶劑的酸堿度后，提取時(shí)Cu、Zn、Fe、Ca、Mg、Sr的結(jié)合方式有所改變，部分無(wú)機(jī)態(tài)的元素在酸堿改變的情況下，與藥材中的有機(jī)成分結(jié)合，增加了溶出率。Mn元素可能是與植物中大分子化合物結(jié)合，不易被消解溶出。雖然提取率并未提高，但所溶出的Mn元素主要以正二價(jià)狀態(tài)存在，Mn2+為活性態(tài)，易氧化，故在酸性環(huán)境下受pH改變影響較大。半仿生提取后，無(wú)機(jī)態(tài)的Mn元素價(jià)態(tài)發(fā)生改變，其有機(jī)態(tài)/無(wú)機(jī)態(tài)比例明顯較水提物上升；Cu、Zn、 Fe、Ca、Mg、Sr等元素的有機(jī)態(tài)比例也明顯提高?？梢?jiàn)，盒果藤半仿生提取后，微量元素利用率也大大提高。

綜上，本研究所得出的結(jié)論僅對(duì)盒果藤治療白癜風(fēng)相關(guān)性較大的微量元素進(jìn)行了形態(tài)分析，并對(duì)水提取和半仿生提取進(jìn)行了單獨(dú)分析和比對(duì)，結(jié)果半仿生提取對(duì)微量元素的溶出和有效利用都較水提取高。本研究為今后該藥進(jìn)行工藝研究提供了參考依據(jù)，但仍需與有機(jī)成分結(jié)合進(jìn)行研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：6518.

[2] 霍仕霞，閆明，劉曉東，等.ICP-AES法測(cè)定盒果藤中的微量元素[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器，2009（1）：56-58.

[3] 盛麗，蘇碧泉.火焰原子吸收分光光度法測(cè)定銅操作條件的選擇[J].遼寧化工，2006，35（9）：557-559.

[4] 郭丹，陳娜娜，楊西曉，等.原子吸收分光光度法測(cè)定常通口服液中微量元素錳的含量[J].中國(guó)藥房，2005，16（18）：1414-1415.

[5] 張文利，袁思平，田超，等.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法在火焰原子吸收操作條件選擇中的應(yīng)用[J].甘肅環(huán)境研究與檢測(cè)，2003，16（3）：220-223.

[6] 張為人，張玉環(huán).正交試驗(yàn)在原子吸收操作條件選擇中的應(yīng)用[J].遼寧城鄉(xiāng)環(huán)境科技，2004，24（6）：34-36.

[7] 徐春秀，蔡龍飛，林鑫.原子吸收光譜法測(cè)定荸薺、蓮藕、蓮子中鐵、鋅、鈣的含量[J].韓山師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，28（3）：70-73.

[8] 謝善梅，申湘忠.楊桃中微量元素的測(cè)定[J].當(dāng)代化工，2007，36（6）：660-662.

[9] 張力，馬瑩瑩，徐玲，等.蒙藥材多葉棘豆中5種微量元素的形態(tài)分析[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2012，24（3）：345-347.

[10] 姚艷紅.草蓯蓉中微量元素次級(jí)形態(tài)的分析[J].延邊大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，38（1）：75-78.

[11] 霍仕霞，閆明.半仿生提取法測(cè)定補(bǔ)骨脂中的微量元素[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28（12）：1612-1615.

[12] 沈曉芳，張勇，楊成，等.黃芪中微量元素的形態(tài)分析[J].分析化學(xué)，2006，34（3）：396-399.

[13] 賴鶴鋆，吳云影.金銀花中9種微量元素初級(jí)形態(tài)分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（28）：11326-11328.

[14] 包玉敏，張力，徐玲，等.蒙藥材金蓮花中5種微量元素的形態(tài)分析[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（理學(xué)版），2011，49（2）：327-330.

[15] 賴鶴鋆.火焰原子吸收測(cè)定白茅根初級(jí)形態(tài)中微量元素含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（15）：3191-3194.

Comparison of Speciation Analysis of 7 Trace Elements in Opercalina turperthum by Water Extraction and Semi-bionic Extraction

XUANYUAN Huan1，DONG Wenjie1，LIU Chong2，HUO Shixia3（1.Dept.of Pharmacy，Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830002，China；2.Materia Medica Institute of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830004，China；3.Uighur Medicine Institute of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830049，China）

OBJECTIVE：To study the extraction rate and speciation of antivitiligo-related elements in Opercalina turperthum by water extraction and semi-bionic extraction.METHODS：Water extraction and semi-bionic extraction were respectively used.Water-soluble state and suspension state in extract of O.turperthum were separated by microporous filtering film；organic and inorganic trace elements in water-soluble state were separated by macroporous resin.The contents of Cu，Zn，F(xiàn)e，Ca，Mg，Mn and Sr were detected by flame atomic adsorption spectrophotometry，and speciation analysis was conducted.RESULTS：After water extraction，extraction rates of 7 trace elements were 40.47%-72.49%；ratio of suspended particles was 3.69%-8.78%；ratio of organic state/inorganic state was 104.36%in water-soluble state of Sr and 3.94%-48.39%in water-soluble state of Cu，Zn，F(xiàn)e，Ca，Mg，Mn.After semi-bionic extraction，except for Mn，extraction rates of trace elements were higher than water extraction，extraction rates of Cu，Zn，F(xiàn)e，Ca，Mg，Sr were 77.69%-90.19%；ratio of suspended particles was 0.39%-8.57%；the ratio of organic state/ inorganic state was 72.74%-180.79%in water-soluble state of elements.CONCLUSIONS：Cu，Zn，F(xiàn)e，Ca，Mg，Mn and Sr in O. turperthum are dissolved easily，mainly existing in the form of inorganic state.After semi-bionic extraction，except for Mn，the dissolution rate of other elements and the proportion of organic trace elements after dissolution increase significantly.Both dissolution and effective utilization rate of trace elements by semi-bionic extraction are higher than water extraction.

Opercalina turperthum；Water extraction；Semi-bionic extraction；Trace element；Flame atomic absorption spectrophotometry；Speciation analysis

R917

A

1001-0408（2017）22-3072-04

2016-11-06

2017-06-05）

（編輯：劉明偉）

新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（No.2016B03038-3-3）；新疆維吾爾自治區(qū)科技人才培養(yǎng)項(xiàng)目（No. qn2015yx042）

＊主管中藥師。研究方向：中藥學(xué)。電話：0991-6642410。E-mail：huoshixia1983@163.com

#通信作者：副研究員，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0991-6642410。E-mail：273932681@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.13