龍遠(yuǎn)春，張 欣，萬國棟，鄧澤元，張 兵,*

不同產(chǎn)地決明子蒽醌化合物組成及其抗氧化活性測定

龍遠(yuǎn)春1，張 欣2，萬國棟1，鄧澤元1，張 兵1,*

（1.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529156）

使用20%硫酸與氯仿同步水解萃取決明子總蒽醌，利用正交試驗(yàn)法優(yōu)化得到提取工藝為：提取溫度60 ℃、料液比1∶30（g/mL）、20%硫酸與氯仿溶劑體積比0.6、提取時(shí)間3 h。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法、2,2’-聯(lián)氮-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽法、鐵離子還原法測定不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，印度決明子蒽醌抗氧化活性明顯低于其他產(chǎn)地決明子，抗氧化活性總體順序?yàn)楹颖保竞幽希景不眨窘鳎旧綎|＞印度。采用高效液相色譜法分析6 個(gè)產(chǎn)地決明子6 種蒽醌含量，除了印度與河南產(chǎn)地決明子外，其他產(chǎn)地決明子大黃酚與橙黃決明素均達(dá)到了《中國藥典》對(duì)決明子蒽醌中大黃酚含量不少于0.2%，橙黃決明素含量不少于0.08%的要求。

決明子；蒽醌；抗氧化活性；高效液相色譜法

決明子為豆科植物決明（Cassia obtusifolia L.）的干燥成熟種子，味微苦，具有抗炎癥、抗糖尿病、明目清肝、潤腸通便等功效，是常用中藥[1]。決明子含有蒽醌類化合物、萘、吡酮、多糖、蛋白質(zhì)及氨基酸等多種活性成分[2]。國內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)決明子的活性成分進(jìn)行的大量研究表明主要功效成分為決明子蒽醌和多糖[3]。微波輔助[4]、超聲輔助[5]和超臨界萃取[6]等現(xiàn)代天然產(chǎn)物提取技術(shù)已經(jīng)被廣泛用來提取決明子蒽醌類化合物。李佳等[7]利用超聲輔助提取決明子游離蒽醌，并結(jié)合響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝，研究乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、超聲溫度、超聲時(shí)間及料液比對(duì)決明子游離蒽醌提取得率的影響。決明子蒽醌具有抗衰老、提高免疫力、降血壓抗氧化等生物活性[8]。作為傳統(tǒng)中藥材，決明子在國內(nèi)外都有大量種植。國內(nèi)產(chǎn)地主要包括廣西、湖北、江西、安徽、河南、河北、山東等，國外產(chǎn)地主要為東南亞國家如印度、泰國、越南等。決明子品質(zhì)受生長種植環(huán)境影響顯著，所以本實(shí)驗(yàn)首先利用正交試驗(yàn)優(yōu)化得到酸結(jié)合有機(jī)試劑同步提取決明子總蒽醌的最優(yōu)提取條件；然后比較不同產(chǎn)地決明子中主要活性成分蒽醌類化合物的含量并采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）分析蒽醌組成；利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2,2’-聯(lián)氮-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）、鐵離子還原法（ferric reducing antioxidant potential assay，F(xiàn)RAP）方法快速測定不同產(chǎn)地決明子蒽醌的抗氧化活性。通過比較不同產(chǎn)地決明子蒽醌含量、組成及其抗氧化活性，為更好開發(fā)利用決明子、指導(dǎo)決明子種植提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

成熟決明子產(chǎn)地分別為江西遂川、安徽高廟、河北任丘、河南鄧州、山東日照、印度進(jìn)口；DPPH、Fe3+-三吡啶三吖嗪（ferric-tripyridyltriazine，TPTZ）、ABTS、水溶性VE（Trolox）、濃硫酸、氯仿、1,8-二羥基蒽醌、甲醇、乙醇、醋酸鎂、硫代硫酸鉀、三水合醋酸鈉、冰醋酸、鹽酸溶液、FeCl3·6H2O（均為分析純） 西隴化工股份有限公司；大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素、橙黃決明素、磷酸（均為色譜純）美國阿拉丁公司；甲醇、乙腈（均為色譜純） 德國默克公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ELx800酶標(biāo)儀 美國BioTek公司；1260型HPLC儀美國安捷倫公司；722G可見分光光度計(jì) 上海精密儀器有限公司；TDL-5-A臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；恒溫水浴鍋 常州國華電器有限公司；FA24電子分析天平 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；DR-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 鄭州長城科工貿(mào)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 單因素試驗(yàn)

提取溫度的考察：固定料液比1∶20（g/mL），溶劑比（20%硫酸和氯仿的體積比，下同）0.4，提取時(shí)間為2 h，比較提取溫度分別為40、50、60、70 ℃（氯仿的沸點(diǎn)為61.2℃）對(duì)總蒽醌得率的影響。

料液比的考察：固定溶劑比0.4，提取時(shí)間為2 h，提取溫度60 ℃，比較料液比分別為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30對(duì)總蒽醌得率的影響。

溶劑比的考察：固定提取時(shí)間為2 h，提取溫度60 ℃，料液比1∶25，比較溶劑比分別為0.2、0.4、0.6、0.8對(duì)總蒽醌得率的影響。

提取時(shí)間的考察：固定提取溫度60 ℃，料液比1∶25，溶劑比0.6，比較提取時(shí)間分別為1、2、3、4 h對(duì)總蒽醌得率的影響。

1.3.2 正交試驗(yàn)法優(yōu)化決明子總蒽醌的提取工藝

決明子總蒽醌的提取工藝：準(zhǔn)確稱取5 g不同產(chǎn)地的干燥決明子粉末，采用體積分?jǐn)?shù)20%硫酸溶液（以濃鹽酸為基準(zhǔn)）和氯仿同步水解及萃取決明子總蒽醌[9]，控制一定的溶劑比、提取溫度、料液比、提取時(shí)間對(duì)決明子總蒽醌進(jìn)行提取。提取結(jié)束后分液，取下層液體揮干氯仿，用甲醇溶解并定容至25 mL，得到?jīng)Q明子總蒽醌溶液備用。

正交試驗(yàn)法優(yōu)化決明子總蒽醌提取工藝：在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn)，選取江西產(chǎn)地樣品提取總蒽醌，考察提取溫度、料液比、溶劑比、提取時(shí)間對(duì)決明子總蒽醌得率的影響[10]，如表1所示。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Code and level of factors used for orthogonal array design

1.3.3 決明子總蒽醌體外抗氧化活性的測定

1.3.3.1 DPPH自由基清除率的測定

參照Wang Yuanfeng[11]和韋獻(xiàn)雅[12]等的方法并進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，采用DPPH法測定決明子總蒽醌的抗氧化活性。樣品測定：準(zhǔn)確吸取100 μL的DPPH-甲醇溶液（0.065 mmol/L）與20 μL 7 個(gè)產(chǎn)地的決明子總蒽醌提取液或空白溶液混溶在96 孔板中，室溫條件下避光振蕩30 min，利用酶標(biāo)儀于波長517 nm處測定其吸光度。每個(gè)樣品設(shè)置3 個(gè)平行組，結(jié)果取其平均值。按公式（1）計(jì)算DPPH自由基清除能力：

式中：Ai為樣品溶液加DPPH試劑混合液的吸光度；Aj為樣品溶液加甲醇的吸光度；Ac為DPPH溶液加樣品的吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：以不同質(zhì)量濃度（12、25、37、50、62、75、87 μg/mL）的Trolox清除DPPH自由基的能力作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以清除率為縱坐標(biāo)，Trolox質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)。根據(jù)回歸方程計(jì)算決明子總蒽醌的Trolox當(dāng)量抗氧化能力（trolox equivalent antioxidant capacity，TEAC），結(jié)果以mg Trolox/g當(dāng)量表示，以干質(zhì)量計(jì)。

1.3.3.2 ABTS+·法測定抗氧化能力

參考van der Werf[13]和楊少輝[14]等的方法并進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，測定決明子總蒽醌清除ABTS+·的能力。樣品測定：用80%乙醇溶液稀釋ABTS工作液，使其在波長734 nm處吸光度為0.7，然后于96 孔板中分別加入200 μL ABTS稀釋溶液和20 μL決明子蒽醌樣品溶液，避光振蕩6 min，于波長734 nm處測定吸光度。每個(gè)樣品設(shè)置3 個(gè)平行組，結(jié)果取其平均值。ABTS+·清除率按公式（2）計(jì)算：

其中：A0為ABTS溶液和樣品溶劑混合液的吸光度；Ai為ABTS溶液和樣品溶液混合液的吸光度；Aj為80%乙醇溶液和樣品溶液吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：以不同質(zhì)量濃度（25、50、75、125、150 μg/mL）的Trolox清除自由基的能力作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以清除率為縱坐標(biāo)，Trolox質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)。根據(jù)回歸方程計(jì)算決明子蒽醌的TEAC，結(jié)果以mg Trolox/g當(dāng)量表示，以干質(zhì)量計(jì)。

1.3.3.3 FRAP測定

參照Gao Jie[15]和Wootton-Beard[16]等的測定方法，并進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，測定不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的FRAP。

樣品測定：在96 孔板中，依次加入10 μL決明子蒽醌提取液和300 μL的TPTZ工作液，室溫反應(yīng)30 min后，用酶標(biāo)儀測定593 nm波長處吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：配制質(zhì)量濃度25、75、125、175、225 μg/mL的Trolox溶液，在96 孔板中，依次加入10 μL不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)液和300 μL的TPTZ工作液，室溫反應(yīng)30 min后，用酶標(biāo)儀測定593 nm波長處吸光度。以Trolox溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。決明子總蒽醌的FRAP結(jié)果以mg Trolox/g表示，以干質(zhì)量計(jì)。

1.3.4 HPLC分析不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的組成及6 種蒽醌含量的測定

色譜條件：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5 μL）；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1%磷酸溶液，柱溫30 ℃；檢測波長284 nm[17]，進(jìn)樣量10 μL；梯度洗脫程序：0 min，65% A，35% B；10 min，70% A，30% B；25 min，80% A，20% B；32 min，100% A，0% B；35 min，100% A，0% B。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取大黃酚1.5 mg、大黃素1.0 mg、大黃素甲醚1.2 mg、大黃酸4.3 mg、蘆薈大黃素1.2 mg、橙黃決明素1.3 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL備用[18]。

1.3.4.1 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取江西產(chǎn)地決明子蒽醌樣品溶液5 μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，根據(jù)蒽醌回歸方程計(jì)算橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，并算出各個(gè)物質(zhì)含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）[19]。

1.3.4.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取江西產(chǎn)地決明子干燥粉末6 份各2.0 g，每份約0.5 g，精密稱定，按正交試驗(yàn)優(yōu)化方法提取總蒽醌，分別進(jìn)樣5 μL重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。計(jì)算每份樣品中橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量，并算出各個(gè)物質(zhì)含量的RSD[20]。

1.3.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取江西產(chǎn)地決明子蒽醌樣品溶液5 μL，分別在0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣，比較橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量的變化，并計(jì)算其RSD[21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密稱取干燥至恒質(zhì)量的1,8-二羥基蒽醌[22]適量，用甲醇溶解，配制1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并保存在棕色容量瓶中。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分別置于25 mL比色管中，用0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解，定容至刻度，搖勻，以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液為空白對(duì)照，于波長500 nm處測定吸光度。以吸光度作為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到直線回歸方程為y=4.090 3x-0.008 5，R2=0.999 7。

2.2 提取工藝條件的選擇

圖1 提取溫度對(duì)決明子總蒽醌得率的影響Fig. 1 Effect of temperature on the extraction yield of anthraquinones

2.2.1 提取溫度對(duì)決明子總蒽醌得率的影響由圖1可知，隨著提取溫度的升高，總蒽醌得率也隨之升高，提取溫度60 ℃時(shí)得率最大。繼續(xù)升高提取溫度，總蒽醌得率呈下降趨勢，這可能是由于提取溫度過高使得氯仿?lián)]發(fā)過快，溶劑減少導(dǎo)致提取所得總蒽醌減少。故而選取提取溫度50、60、70 ℃作為正交試驗(yàn)優(yōu)化水平。

2.2.2 料液比對(duì)決明子總蒽醌得率的影響

圖2 料液比對(duì)決明子總蒽醌得率的影響Fig. 2 Effect of solid/liquid ratio on the extraction yield of anthraquinones

由圖2可知，隨著液體比例增大，總蒽醌得率隨之增加，在料液比1∶25時(shí)，總蒽醌得率最大。繼續(xù)增加液體比例，總蒽醌得率反而下降，原因可能是隨著液體比例的增大，其他可以溶于硫酸-氯仿體系的化合物跟蒽醌類化合物產(chǎn)生競爭，溶液中溶出物增加，但雜質(zhì)相應(yīng)增加，導(dǎo)致蒽醌得率降低。選取料液比為1∶20、1∶25、1∶30設(shè)計(jì)正交優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.3 溶劑比對(duì)決明子總蒽醌得率的影響

圖3 溶劑比對(duì)決明子總蒽醌得率的影響Fig. 3 Effect of solvent ratio on the extraction yield of anthraquinones

由圖3可知，隨著20%硫酸與氯仿體積比增大，總蒽醌得率隨之增加，溶劑比為0.6時(shí)，總蒽醌得率達(dá)到最大。當(dāng)溶劑比大于0.6時(shí)，總蒽醌得率趨于平衡。主要原因可能是樣品中的結(jié)合蒽醌已經(jīng)被充分水解，繼續(xù)加大酸的量不會(huì)提高總蒽醌得率。選取溶劑比為0.4、0.6、0.8設(shè)計(jì)正交優(yōu)化試驗(yàn)。

圖4 提取時(shí)間對(duì)決明子總蒽醌得率的影響Fig. 4 Effect of extraction time on the yield of anthraquinones

2.2.4 提取時(shí)間對(duì)決明子總蒽醌得率的影響由圖4可知，隨著提取時(shí)間的延長，決明子總蒽醌得率不斷增加。在提取時(shí)間3 h時(shí)蒽醌得率達(dá)到最大值，之后提取時(shí)間延長，總蒽醌得率下降。選取提取時(shí)間為2、

3、4 h設(shè)計(jì)正交優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Orthogonal experimental design with experimental results

由表2可知，經(jīng)驗(yàn)證最優(yōu)條件為A2B3C2D2，即提取溫度60 ℃、料液比1∶30、溶劑比0.6、提取時(shí)間3 h。由極差分析[23]可知，影響決明子總蒽醌得率的因素主次順序依次為B＞D＞C＞A，即料液比＞提取時(shí)間＞溶劑比＞提取溫度。

2.2.6 不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的提取與含量測定結(jié)果

利用優(yōu)化提取條件，即提取溫度60 ℃、料液比1∶30、溶劑比0.6、提取時(shí)間3 h，提取來自江西、安徽、河北、河南、山東、印度共6 個(gè)產(chǎn)地決明子的總蒽醌并測定其總蒽醌含量。

表3 不同產(chǎn)地決明子總蒽醌含量的比較Table 3 Comparison of anthraquinone contents of samples from different origins

從表3可知，不同產(chǎn)地決明子總蒽醌含量有一定差異性（P＜0.05），其中河北產(chǎn)地決明子總蒽醌含量最高，印度產(chǎn)地的決明子總蒽醌含量最低。決明子總蒽醌含量受其種質(zhì)及生長環(huán)境的影響，所以不同產(chǎn)地的決明子總蒽醌含量有差異。

2.3 決明子總蒽醌抗氧化活性測定結(jié)果

對(duì)不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的DPPH自由基、ABTS+·清除能力，F(xiàn)RAP進(jìn)行了測定，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，如表4所示。

表4 Trolox清除DPPH自由基、ABTS+·及FRAP的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍Table 4 Regression equations, correlation coefficients and linear ranges for free radical scavenging and FRAP assays

表5 不同產(chǎn)地決明子總蒽醌體外抗氧化活性的測定Table 5 Antioxidant activity of anthraquinones extracted from samples from different regions

由表5可知，不同產(chǎn)地決明子蒽醌的抗氧化活性有一定差異，抗氧化活性能力總體順序?yàn)楹颖保竞幽希景不眨窘鳎旧綎|＞印度。由表3可知，不同產(chǎn)地決明子總蒽醌的含量順序?yàn)楹颖保窘鳎竞幽希旧綎|＞安徽＞印度。其他4 個(gè)產(chǎn)地決明子總蒽醌含量約為印度決明子總蒽醌含量的1.5 倍。決明子總蒽醌的DPPH自由基、ABTS+·清除能力及FRAP的測定結(jié)果以抗氧化劑Trolox作為對(duì)照[24]，由表4、5可知，ABTS法測體外抗氧化活性，每克干質(zhì)量的安徽、河北、河南、山東、江西決明子的TEAC約為印度產(chǎn)地的2.5 倍。DPPH法測體外抗氧化活性，每克干質(zhì)量的安徽、河北、河南、山東、江西決明子的TEAC約等于印度產(chǎn)地的2 倍。每克干質(zhì)量的安徽、河北、河南、山東、江西決明子的總蒽醌FRAP約等于印度樣品的2 倍。說明決明子總蒽醌的體外抗氧化能力與其含量呈一定的正相關(guān)性。

2.4 HPLC法測定決明子蒽醌的組成及其6 種蒽醌成分

2.4.1 不同產(chǎn)地決明子蒽醌類化合物組成的HPLC特征

圖5 不同產(chǎn)地決明子蒽醌組成及6 種蒽醌標(biāo)品HPLC圖譜Fig. 5 HPLC chromatograms of mixed standard solution of anthraquinones and anthraquinones extracted from samples from different regions

采用優(yōu)化方法提取得到的決明子總蒽醌進(jìn)行HPLC分析，吸取橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 mL混合得到6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液。樣品及混合標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)0.22 μm的有機(jī)濾頭過濾后進(jìn)樣，進(jìn)樣量為5 μL[25]。由圖5可知，橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚出峰時(shí)間依次為10.801、12.506、13.145、19.462、29.982、34.031 min。不同產(chǎn)地的決明子蒽醌HPLC色譜峰組成相似。精確稀釋1 mg/mL的橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)溶液母液到0.000 6～0.13 mg/mL范圍的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液[26]，進(jìn)樣量5 μL。以峰面積為縱坐標(biāo)，蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，6 種蒽醌成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍見表6。

表6 6 種蒽醌成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍Table 6 Regression equations, correlation coefficient sand linear ranges for six anthraquinones

表7 HPLC分析不同產(chǎn)地決明子蒽醌類化合物組成及含量Table 7 Composition and content of anthraquinones in samples from different regionsmg/g

由表7可知，江西產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酸＞大黃酚＞橙黃決明素＞大黃素甲醚＞蘆薈大黃素＞大黃素，安徽產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酚＞大黃酸＞橙黃決明素＞蘆薈大黃素＞大黃素＞大黃素甲醚，山東產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酸＞大黃酚＞橙黃決明素＞蘆薈大黃素＞大黃素甲醚＞大黃素，河北產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酚＞大黃酸＞橙黃決明素＞蘆薈大黃素＞大黃素甲醚＞大黃素，河南產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酚＞大黃酸＞蘆薈大黃素＞橙黃決明素＞大黃素＞大黃素甲醚，印度產(chǎn)地決明子的6 種蒽醌含量依次為大黃酚＞蘆薈大黃素＞大黃酸＞橙黃決明素＞大黃素甲醚＞大黃素，并且大黃酚含量均達(dá)到了《中國藥典》對(duì)決明子蒽醌中大黃酚含量（≥0.2%）的要求。除了印度與河南2 個(gè)產(chǎn)地外，其他4 個(gè)產(chǎn)地的橙黃決明素含量均達(dá)到了《中國藥典》對(duì)決明子蒽醌中橙黃決明素含量（≥0.08%）的要求[27]。江西、安徽、山東、河北、河南、印度決明子的6 種蒽醌含量總和依次為（8.12±0.22）、（6.31±0.21）、（7.56±0.95）、（9.38±0.01）、（7.63±0.40）、（4.91±0.05） mg/g。

2.4.2 方法學(xué)考察結(jié)果

2.4.2.1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)1.3.4.1節(jié)方法進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，測得江西產(chǎn)地決明子中橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量的RSD分別為0.37%、0.87%、0.74%、0.48%、0.53%、0.12%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.4.2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)1.3.4.2節(jié)方法進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，測得6 份江西產(chǎn)地決明子中橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量的RSD分別為1.99%、1.32%、1.66%、1.73%、1.41%、1.77%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，方法重復(fù)性良好。

2.4.2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)1.3.4.3節(jié)方法進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，測得決明子蒽醌樣品溶液在放置0、2、4、6、8、10、12 h后橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量的RSD分別為0.83%、0.65%、0.39%、0.33%、0.54%、0.36%，結(jié)果表明，決明子蒽醌樣品溶液的6 種成分在12 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

3 結(jié) 論

決明子作為一種藥食兩用的植物原材料[28]，被眾多學(xué)者研究開發(fā)利用。決明子中的蒽醌類化合物是一種主要活性物質(zhì)[29]，本實(shí)驗(yàn)使用20%硫酸與氯仿同步水解萃取決明子總蒽醌，并利用正交試驗(yàn)法優(yōu)化其提取工藝，分析提取溫度、料液比、溶劑比、提取時(shí)間對(duì)總蒽醌提取率的影響，由極差分析可知，影響決明子總蒽醌得率的因素主次順序依次為料液比＞提取時(shí)間＞溶劑比＞提取溫度。優(yōu)化得到的提取工藝為提取溫度60 ℃、料液比1∶30、溶劑比0.6、提取時(shí)間3 h。同時(shí)，對(duì)不同產(chǎn)地決明子蒽醌的DPPH自由基、ABTS+·清除能力，F(xiàn)RAP進(jìn)行了測定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地決明子蒽醌的抗氧化活性強(qiáng)弱有一定差異，其中產(chǎn)自印度的決明子蒽醌抗氧化活性明顯低于其他產(chǎn)地蒽醌抗氧化能力，不同產(chǎn)地抗氧化活性總體為河北＞河南＞安徽＞江西＞山東＞印度。雖然與TEAC相比，決明子蒽醌的抗氧化能力較弱，但作為一種天然的抗氧化劑也有一定的應(yīng)用價(jià)值[30]。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法分析不同產(chǎn)地決明子6 種蒽醌含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性及穩(wěn)定性良好，結(jié)果表明6 個(gè)產(chǎn)地決明子中的大黃酚含量都達(dá)到了《中國藥典》對(duì)決明子蒽醌中大黃酚含量（≥0.2%）的要求。除了印度與河南2 個(gè)產(chǎn)地外，其他4 個(gè)產(chǎn)地的橙黃決明素含量均達(dá)到了《中國藥典》對(duì)決明子蒽醌中橙黃決明素含量（≥0.08%）的要求。

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Anthraquinone Composition and Antioxidant Activity of Semen Cassiae from Different Regions

LONG Yuanchun1, ZHANG Xin2, WAN Guodong1, DENG Zeyuan1, ZHANG Bing1,*
(1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China; 2. Infinitus (China) Co. Ltd., Jiangmen 529156, China)

In this study, anthraquinones were obtained by the hydrolysis of Semen Cassiae with a mixture of 20% sulfuric acid and chloroform. By using an orthogonal array design method the optimal conditions for extraction were determined as follows: extraction temperature 60 ℃, liquid-to-solid ratio 1:30 (g/mL), 20% sulfuric acid-to-chloroform ratio 0.6, and extraction time 3 h. 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate (ABTS) radical scavenging and ferric reducing antioxidant potential (FRAP) assays were employed to determine the in vitro antioxidant activity of total anthraquinones extracted from Semen Cassiae from different regions. The results showed that the antioxidant capacity of total anthraquinones of Semen Cassiae from India was far lower than that of Semen Cassiae from any other selected region. The antioxidant activity of total anthraquinones extracted from Semen Cassiae from different growing regions was ranked as follows: Hebei ＞ Henan ＞ Anhui ＞ Jiangxi ＞ Shandong ＞ India. The present study also determined 6 anthraquinone components in Semen Cassiae by HPLC. Results showed that the contents of both chrysophanol and aurantioobtusifolin in Semen Cassiae from all regions from India and Henan were not lower than 0.2% and 0.08%, respectively, which reached the levels stated in the Pharmacopeia of China.

Semen Cassiae; anthraquinones; antioxidant activity; high performance liquid chromatography (HPLC)

10.7506/spkx1002-6630-201716023

R284.1

A

1002-6630（2017）16-0145-07

龍遠(yuǎn)春, 張欣, 萬國棟, 等. 不同產(chǎn)地決明子蒽醌化合物組成及其抗氧化活性測定[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(16): 145-151. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201716023. http://www.spkx.net.cn

LONG Yuanchun, ZHANG Xin, WAN Guodong, et al. Anthraquinone composition and antioxidant activity of Semen Cassiae from different regions[J]. Food Science, 2017, 38(16): 145-151. (in Chinese with English abstract)

10.7506/ spkx1002-6630-201716023. http://www.spkx.net.cn

2016-10-14

食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室青年基金項(xiàng)目（SKLF-QN-201519）

龍遠(yuǎn)春（1989—），女，碩士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物提取與應(yīng)用。E-mail：757364102@qq.com

*通信作者：張兵（1984—），男，助理研究員，博士，研究方向?yàn)槭称窢I養(yǎng)與健康。E-mail：zhangbingair@hotmail.com