周 瑾 趙 亮 周昶銳 李 洋 王 慧 呂 磊

上海東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438

扶正平消膠囊的薄層色譜鑒別研究

周 瑾 趙 亮 周昶銳 李 洋 王 慧 呂 磊*

上海東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438

目的：建立扶正平消膠囊薄層色譜鑒別方法，以提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：基于藥典中單味藥材的薄層方法進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)組方中2味君藥黃芪、龍膽，1味臣藥浙貝母，1味毒性藥材狼毒進(jìn)行鑒別。結(jié)果：組方中4味藥材的薄層鑒別顯示，供試品斑點(diǎn)清晰，與對(duì)照品位置一致，可納入新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論：研究建立的扶正平消膠囊薄層鑒別方法，簡(jiǎn)便可行，可為該制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

扶正平消膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別

扶正平消膠囊以中醫(yī)學(xué)中氣滯血瘀、熱毒內(nèi)蘊(yùn)、肝失疏泄、氣陰兩虛腫瘤的病機(jī)理論為基礎(chǔ)，采用行氣破血、扶正抗邪的抗癌中藥進(jìn)行對(duì)癥治療，是我院結(jié)合臨床長(zhǎng)期研究，篩選精煉組方而制成，用于治療原發(fā)性肝癌的經(jīng)驗(yàn)方劑[1-3]，在臨床使用十余年來，獲得醫(yī)生和患者的一致好評(píng)。扶正平消膠囊由黃芪、玄參、夏枯草、吳茱萸、龍膽等28味中藥組成[4-5]，工藝復(fù)雜，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究和提高，對(duì)于保持該制劑質(zhì)量及療效穩(wěn)定，具有十分重要的臨床意義[6-7]。本研究對(duì)扶正平消膠囊中2味君藥黃芪、龍膽，1味臣藥浙貝母，1味毒性藥材狼毒進(jìn)行薄層鑒別研究，為該制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 索尼DSC數(shù)碼相機(jī)(索尼<中國(guó)>有限公司)；DHG恒溫烘箱(上海合恒儀器設(shè)備有限公司)；ZF臺(tái)式紫外分析儀(杭州齊威儀器有限公司)；展開缸(上海華連科技有限公司)；PW超純水系統(tǒng)(香港Heal Force公司)。

1.2 材料 扶正平消膠囊(批號(hào)20160501)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)110781-201616)、龍膽苦苷對(duì)照品(批號(hào)110770-201613)、貝母素甲對(duì)照品(批號(hào)110750-201612)、狼毒對(duì)照藥材(批號(hào)121331-201303)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠G薄層層析板(青島海洋化工廠)，甲醇、三氯甲烷、氨水、無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、碘化鉍鉀、正己烷、乙酸酐、濃硫酸，均為分析純，水為純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 龍膽 取扶正平消膠囊內(nèi)容物1g，加甲醇25mL，超聲提取30min，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 浙貝母 取扶正平消膠囊內(nèi)容物5g，加濃氨試液2mL與三氯甲烷20mL，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 狼毒 取扶正平消膠囊內(nèi)容物10g，加40mL氨試液，攪拌使溶解，放置過夜；過濾，殘?jiān)訜o水乙醇100mL，回流提取1h，冷卻，濾過；濾液蒸干，加乙醇2mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.4 黃芪 取扶正平消膠囊內(nèi)容物11.25g，加甲醇100mL，超聲提取1h，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑為10～15mm)上，用40%甲醇200mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次20mL，棄去水液，正丁醇蒸干，殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

2.2.1 龍膽 取龍膽苦苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 浙貝母 取貝母素甲對(duì)照品適量，加三氯甲烷制成每1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 狼毒 取狼毒對(duì)照藥材0.5g，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.4 黃芪 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 陰性樣品的制備 以取缺該味藥材的其他中藥飲片依照處方和制法制得膏滋，按照供試品溶液的制備方法分別制得4種陰性樣品溶液。

2.4 薄層檢識(shí)

2.4.1 龍膽 吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(20∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)斑點(diǎn)位置處，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)位置上無相應(yīng)斑點(diǎn)。如圖1所示。

2.4.2 浙貝母 吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)斑點(diǎn)位置處，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)位置上無相應(yīng)斑點(diǎn)。如圖2所示。

2.4.3 狼毒 吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新配的醋酐-濃硫酸(1∶1)溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)斑點(diǎn)位置處，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)位置上無相應(yīng)斑點(diǎn)。如圖3所示。

2.4.4 黃芪 吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)斑點(diǎn)位置處，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)位置上無相應(yīng)斑點(diǎn)。如圖4所示。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化 4種藥材的薄層鑒別均參考了藥典中單味藥材的鑒別方法[8]，而根據(jù)復(fù)方制劑的復(fù)雜性，各組方含量低的特點(diǎn)，筆者對(duì)最終的薄層方法進(jìn)行了一定的優(yōu)化，以達(dá)到鑒別的最佳效果。龍膽的鑒別，展開劑的比例進(jìn)行了調(diào)整，原方法乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)，調(diào)整為乙酸乙酯-甲醇-水(20∶2∶1)，調(diào)整后斑點(diǎn)的位置更為合理；浙貝母的鑒別，藥典中采用貝母素甲和貝母素乙2種成分的混合對(duì)照進(jìn)行薄層鑒別，考慮到浙貝母中的貝母素甲的含量約為貝母素乙的2倍，結(jié)合本方的復(fù)雜性，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)化了方法，單用貝母素甲來鑒別，得到了比較穩(wěn)定的結(jié)果；狼毒的鑒別，回流提取前增加了氨水浸泡過夜的操作，展開劑由環(huán)己烷-乙酸乙酯(8.5∶1.5)，調(diào)整為正己烷-乙酸乙酯(9∶1)，噴以10%硫酸乙醇溶液在365nm紫外光下檢視，調(diào)整為噴以新配的醋酐-濃硫酸(1∶1)溶液在日光下檢視，調(diào)整后斑點(diǎn)更為清晰；黃芪的鑒別，以簡(jiǎn)易的超聲提取代替了回流操作，展開劑由三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)，調(diào)整為正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)，調(diào)整后的方法鑒別效果良好。

3.2 對(duì)玄參、夏枯草的條件優(yōu)化探索 研究計(jì)劃加入組方中君藥玄參和夏枯草的薄層鑒別，其中玄參以哈巴俄苷為對(duì)照，夏枯草以迷迭香酸為對(duì)照。玄參按藥典方法先采用甲醇超聲提取，然后水飽和正丁醇提取2次，蒸干后甲醇定容，以三氯甲烷-甲醇-水(12∶4∶1)為展開劑，展開晾干后，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色。實(shí)驗(yàn)中樣品在對(duì)照品相應(yīng)位置沒有明顯斑點(diǎn)，對(duì)展開劑進(jìn)行調(diào)整后，結(jié)果仍不理想，未列入新標(biāo)準(zhǔn)中。夏枯草按藥典方法采用70%乙醇提取，用環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲酸(15∶3∶3.5∶0.5)展開，在紫外光(365nm)下檢視。樣品在對(duì)照品相應(yīng)位置沒有明顯的斑點(diǎn)。后加入了AB-8大孔樹脂富集純化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍不理想，未列入新標(biāo)準(zhǔn)中。

綜上，扶正平消膠囊的薄層鑒別研究結(jié)果顯示，君藥黃芪和龍膽，臣藥浙貝母，毒性藥材狼毒的供試品與對(duì)照品在相應(yīng)位置均顯同色斑點(diǎn)，可以納入新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本研究建立的扶正平消膠囊薄層鑒別方法，簡(jiǎn)便易行，可為該制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

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Research on TLC Identification of Fuzhengpingxiao Capsule

ZHOU Jin ZHAO Liang ZHOU Changrui LI Yang WANG Hui LV Lei*

Department of Pharmacy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Shanghai 200438,China

Objective The study was aimed to establish a thin layer chromatography (TLC) method to improve quality standard of FuZhengPingXiao capsule. Methods The optimized method was based on the TLC method of single prescription in Pharmacopoeia, and applied to Radix Astragali and Radix Gentianae (monarch drug), Bulbus Fritillariae Thunbergii (official medicine), Stellera chamaejasme (toxic herb). Results The TLC identification of four species from the prescription showed that the spots of the test samples were clear and consistent with the control ones. They can be incorporated into the new quality standards. Conclusion The TLC identification method established by our study is simple and feasible, which can provide scientific basis for the quality control of the preparation.

Fuzhengpingxiao Capsule; Quality Standard; TLC Identification

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)單品種研究-扶正平消膠囊標(biāo)準(zhǔn)研究(NO：14TG0700)。

周瑾(1985-)，女，漢族，本科，藥師，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)。E-mail：aglie@126.com

呂磊(1984-)，男，漢族，碩士研究生，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)及體內(nèi)代謝研究。E-mail：k_owen2002@126.com

R284.1

A

1007-8517(2017)16-0024-03

2017-06-08 編輯：程鵬飛)