郭志鵬， 宗士寅,2#， 張靖雪， 王苗利， 曲 根， 管永卓， 嚴學兵， 郭玉霞*

(1. 河南農業(yè)大學牧醫(yī)工程學院， 河南 鄭州 450002；2. 鄭州市市直機關服務中心， 河南 鄭州 450007)

隨著城市化進程的加快，人們對環(huán)境質量的要求越來越高。具有美化環(huán)境、休憩、游覽、運動等功效的草坪越來越受到人們的重視[1]。草坪分為冷季型草坪和暖季型草坪，其中冷季型草坪具有綠期長，抗寒性強等特點，在我國北方城市綠化中占有較大的比重[2]。草坪建植過程中，病害是影響草坪利用價值、遏制當今草坪業(yè)發(fā)展的主要因素之一[3-6],其中真菌病害占病害總數(shù)的80%以上。截至1994年，僅我國記錄的禾本科草坪草和牧草的病原真菌就有391種[7]，目前國內外已有多位學者通過調查研究對草坪的主要病害種類，危害狀況，分布情況做了詳細記錄[8-15]，并提出了相對應的綜合防治措施[16-19]。本試驗旨在明確鄭州地區(qū)冷季型草坪草根部病害病原真菌種類，以便做好管理和防治工作，為綠化管理提供指導。

1 材料與方法

1.1 試驗地概況

2013年4月于草坪草病害發(fā)生的早期開始，在河南省鄭州市所轄的人民公園、綠蔭廣場、碧沙崗公園、市政府南院，綠城廣場，紫荊山公園，文博公園，河南農業(yè)大學校園(簡稱農大校園)8個地點進行取樣。這8個地方的草坪均由多年生黑麥草(Loliumperenne)，草地早熟禾(Poapratensis)和高羊茅(Festucaarundinacea)三種冷季型草坪草混播建植于2011年。其中，農大校園和紫荊山公園的草坪管理水平較好，草坪質量較高。綠蔭廣場、碧沙崗公園、市政府南院和文博公園、人民公園和綠城廣場的草坪管理水平中等，草坪質量尚好。鄭州地區(qū)氣候溫和，四季分明，年平均氣溫14.3℃，年降水總量約400 mm，年日照時間2 348.3 h，平均無霜期209～233 d，歷年最熱月(7月)平均溫度27.3℃，歷年最冷月(1月)平均溫度 -2℃。該區(qū)土壤富含有機質，有機質含量為2.160%。

1.2 試驗材料與取樣

2013年4月1-7日于混播草坪上隨機采取Z字形法進行多年生黑麥草，草地早熟禾和高羊茅的根部取樣。每種草在各采樣地內分別隨機取12株根樣。取樣深度為0～30 cm，用鐵锨挖出根樣，將取好的根樣連同土壤裝進塑料袋內，封好口，用記號筆在袋上做好標注，帶回實驗室放于4℃冷藏箱備用。

1.3 根部入侵真菌的分離

根據(jù)Nan[20]的方法，分離各供試草根樣的真菌。在自來水下沖洗干凈，于0.3%次氯酸鈉溶液中表面消毒1 min，用無菌水沖洗3次，在無菌濾紙(130℃烘箱烘烤5 h)上吸干沾附水分，然后在無菌濾紙上隨機將根系切為2 mm左右的根段，在含有青、鏈霉素各100 mg·L-1的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (ABPDA) 上培養(yǎng)，每個培養(yǎng)皿放置10段根段，最后將培養(yǎng)皿移入20℃黑暗恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。從第3天起及時統(tǒng)計每個培養(yǎng)皿帶菌根段數(shù)，并及時將分離到的真菌菌落分別轉接到PDA培養(yǎng)基上，在20℃下進行純化培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)，供進一步鑒定及下一步試驗備用[21]。待實驗結束時，分別計算每個培養(yǎng)皿的根段帶菌率(%)及各真菌分離率(%)。計算公式如下：

1.4 真菌的鑒定

對純化的每個真菌菌落，詳細觀察記載其菌落大小、形態(tài)及在PDA培養(yǎng)基上的顏色，逐一制片鏡檢，根據(jù)資料[22-27]將其鑒定到種，個別真菌鑒定到屬。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

用Microsoft Excel 2010進行數(shù)據(jù)處理及DPS 6.55 Patch軟件對數(shù)據(jù)進行完全隨機單因素有重復反正弦轉化的處理、統(tǒng)計分析和差異顯著性測定。

2 結果與分析

2.1 不同地點高羊茅根部入侵真菌的分離率

由表1可以看出，各取樣地高羊茅的根段帶菌率不相同，由高到低依次為人民公園>碧沙崗公園>綠城廣場>市政府南院>綠蔭廣場>文博廣場>紫荊山公園>農大校園。其中，紫荊山公園和農大校園的根段帶菌率顯著低于其余6個取樣地(P<0.05)。從8個取樣地的高羊茅根部共分離出8種真菌。其中，細交鏈孢、尖孢鐮孢和枝孢的分離率較高。8個取樣地的腐皮鐮孢、銳頂鐮孢和多隔鐮孢3種真菌的分離率均無顯著差異。農大校園的尖孢鐮孢分離率顯著低于與其他7個取樣地(P<0.05)。人民公園，碧沙崗公園，綠城廣場和市政府南院的細交鏈孢分離率顯著高于其他4個取樣地(P<0.05)。人民公園和市政府南院的柱孢分離率顯著高于其他6個取樣地(P<0.05)。綠城廣場的枝孢分離率與其他7個取樣地無顯著性差異，文博廣場和農大校園的枝孢分離率顯著高于除綠城廣場外的其他5個取樣地(P<0.05)。市政府南院的德氏霉分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)。

表1 不同地點高羊茅根部入侵真菌的分離率Table 1 Isolation rate of tall fescue (Festuca arundinacea) root-invading fungi in different place/%

注：同列不同字母者表示不同取樣地點間差異顯著(P<0.05)，下同

Note: Different lower cases letters in the same column indicate significant difference at the 0.05 level. The same as below

2.2 不同地點草地早熟禾根部入侵真菌的分離率

由表2可以看出，各取樣地草地早熟禾的根段帶菌率由高到低依次為人民公園>碧沙崗公園>綠城廣場>市政府南院>綠蔭廣場>文博廣場>紫荊山公園>農大校園。市政府南院與其他其7個取樣地的根段帶菌率無顯著差異，人民公園、碧沙崗公園、綠城廣場的根段帶菌率顯著高于除了市政府南院外其他4個取樣地(P<0.05)。從8個取樣地的草地早熟禾根部共分離出11種真菌，其中，細交鏈孢、尖孢鐮孢和枝孢的分離率較高。8個取樣地的葡柄霉、銳頂鐮孢、擬枝孢鐮孢、多隔鐮孢和絲核菌5種真菌的分離率均無顯著差異。人民公園、碧沙崗公園和綠城廣場的尖孢鐮孢分離率顯著高于其他5個取樣地(P<0.05)。碧沙崗公園和綠城廣場的細交鏈孢分離率顯著高于其他6個取樣地(P<0.05)。市政府南院的半裸鐮孢分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)。人民公園的柱孢分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)。農大校園的枝孢分離率顯著低于與其他7個取樣地(P<0.05)。綠蔭廣場的德氏霉分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)。

2.3 不同地點多年生黑麥草根部入侵真菌的分離率

由表3可以看出，各取樣地多年生黑麥草的根段帶菌率由高到低依次為綠城廣場>人民公園>綠蔭廣場>文博廣場>市政府南院>紫荊山公園>碧沙崗公園>農大校園。市政府南院和紫荊山公園的根段帶菌率與其他6個取樣地無顯著差異，碧沙崗公園和農大校園的根段帶菌率顯著高于除了市政府南院和紫荊山公園外其他4個取樣地(P<0.05)。從8個取樣地的多年生黑麥草根部共分離出10種真菌，其中，細交鏈孢，尖孢鐮孢，枝孢的分離率較高。8個取樣地的絲核菌、多隔鐮孢、疫霉、銳頂鐮孢和擬枝孢鐮孢5種真菌的分離率均無顯著差異(P<0.05)。綠城廣場的尖孢鐮孢分離率顯著高于其他7個取樣地，農大校園的尖孢鐮孢分離率顯著低于其他7個取樣地(P<0.05)。人民公園、碧沙崗公園、紫荊山公園和農大校園的細交鏈孢分離率顯著低于其他4個取樣地(P<0.05)。人民公園的柱孢和枝孢分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)，市政府南院、文博廣場、紫荊山公園和農大校園的枝孢分離率顯著低于其他4個取樣地(P<0.05)。市政府南院的德氏霉分離率顯著高于其他7個取樣地(P<0.05)。

表2 不同地點草地早熟禾根部入侵真菌的分離率Table 2 Isolation rate of bluegrass (Poa pratensis) root-invading fungi in different place/%

表3 不同地點多年生黑麥草根部入侵真菌的分離率Table 3 Isolation rate of perennial reygrass (Lolium perenne) root-invading fungi in different place/%

2.4 3種冷季型草坪草的帶菌率

由表4可以看出，3種草坪草的根段帶菌率各不相同，但差異不顯著，其根段帶菌率由高到低依次是多年生黑麥草>高羊茅>草地早熟禾。從3種草坪草的根部共分離出13種真菌，這13種真菌分別在3種草坪草中的根段分離率均差異不顯著，其中半裸鐮孢和匍柄霉僅在草地早熟禾中少量分離到，腐皮鐮孢僅在高羊茅中少量分離到，疫霉僅在多年生黑麥草中少量分離到。3種草坪草中分離出的真菌種類各不相同，由高到低依次是草地早熟禾11種，多年生黑麥草10種，高羊茅8種。在三種草坪草中均有較高帶菌率的細交鏈孢、尖孢鐮孢和枝孢，由高到低依次是細交鏈孢>尖孢鐮孢>枝孢。其余各類真菌在這三種草坪草中的帶菌率相對較低。

表4 3種冷季型草坪草的帶菌率及其根部入侵真菌的分離率Table 4 Isolation rate of root-invading fungi among 3 kinds of turf grasses/%

3 討論與結論

通過對鄭州地區(qū)8個采樣地的3種冷季型草坪草的根部入侵真菌的分離鑒定，明確了鄭州地區(qū)草坪草根部病害的病原真菌有細交鏈孢、尖孢鐮孢、枝孢和柱孢等13種真菌種類，其中出現(xiàn)頻率較高的是細交鏈孢、尖孢鐮孢和枝孢。這一結果與我國其他地區(qū)草坪草根部病害病原菌種類大致相同[8,28-35]。但與孫炳劍等[36]在2001年對鄭州地區(qū)冷季型草坪草根腐病病原鑒定，認為的引起鄭州市冷季型草坪草根腐病的優(yōu)勢病原菌為茄腐鐮刀菌和立枯絲核菌不同。梁倩倩等[37]認為，臭氧、溫室效應、酸雨 N、S 沉降、干旱脅迫、外來生物入侵、人類活動均會對菌根真菌產生明顯地影響。鄭州地區(qū)主要病原菌的變化可能與這幾年的氣候變化有關，也可能與城市快速建設引起的環(huán)境變化等有關。

草坪病害防治應以預防為主，將防病工作貫穿于整個養(yǎng)護過程，培育出自身抵抗能力強的健康的草坪草[10]。許多學者認為通過不同草種、不同品種的混播，可有效降低草坪發(fā)病率[38-40]。種衣劑處理草種后播種，對防治草坪草根腐病效果較好[41]。Liu[42]等認為，鑭元素能有效抑制禾本科植物疾病的發(fā)生，并促進其生長發(fā)育。調查顯示農大校園草坪管理水平精細于其他7個地方，說明草坪草的抗病情況也與草坪的后期管理水平有關。此外在取樣過程中還發(fā)現(xiàn)在混播草坪中高羊茅健康狀況良好，在試驗過程中得出高羊茅根部帶菌率較低，這主要與高羊茅內生真菌有關，這些內生真菌已與寄主形成互利的共生體，對提高草坪草根部的抗病性有重要意義[43]。

綜上所述，可以得出以下結論：鄭州地區(qū)冷季型草坪的主要致病菌是細交鏈孢、尖孢鐮孢和枝孢。混播草坪中多年生黑麥草的帶菌率最高、易感染真菌病害、抗性最弱，高羊茅次之，草地早熟禾的帶菌率最低、抗性最強。