馮國麗

(遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，貴州 遵義 563000)

甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50的表達及相關性

馮國麗

(遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，貴州 遵義 563000)

目的探討甲狀腺癌組織中高遷移率族蛋白(HMG)B1、核因子(NF)-κB p50的表達及相關性。方法選擇該院甲狀腺乳腺外科2014年3月至2016年3月收集的100例甲狀腺癌組織標本，另選擇同期該院收集的腺瘤組織20例、甲狀腺腫組織20例、正常組織20例作為對照，應用免疫組織化學SP法檢測各組織HMGB1、NF-κB p50的表達情況及相關性。結果甲狀腺癌組織HMGB1、NF-κB p50陽性表達顯著高于腺瘤組織、甲狀腺腫組織和正常組織(P<0.05)。甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50陽性表達與性別、年齡、組織類型無關(P>0.05)，與腫瘤直徑、淋巴結轉移有關(P<0.05)。甲狀腺癌組織中HMGB1表達與NF-κB p50表達呈正相關(Rs=0.743，P=0.000)。結論甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50呈異常表達，其表達水平與腫瘤直徑、淋巴結轉移有關，HMGB1、NF-κB p50高表達可能與甲狀腺癌的發(fā)病有關。

甲狀腺癌組織；HMGB1；核轉錄因子p50

甲狀腺癌占頭頸部腫瘤的90%以上〔1〕。目前關于甲狀腺癌的發(fā)病機制仍未完全明確，其中Ras、myc、met等多種癌基因異常激活以及p53、p16等抑癌基因的失活在甲狀腺癌發(fā)病中起到重要作用〔2〕。高遷移率族蛋白(HMG)B1是一種重要的核內結合蛋白，在基因的重組、復制、修復中起重要作用。研究表明，HMGB1可以通過激活Ras信號通路促進細胞異常增殖〔3〕。核因子(NF)-κB p50是NF-κB的重要成員，可以通過調節(jié)炎癥因子的表達促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展〔4〕。本研究探討甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50的表達及相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科2014年3月至2016年3月收集的100例甲狀腺癌組織標本，納入標準：均取自手術切除的新鮮組織，并經(jīng)手術和病理確診。排除標準：繼發(fā)性腫瘤；近1個月內接受放、化療治療者；其他內分泌疾病患者。甲狀腺癌患者包括68例乳頭狀癌、30例濾泡癌及2例髓樣癌，其中男30例，女70例，年齡41～75〔平均(52.3±5.8)〕歲，存在淋巴結轉移51例，無淋巴結轉移49例，腫瘤直徑≥1.0 cm 65例，<1.0 cm 35例；另外收集20例甲狀腺腺瘤患者的甲狀腺腺瘤組織，其中男6例，女14例，年齡42～72〔平均(51.5±4.9)〕歲；20例結節(jié)性甲狀腺腫患者的結節(jié)性甲狀腺腫組織，其中男7例，女13例，年齡41～75〔平均(50.9±6.2)〕歲；20例正常的甲狀腺組織，其中男7例，女13例，年齡40～76〔平均(51.5±6.7)〕歲，各組性別、年齡無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1蘇木素-伊紅(HE)染色 (1)脫蠟處理；(2)進行水化；(3)在1%的鹽酸酒精中分化1～3 s，用清水沖洗10～30 s去掉分化液；(4)用0.5%伊紅水液染色處理1～4 min，用蒸餾水過洗1～2 s；(5)進行梯度酒精脫水；(6)將切片浸泡在二甲苯中5 min；(7)中性樹膠封片。

1.2.2免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶鏈接(SP)法染色 使用免疫組織化學SP法檢測HMGB1及NF-κB p50在甲狀腺癌、甲狀腺腺瘤、甲狀腺腫、甲狀腺正常組織中的表達。(1)熔蠟：把組織切片從4℃冰箱中取出，放置在60℃烤箱烘烤約半小時；(2)脫蠟水化處理；(3)清洗；(4)抗原進行熱修復：HMGB1及NF-κB p50依據(jù)抗體的具體要求使用檸檬酸抗原修復液進行修復處理；(5)阻礙內源性的過氧化物酶活性；(6)封閉非特異性抗原；(7)滴加兔抗人HMGB1一抗、兔抗人NF-κB p50一抗，試劑盒購自上海田源生物技術有限公司；(8)在第2日取出濕盒，放在室溫之下約1 h，使其恢復至室溫，使用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，每次沖洗5 min；(9)滴加二抗，試劑盒購自上海田源生物技術有限公司；(10)滴加辣根酶標記鏈霉卵白素液；(11)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)底物顯色；(12)復染以及分化；(13)梯度酒精脫水以及封片。免疫組化試劑盒購自上海信譽科技有限公司，兔抗人HMGB1多克隆抗體。使用已知的HMGB1及NF-κB p50陽性表達的甲狀腺癌切片作為陽性對照，染色結果均呈陽性，使用PBS代替一抗作為陰性空白對照，染色結果作為陰性。

1.3結果評定 HMGB1及NF-κB p50依據(jù)相關文獻確定免疫組織化學結果判定標準〔5〕：陽性細胞百分率<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；細胞質不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以上兩者乘積為綜合得分，0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性()，>6分為強陽性()，陽性率為+、以及例數(shù)之和與總例數(shù)的占比。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS21.0軟件進行χ2、t檢驗和Spearman等級相關法。

2 結 果

2.1甲狀腺癌、非癌組織中HMGB1蛋白表達 甲狀腺癌組織HMGB1陽性率(70.00%，-30例，+25例，24例，21例)顯著高于腺瘤組織(30.00%，-14例，+3例，3例，0例)、甲狀腺腫組織(25.00%，-15例，+2例，2例，1例)和正常組織(10.00%，-18例，+1例，1例，0例)(χ2=36.826,P=0.000)。

2.2甲狀腺癌、非癌組織中NF-κB p50表達 甲狀腺癌組織NF-κB p50陽性率(72.00%，-28例，+25例，26例，21例)顯著高于腺瘤組織(35.00%，-13例，+3例，4例，0例)、甲狀腺腫組織(30.00%，-14例，+3例，2例，1例)和正常組織(10.00%，-18例，+2例0例，0例)(χ2=36.211,P=0.000)。見表1。

2.3甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50與患者臨床病理特征的關系 甲狀腺癌組織中HMGB1、NF-κB p50陽性表達與性別、年齡、組織類型無關(P>0.05)，與腫瘤直徑、淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表1。

表1 甲狀腺組織中HMGB1、NF-κB p50與臨床資料的相關性〔n(%)〕

2.4甲狀腺癌中HMGB1、NF-κB p50表達的相關性 甲狀腺癌中HMGB1表達與NF-κB p50表達呈正相關(Rs=0.743，P=0.000)。其中NF-κB p50+,HMGB1+62例，-10例；NF-κB p50-，HMGB1+8例，-20例。

3 討 論

甲狀腺癌約占全身惡性腫瘤的1%〔6〕。有報道顯示我國甲狀腺癌發(fā)病率每年增長4%。鏡下形態(tài)學的病理診斷是甲狀腺癌診斷的金標準〔7〕。但該診斷方法對于甲狀腺病變的鑒別仍有一定困難。近年來分子診斷在惡性腫瘤的診斷中起到了重要作用。

HMGB1是近年來發(fā)現(xiàn)的存在于真核細胞核內的非組蛋白染色體結合蛋白，當體內細胞處于穩(wěn)態(tài)時，HMGB1主要存在于細胞核〔8〕。當外界有適當?shù)男盘柎碳ぜ毎麜r，HMGB1賴氨酸殘基被乙?；?，然后釋放到細胞外，在DNA的重組、復制和修復中起到重要的作用。Liao等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1可以通過激活Ras和MAPK信號通路，促進炎癥反應和細胞異常增殖，在細胞惡變中起到重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、胰腺癌、肺癌等多種腫瘤中HMGB1呈高表達〔10〕。NF-κB為轉錄因子蛋白家族的重要成員，包括Rel、p65、RelB、p50和p52 5個亞單位，其中p50和p52為同源二聚體，它們在細胞內通常各自以其前體形式存在，當遇到有害刺激時，p50和p52 加入細胞核中，并改變細胞信號傳導，促進癌變的發(fā)生〔11〕。研究證實，NF-κB p50與食管癌、胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤有關〔12〕。本研究結果符合Kalra等〔13〕和Vuong等〔14〕研究結果。表明HMGB1、NF-κB p50與甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展有密切關系。Liao等〔9〕的研究結果推測其可能機制是NF-κB p50在多種促癌因素作用下上調抗細胞凋亡因子的表達，抑制了細胞凋亡，而HMGB1可以通過激活Ras和MAPK信號促進炎癥反應和細胞異常增殖，從而起到促進甲狀腺癌發(fā)生的作用。另外本研究結果提示HMGB1、NF-κB p50的表達與甲狀腺癌的惡性生物學行為有關，HMGB1、NF-κB p50在甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展中可能起到重要作用，而通過對甲狀腺癌組織HMGB1、NF-κB p50表達情況的檢測可以對甲狀腺癌的輔助診斷提供參考依據(jù)。

本研究還提示HMGB1與NF-κB p50可能共同參與甲狀腺癌的發(fā)病。筆者推測NF-κB p50可能通過上調抗細胞凋亡因子的表達，促進HMGB1的表達，兩者在甲狀腺癌的發(fā)病中起到協(xié)同作用，其具體機制有待于進一步研究證實。而臨床上通過HMGB1、NF-κB p50的聯(lián)合檢測可進一步提高甲狀腺癌的診斷率，為臨床治療提供依據(jù)。

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〔2017-01-07修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

馮國麗(1982-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事普外科方面的研究。

R73

A

1005-9202(2017)17-4286-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.056