王 芳 趙 珺 楊生森 馬臻奇 張洪芳 綻永華 郜 茜

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810001)

胃腺癌組織微管解聚蛋白1和突變型P53的表達(dá)及意義

王 芳 趙 珺1楊生森 馬臻奇 張洪芳 綻永華 郜 茜

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810001)

目的應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)胃腺癌中微管解聚蛋白(Stathmin)1和突變型P53(TP53)的表達(dá)，分析二者的關(guān)系及意義。方法確診為胃腺癌的患者共72例為A組，經(jīng)病理學(xué)確診為胃黏膜高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的術(shù)后組織32例為B組，經(jīng)病理學(xué)確診為胃黏膜低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的內(nèi)鏡咬檢組織32例為C組，距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織15例為D組，均留取蠟塊組織，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)4組Stathmin1和TP53的表達(dá)。結(jié)果4組Stathmin1和TP53表達(dá)的陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組Stathmin1和TP53的表達(dá)與腫瘤最大徑、增殖指數(shù)密切相關(guān)；Stathmin1的表達(dá)與腫瘤脈管侵犯密切相關(guān)，二者均與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯無(wú)相關(guān)性。相關(guān)分析顯示A組Stathmin1和TP53呈正相關(guān)。結(jié)論胃腺癌中Stathmin1和TP53高表達(dá)對(duì)腫瘤形成和進(jìn)展有重要作用。Stathmin1和TP53有明顯的正向協(xié)同作用。

胃腺癌；微管解聚蛋白(Stathmin)1；突變型(T)P53；免疫組化

胃腺癌是上皮源性腫瘤，與胃黏膜上皮細(xì)胞的不典型增生和上皮內(nèi)瘤變的程度有關(guān)〔1〕。病變進(jìn)展中可以觀察到多種基因和蛋白的表達(dá)失調(diào)。微管解聚蛋白(Stathmin)1是一種細(xì)胞蛋白質(zhì)，作為一種細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)因子，在微管的不穩(wěn)定性中扮演著十分重要的角色〔2，3〕。研究顯示Stathmin1在惡性腫瘤中的表達(dá)升高，可能參與多種生物學(xué)作用〔4〕。本文關(guān)注胃腺癌組織Stathmin1的表達(dá)特征及其與突變型(T)P53的關(guān)系，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年2月青海大學(xué)附屬醫(yī)院確診為胃腺癌的患者共72例為A組，均行手術(shù)根治，并經(jīng)病理醫(yī)師確診，符合世界衛(wèi)生組織(WHO)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男39例，女33例，年齡58～78(平均63.4)歲，其中高分化15例，中分化17例，低分化40例。經(jīng)病理學(xué)確診為胃黏膜高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變術(shù)后組織32例為B組，其中男17例，女15例，年齡56～74(平均65.5)歲。經(jīng)病理學(xué)確診為胃黏膜低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的咬檢組織32例作為C組，其中男18例，女14例，年齡55～70(平均62.4)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個(gè)月有嚴(yán)重感染；②有先天性疾??；③合并其他器官惡性腫瘤的患者。距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織15例為D組，其中男7例，女8例，年齡59～75(平均65.9)歲。4組一般臨床資料無(wú)明顯差異，具有可比性。

1.2Stathmin1和TP53表達(dá)檢測(cè)方法 留取的組織均應(yīng)用中性甲醛溶液固定超過(guò)24 h，經(jīng)取材后，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切取4 μm切片置于膠片上，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)Stathmin1和TP53的表達(dá)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。操作均由病理科技師完成，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，做好質(zhì)控，減少誤差。

1.3Stathmin1和TP53結(jié)果的判讀 Stathmin1的陽(yáng)性部位是細(xì)胞質(zhì)，TP53陽(yáng)性部位是細(xì)胞核，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。先在100倍鏡下選擇上皮細(xì)胞集中的區(qū)域進(jìn)行觀察，然后在400倍鏡下選擇5個(gè)視野計(jì)數(shù)，取平均值。以陽(yáng)性率<10%定為陰性，≥10%定為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.14組Stathmin1和TP53陽(yáng)性率的比較 A、B、C、D組中Stathmin1和TP53的表達(dá)有顯著降低趨勢(shì)(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.2A組不同臨床病理特征中Stathmin1和TP53表達(dá)陽(yáng)性率比較 Stathmin1和TP53的表達(dá)與腫瘤最大徑、增殖指數(shù)密切相關(guān)，Stathmin1的表達(dá)與腫瘤的脈管侵犯密切相關(guān)，二者均與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表2。

2.3A組Stathmin1和TP53表達(dá)相關(guān)性 Stathmin1和TP53呈正相關(guān)(r=0.49，P=0.044 0)。

表1 4組Stathmin1和TP53陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

表2 A組不同臨床病理特征中Stathmin1和TP53表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

3 討 論

胃腺癌形成過(guò)程受P53調(diào)節(jié)通路調(diào)控〔5〕。P53是最早發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)基因之一，有 “分子警察 ”之稱〔6〕。其有兩種類型，一種是野生型，一種是T。野生型P53基因是一種抑癌基因，但是在正常機(jī)體很難檢測(cè)到〔7，8〕。TP53是一種腫瘤促進(jìn)基因，不僅可以消除正常的P53功能，還可以調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)〔9，10〕?？资胤嫉取?1〕通過(guò)檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中Stathmin1和P53的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者在復(fù)發(fā)組中的表達(dá)明顯升高，認(rèn)為二者聯(lián)合檢測(cè)可以作為宮頸上皮內(nèi)瘤變術(shù)后預(yù)后判斷的生物學(xué)指標(biāo)。Stathmin1是由149個(gè)氨基酸組成的蛋白，分子量為19 kD，其結(jié)構(gòu)包括3部分：N端的結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)域、中心區(qū)和C端的蛋白〔12〕。Stathmin1蛋白在細(xì)胞周期的各期中對(duì)微管解聚活性均有一定作用。研究認(rèn)為在有絲分裂的間期，Stathmin1以非磷酸化的形式存在，可以加速微管解聚，促使紡錘體形成〔13〕。在早期，Stathmin1經(jīng)過(guò)磷酸化的作用使其活性消失，在晚期去磷酸化而重新激活，紡錘體解體，Stathmin1可以對(duì)細(xì)胞的增殖有影響〔14〕。有學(xué)者通過(guò)研究Stathmin1對(duì)轉(zhuǎn)移的作用，發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移。而下調(diào)Stathmin1表達(dá)能減少轉(zhuǎn)移的頻率〔15〕。

本研究提示Stathmin1和TP53高表達(dá)是正常上皮-低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變-高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變-腺癌的重要調(diào)節(jié)因素，即二者可以促進(jìn)腫瘤性病變的形成過(guò)程。Stathmin1和TP53高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)繁殖和細(xì)胞數(shù)量的增加，細(xì)胞異型性明顯，分化程度低，腫瘤的體積增大。本文結(jié)果提示Stathmin1高表達(dá)可以促進(jìn)脈管侵犯。本實(shí)驗(yàn)提示Stathmin1對(duì)脈管的作用可能具有直接侵襲性，或者是對(duì)血管的侵襲作用，而對(duì)淋巴結(jié)播散無(wú)明顯的作用。本文提示Stathmin1和TP53二者呈現(xiàn)正向協(xié)同作用，Stathmin1可能對(duì)激活TP53起重要的促進(jìn)作用〔16〕。有觀點(diǎn)顯示紫杉類化療藥主要作用于細(xì)胞的G2晚期和M期末，可以抑制微管的裂解，引起微管排列異常，使紡錘體失去正常功能而促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔17〕。Stathmin1和TP53均與紫杉醇類化療藥物的效果相關(guān)，間接提示二者的相關(guān)性〔18，19〕。但是Stathmin1和TP53之間調(diào)節(jié)的具體機(jī)制有待后續(xù)研究證實(shí)。

1Jeon TY，Han MY.Overexpression of stathmin1 in the diffuse type of gastric cancer and its roles in proliferation and migration of gastric cancer cells〔J〕.Br J Cancer，2010；102(4)：710-8.

2Liu X，Liu H，Liang J，etal.Stathmin is a potential molecular marker and target for the treatment of gastric cancer〔J〕.Int J Clin Exp Med，2015；8(4)：6502-9.

3Ke B，Wu LL，Liu N，etal.Overexpression of stathmin1 is associated with poor prognosis of patients with gastric cancer〔J〕.Tumor Biol，2013；34(5)：3137-45.

4王 瀟，樊青霞，趙培榮，等.微管不穩(wěn)定蛋白Stathmin在食管鱗癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2007；20(5)：372-4.

5劉 榮，賀降福，朱尤慶，等.胃腺癌組織P53，P63和P73蛋白表達(dá)的意義〔J〕.世界華人消化雜志，2006；14(24)：2416-20.

6許昌泰，閆小君.p53抗癌基因和消化系腫瘤〔J〕.世界華人消化雜志，1999；12(1)：77-9.

7梁紅玲，黃健清，李洪勝，等.BIRC5在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與Tp53的關(guān)系〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013；21(7)：1496-9.

8郭 瓊，李 卉，沙亞哈提·別爾克哈之，等.新疆食管癌中Myc、TP53表達(dá)及其與臨床病理因素相關(guān)性研究〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015；15(19)：3637-40.

9Poeta ML，Manola J，Goldwasser MA，etal.TP53 mutations and survival in squamous-cell carcinoma of the head and neck〔J〕.New Engl J Med，2011；357(25)：2552-61.

10Fenoglio-Preiser CM，Wang J，Stemmermann GN，etal.TP53 and gastric carcinoma：a review〔J〕.Hum Mutat，2003;21(3)：258-70.

11孔守芳，戴淑真，姚 勤，等.Stathmin-1和p53蛋白與宮頸上皮內(nèi)瘤變復(fù)發(fā)關(guān)系研究〔J〕.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2016;14(5)：457-9.

12Chen YL，Uen YH，Li CF，etal.The E2F transcription factor 1 transactives stathmin 1 in hepatocellular carcinoma〔J〕.Ann Surg Oncol，2013;20(12)：4041-54.

13Liu F，Sun YL，Xu Y，etal.Expression and phosphorylation of stathmin correlate with cell migration in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Oncol Reports，2013;29(2)：419-24.

14Marian N，Jenny L，Karst AM，etal.Stathmin 1 and p16(INK4A) are sensitive adjunct biomarkers for serous tubal intraepithelial carcinoma〔J〕.Gynecol Oncol，2015;139(1)：104-11.

15Wei SH，Lin F，Wang X，etal.Prognostic significance of stathmin expression in correlation with metastasis and clinicopathological characteristics in human ovarian carcinoma〔J〕.Acta Histochemica，2008;110(1)：59-65.

16Yuan RH，Jeng YM，Chen HL，etal.Stathmin overexpression cooperates with p53，mutation and osteopontin，overexpression，and is associated with tumour progression，early recurrence，and poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.J Pathol，2006;209(4)：549-58.

17王 琰，王中彬，哈敏文.非小細(xì)胞肺癌組織中stathmin、p53蛋白表達(dá)及其臨床意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2009;49(14)：22-4.

18Kuhn E，Kurman RJ，Vang R，etal.TP53 mutations in serous tubal intraepithelial carcinoma and concurrent pelvic high-grade serous carcinoma--evidence supporting the clonal relationship of the two lesions〔J〕.J Pathol，2012;226(3)：421-6.

19Soong R，Powell B，Elsaleh H，etal.Prognostic significance of TP53 gene mutation in 995 cases of colorectal carcinoma〔J〕.Eur J Cancer，2000;36(16)：2053-60.

〔2017-04-19修回〕

(編輯 苑云杰)

郜 茜(1975-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事消化系統(tǒng)疾病研究。

王 芳(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事消化系統(tǒng)疾病研究。

R73

A

1005-9202(2017)17-4299-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.062

1 青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部病原生物教研室