張燕

江蘇省中醫(yī)院 江蘇南京 210029

金銀花注射液抗菌藥理作用研究

張燕

江蘇省中醫(yī)院 江蘇南京 210029

目的：考察金銀花注射液的體內(nèi)抗菌藥理作用。方法：通過給金黃色葡萄球菌感染小鼠、肺炎雙球菌感染小鼠靜脈注射、灌胃不同濃度金銀花注射液，考察其體內(nèi)抑菌作用。結(jié)果：金銀花注射液能降低金黃色葡萄球菌感染小鼠、肺炎雙球菌感染小鼠的死亡率，延長存活天數(shù)，同劑量組靜脈注射作用強(qiáng)于灌胃給藥。結(jié)論：金銀花注射液具有體內(nèi)抗菌作用。

金銀花注射液；金黃色葡萄球菌；肺炎雙球菌；小鼠；藥理作用

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花；具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的作用。用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱[1]；含揮發(fā)油類、黃酮類、有機(jī)酸類和三萜皂苷類物質(zhì)，其抗茵有效成分為綠原酸類化合物。[2]金銀花注射液為金銀花經(jīng)提取純化而成，綠原酸含量高，本文通過體內(nèi)抗菌試驗(yàn)，考察其抗菌作用。

1.材料與方法

1.1 材料

金銀花注射液，10ml/瓶，相當(dāng)于生藥材10g，自制；雙黃連注射液，河南淅川制藥集團(tuán)有限公司；鹽酸林可霉素，南京第三制藥廠。

營養(yǎng)肉湯，上海中科昆蟲生物技術(shù)開發(fā)有限公司；營養(yǎng)瓊脂，江蘇省病癥控制中心微生物試劑廠；胃膜素，由江蘇省中醫(yī)院藥理室提供。

臨床分離金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌，由江蘇省人民醫(yī)院微生物室鑒定提供。

清潔級(jí)ICR小鼠，由南京醫(yī)科大學(xué)提供。

孵箱，上海分析儀器廠；DKB-8A型電熱恒溫水槽，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 方法[3-5]

1.2.1 對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用

1.2.1.1 菌液制備

取臨床分離金黃色葡萄球菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37 ℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上（10%羊紅細(xì)胞營養(yǎng)瓊脂平板），37℃孵箱培養(yǎng)20h。取出，用6ml 5%的胃膜素（PH 7.2）洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散并分別用生理鹽水配成 0.33ml/ml、0.20ml/ml、0.11ml/ml、0.06ml/ml濃度菌液備用。

1.2.1.2 選擇合適的菌液濃度

取清潔級(jí)ICR小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g。隨機(jī)為4組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射金黃色葡萄球菌菌液，每鼠0.5ml，觀察 24、48、72h感染小鼠死亡數(shù)。結(jié)果 4組感染小鼠死亡率分別為100%、90%、80%、30%。故實(shí)驗(yàn)選用0.11ml/ml濃度菌液。

1.2.1.3 對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用試驗(yàn)

取18～22g 清潔級(jí)ICR小鼠190只，隨機(jī)分組，每組19只，雌雄兼用。（1）正常對(duì)照組：等量生理鹽水（NS）10ml/kg；（2）模型組：等量 NS 10ml/kg；（3）雙黃連注射液組：10ml/kg；（4）鹽酸林可霉素組：0.3g/kg；（5）金銀花注射液Ⅰ組：6.6 g/kg（生藥量）；（6）金銀花注射液Ⅱ組：13.2 g/kg（生藥量）；（7）金銀花注射液Ⅲ組：26.4 g/kg（生藥量）；（8）金銀花注射液Ⅳ組：6.6g/kg（生藥量）；（9）金銀花注射液Ⅴ組：13.2g/kg（生藥量）；（10）金銀花注射液Ⅵ組：26.4g/kg（生藥量）。以上（1）～（7）組小鼠均靜脈注射給藥，（8）～（10）組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg。各組每日給藥1次，連續(xù)給藥5日。第3日給藥后1h，除空白對(duì)照組以外，其余各組均腹腔注射金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠（菌液濃度0.11ml/ml）。然后繼續(xù)給藥2日。觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況。

1.2.2 對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠的保護(hù)作用

1.2.2.1 菌液制備

取臨床分離肺炎雙球菌接種入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37 ℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上（1%羊紅細(xì)胞營養(yǎng)瓊脂平板），37℃孵箱培養(yǎng)24h，取出。用6ml 5%的胃膜素（PH 7.2）洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散。用生理鹽水配成 1ml/ml、0.5ml/ml、0.33ml/ml、0.25ml/ml濃度菌液備用。

1.2.2.2 選擇合適的菌液濃度

取清潔級(jí)ICR小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g隨機(jī)分組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射肺炎雙球菌菌液0.5ml/鼠，觀察感染小鼠死亡數(shù)。結(jié)果感染小鼠死亡率分別為100.0%，100.0%，60.0%，30.0%。故實(shí)驗(yàn)選用0.45ml/ml濃度菌液（小鼠死亡率估計(jì)80～90%之間）。

1.2.2.3 對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用試驗(yàn)

取18～22g 清潔級(jí)ICR小鼠190只隨機(jī)分組，每組19只，雌雄兼用。（1）正常對(duì)照組：等量 NS 10ml/kg；（2）模型組：等量 NS 10ml/kg；（3）雙黃連注射液組：10ml/kg；（4）林可霉素組：0.3g/kg；（5）金銀花注射液Ⅰ組：6.6g/kg（生藥量）；（6）金銀花注射液Ⅱ組：13.2g/kg（生藥量）；（7）金銀花注射液Ⅲ組：26.4g/kg（生藥量）；（8）金銀花注射液Ⅳ組：6.6g/kg（生藥量）；（9）金銀花注射液Ⅴ組：13.2g/kg（生藥量）；（10）金銀花注射液Ⅵ組：26.4g/kg（生藥量）。以上（1）～（7）組小鼠均靜脈注射給藥，（8）～（10）組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg。各組每日給藥1次，連續(xù)給藥5日。第3日給藥1小時(shí)后，除正常對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射肺炎雙球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠（菌液濃度0.45ml/ml）。然后繼續(xù)給藥2日。觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況。

2.結(jié)果

2.1 對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：金銀花注射液三個(gè)劑量組靜脈注射給藥對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠可降低其死亡率，13.2g/kg和26.4g/kg組可延長感染小鼠的存活天數(shù)，與模型組比較具有顯著性差異（P＜0.05，0.01），效果優(yōu)于同劑量灌胃給藥P＜0.05）。表明金銀花注射液對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。見表1。

表1 金銀花注射液對(duì)金黃色葡萄球菌感染小數(shù)死亡的保護(hù)作用（按生藥量計(jì)算）

2.2 對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠的保護(hù)作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：金銀花注射液三個(gè)劑量組靜脈注射給藥對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠均可降低其死亡率，延長存活天數(shù)，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05，0.01）。作用優(yōu)于同劑量灌胃給藥組（P＜0.05）。表明金銀花注射液對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。見表2。

表2 金銀花注射液對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用（按生藥量計(jì)算）

**P＜0.01 與模型組比較；△P＜0.05，金銀花注射液靜脈注射給藥與灌胃給藥同劑量組比較

3.討論

體內(nèi)抗菌試驗(yàn)結(jié)果顯示：金銀花注射液 6.6、13.2、26.4 g/kg（生藥量）三個(gè)劑量組靜脈注射及灌胃給藥，以靜脈注射效果較好，可降低金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌感染小鼠的死亡率，延長感染小鼠的存活天數(shù)。表明金銀花注射液體內(nèi)給藥具有較好的抗金黃色葡萄球菌和肺炎雙球菌的作用。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015年版（一部）[s].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：221.

[2]趙琰玲，尹蓮.金銀花化學(xué)成分與有效成分提取研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007：26（5）：521-523.

[3]陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2000：239，278，251，298，300，302，305，378.

[4]徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2002：1649，1690，1739，1723；1991：719，1233，1226，1230.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編[M].1993：51.

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