王丹，趙余慶

(1.沈陽市第二中醫(yī)醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101；2.沈陽藥科大學，遼寧 沈陽 110016)

·基礎研究·

人參各部位水解產(chǎn)物PPT PT及25-OH-PPD的含量測定

王丹1*，趙余慶2

(1.沈陽市第二中醫(yī)醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101；2.沈陽藥科大學，遼寧 沈陽 110016)

目的：建立同時測定人參各部位總皂苷水解產(chǎn)物中人參皂苷元原人參三醇(PPT)、人參三醇(PT)、25-羥基原人參二醇(25-OH-PPD)含量的HPLC-ELSD檢測方法。方法：采用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫：25 ℃，流速：3 mL·min-1；流動相為甲醇-水，梯度洗脫，ELSD檢測器，氣化室溫度：40 ℃，氮氣壓力：2.5×105Pa。結(jié)果：人參皂苷PPT、PT、25-OH-PPD分別在1.6～8 μg呈良好的線性關系，平均加樣回收率分別為98.39%、97.97%、97.75%，RSD分別為0.94%(n=5)、1.10%(n=5)、1.27%(n=5)。結(jié)論：該方法簡便、快速、重現(xiàn)性好，可用于人參皂苷水解產(chǎn)物的質(zhì)量控制方法。

人參皂苷；水解；高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器；含量測定

人參是五加科人參屬植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的根，具有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津止渴、安神等功效[1]。人參皂苷是人參各部位(根、莖葉、果實、花蕾)的主要有效成分，具有抗癌、抗休克、保護心肌等藥理作用[2-4]。目前，測定人參皂苷的方法很多[5-7]，常用紫外檢測器在203 nm檢測，但因皂苷類成分在此波長下吸收較差，梯度洗脫時受試劑影響很大，基線漂移較大，更重要的是不能檢測不含雙鍵類的皂苷；而蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)是一種通用型質(zhì)量檢測器，檢測不受外部環(huán)境的干擾，試劑在檢測器中蒸發(fā)，不干擾檢測，是一種檢測人參皂苷類成分的有效方法[8]。鄭義等[9]采用HPLC-ELSD法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量；趙巖等[10]采用反相HPLC-ELSD法測定西洋參和西洋紅參中人參皂苷的含量。人參水解產(chǎn)物中原人參三醇(PPT)、人參三醇(PT)、25-羥基原人參二醇(25-OH-PPD)的含量測定未見報道，且PPT、PT、25-OH-PPD是抗腫瘤的有效成分[11-12]，本實驗采用HPLC-ELSD法測定人參各部位水解產(chǎn)物中PPT、PT、25-OH-PPD的含量，該方法快速、簡單，分離測定準確、可靠。

1 儀器和材料

1.1 儀器與試劑

PUMP K-501型高效液相色譜儀(龍尼柯儀器有限公司)；UV DETECTORK-2501紫外檢測器(德國諾爾)；ELSD-UM 3000型(上海通微分析技術(shù)有限公司)；JS-3050色譜工作站(龍尼柯儀器有限公司)。人參皂苷元對照品PPT、PT、25-OH-PPD(實驗室制備)；甲醇(HPLC級試劑)；實驗用水為蒸餾水；鹽酸；其他試劑均為分析純。

1.2 材料

人參根、莖葉、果、花蕾總皂苷(遼寧省撫順鑫泰人參保健品有限公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，進樣體積：20 μL，柱溫：25℃，流速：3 mL·min-1；流動相：甲醇(A)和水(B)按體積比83∶17混合，洗脫；ELSD氣化室溫度：40 ℃，氮氣壓力：2.5×105Pa。

2.2 對照品溶液的配制

精密稱取對照品PPT、PT、25-OH-PPD適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.80、0.80、0.80 mg·mL-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取人參各部分(包括根、莖葉、果、花蕾)總皂苷水解產(chǎn)物樣品適量，精密稱定，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，制成質(zhì)量濃度分別為10.00、10.00、10.10、10.10 mg·mL-1的供試品溶液。

2.4 標準曲線和線性范圍

精密稱取2.2項下的對照品溶液 2、4、6、8、10 μL，分別依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(lgX)，峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標(lgY)，得回歸方程：PPT，lgY=4.001 17+1.715 14lgX(r=0.999 4)；PT，lgY=4.060 6+1.838 65lgX(r=0.999 1)；25-OH-PPD，lgY=3.877 33+1.376 67lgX(r=0.999 3)；線性范圍：1.6～8 μg。對照品(A)與供試品人參根 (B)、人參莖葉(C)、人參果(D)、人參花蕾(E)色譜圖見圖1。

注：A.人參皂苷對照品；B.根；C.莖葉；D.果；E.花蕾。圖1 對照品及人參各部位供試品色譜圖

2.5 精密度試驗

精密吸取2.2對照品PPT、PT、25-OH-PPD溶液10 μL，連續(xù)重復進樣5次，照擬定的色譜條件進行測定。計算峰面積，RSD分別為 1.05%、1.55%、1.77%，結(jié)果表明精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取2.3項下的人參根供試品溶液，分別在0、2、4、6、8 h精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，計算峰面積，結(jié)果人參皂苷PPT、PT、25-OH-PPD的RSD分別為1.84%(n=5)、2.18%(n=5)、2.31%(n=5)，說明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗

按2.3項下處理供試品，平行制備5份人參根樣品溶液，照擬定的色譜條件進行測定。計算峰面積，結(jié)果人參皂苷PPT、PT、25-OH-PPD的RSD分別為2.26%(n=5)、0.97%(n=5)、1.31%(n=5)。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取人參根總皂苷水解產(chǎn)物29.00 mg(含人參皂苷元PPT、PT、25-OH-PPD分別為3.40%、4.40%、3.17%)，分別加1 mL質(zhì)量濃度分別為0.95、1.20、0.90 mg·mL-1的人參皂苷元PPT、PT、25-OH-PPD對照品溶液，置5 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，每次進樣20 μL，測定含量，重復5次，計算回收率，見表1。

表1 人參根總皂苷水解產(chǎn)物中PPT、PT、25-OH-PPD回收率試驗測定結(jié)果

2.9 樣品的測定

分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件測定，外標法測定含量，結(jié)果見表2。

表2 人參各部位水解后樣品的含量測定結(jié)果

3 討論

人參作為一種抗腫瘤的藥物，其抗癌活性成分一直被人們所關注。人參總皂苷水解轉(zhuǎn)化為PPT、PT、25-OH-PPD等，而這些皂苷元恰恰是主要的抗腫瘤活性成分，其中25-OH-PPD的抗腫瘤活性大于人參皂苷Rg3[13]，所以利用分離到的化學成分作為對照品，進行定性與定量分析，為其品質(zhì)評價提供科學依據(jù)。

利用HPLC-ELSD法測定人參各部位水解產(chǎn)物中皂苷的含量，具有快速、簡單、分離測定準確、重現(xiàn)性好的特點；選定的流動相對PPT、PT、25-OH-PPD有良好的分離效果。該方法可用于PPT、PT、25-OH-PPD的含量測定。

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ContentDeterminationofGinsengVariousPartsHydrolysatesPPT，PTand25-OH-PPD

WANGDan1*，ZHAOYuqing2

(1.ShenyangSecondHospitalofChineseMedicine，Shenyang110101,China； 2.ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016,China)

Objective：To establish a quantitative method for simultaneous determination of PPT，PT and 25-OH-PPD by HPLC-ELSD in different parts of Ginseng hydrolysates.Methods：A Kromasil C18(150 mm×4.6mm，5 μm) was used to perform the determination，which was maintained at 25 ℃ throughout the analysis.Mobile phase was composed of methanol and water with flow rate at 3 mL·min-1under gradient elution.The evaporation light-scattering detector was used with its gasification chamber temperature at 40 ℃ and the nitrogen pressure 2.5×105Pa.Results：The linearity of PPT、PT、25-OH-PPD was good in 1.6 μg - 8 μg scope，average recovery rates were 98.39%，97.97%，97.75%，respectively，RSD were 0.94% (n=5)，1.10% (n=5)，1.27% (n=5)，respectively.Conclusion：This method is simple，fast，the reproducible.The method could be used for the quality control of Ginseng hydrolysates.

Ginsenoside；hydrolysis；HPLC-ELSD；content determination

] 王丹，主管中藥師，研究方向：新藥制劑，E-mail：3516588@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.6.006

2016-11-03)

*[