關(guān)慧 岳俊麗

北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司 150000

HPLC法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑中阿奇霉素的含量研究

關(guān)慧 岳俊麗

北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司 150000

目的：探討如何利用高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑中的成分含量。方法：采用WatersXbridgeC18柱（150mm ×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45∶55）為流動(dòng)相，流速為0.35mL·min-1，柱溫為30℃，檢測(cè)長(zhǎng)為215nm。結(jié)果：線性范圍為467.70ˉ1434.51μg·mL-1，r=0.999 758，平均回收率（n=15）為99.9%（RSD=1.1%）；本方法重復(fù)性和精密度良好（RSD＜2.0%）。結(jié)論：采用HPLC法來測(cè)定阿奇霉素的含量，不但準(zhǔn)確率高，且重復(fù)性較好，操作也簡(jiǎn)單方便，十分適用于對(duì)阿奇霉素干混懸劑進(jìn)行主要成分含量測(cè)定。

阿奇霉素干混懸劑；HPLC法；成分；含量；測(cè)定

作為一種常見抗生素，阿奇霉素在抗菌消炎方面有著顯著療效。從藥物成分類型上講，阿奇霉素是一種15元氮環(huán)內(nèi)酯類抗生素，在其他西藥抗生素中，紅霉素的抗菌效果與阿奇霉素較為相似。但與紅霉素相比，阿奇霉素的服用更加方便，且用量更少，效果更好。所以阿奇霉素比紅霉素的使用更為廣泛，也更受患者的歡迎。目前，阿奇霉素的制劑形式有片、膠囊、干混懸劑等多種類型。其中干混懸劑已經(jīng)被廣泛使用，但是與其他制劑相比，對(duì)干混懸劑的含量測(cè)定難度更大?，F(xiàn)本文就以HPLC法為例，探討其含量測(cè)定方法。

1、儀器與試劑

Waters液相色譜儀（Waters2695泵及自動(dòng)進(jìn)樣器，Wa-ters2487紫外檢測(cè)器）；Agilent1100液相色譜儀（四元泵，紫外檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器）；梅特勒 XS105電子天平；色譜柱 WatersXbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）。

阿奇霉素工作對(duì)照品（含量946μg·mg-1，批號(hào)：0601，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；阿奇霉素雜質(zhì)A工作對(duì)照品（含量95.4%，批號(hào)：aza060801，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；阿奇霉素干混懸劑（規(guī)格為 100mg，批號(hào)：063070521、063070301、063070302，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；乙睛為色譜純，美國Fisher公司產(chǎn)品；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2、方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流動(dòng)相：0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45∶55）；流速：0.35mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣體積：20μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定阿奇霉素對(duì)照品25mg和阿奇霉素雜質(zhì)A對(duì)照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取阿奇霉素干混懸劑，求出平均裝量，將裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物混勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿奇霉素25mg），置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按上述色譜條件，進(jìn)樣對(duì)照品溶液20μL，結(jié)果理論塔板數(shù)按阿奇霉素峰計(jì)算≥1 500；阿奇霉素峰與阿奇霉素雜質(zhì)A峰分離度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子≤2.0，對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣主峰面積的RSD＜2.0%（n=5）。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

按對(duì)照品溶液阿奇霉素濃度的50～150%制定5個(gè)不同濃度梯度，分別是50%、80%、100%、120%、150%，每個(gè)濃度梯度平行制備3份樣品溶液，共15份樣品溶液，每份樣品都加入處方量輔料，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成規(guī)定濃度，即得系列供試品溶液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，記錄阿奇霉素峰面積，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的阿奇霉素峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=3.21e+003X-5.36e+004r=0.999758

結(jié)果表明：在467.70-1434.51μg·mL-1范圍內(nèi)，阿奇霉素濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 回收率試驗(yàn)

溶液制備同線性關(guān)系試驗(yàn)供試品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根據(jù)含量結(jié)果計(jì)算回收率，結(jié)果5種濃度回收率（n=3）分別為99.2%（RSD=0.5%），98.6%（RSD=0.9%），100.0%（RSD=0.3%），101.2%（RSD=0.7%），100.7%（RSD=0.3%）；平均回收率（n=15）為99.9%（RSD=1.1%）。說明此方法得到的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.6 精密度試驗(yàn)

2.6.1 重復(fù)性

取同一批（063070521）阿奇霉素干混懸劑，按“3”項(xiàng)下方法制備所需溶液，平行測(cè)定6次的含量結(jié)果，RSD值為0.8%。

2.6.2 中間精密度

取3批阿奇霉素干混懸劑，在不同時(shí)間，由不同的化驗(yàn)員，按“3”項(xiàng)下方法制備所需溶液分別測(cè)定，二人測(cè)定的同批含量結(jié)果的相對(duì)平均偏差063070521為0.8%，063070301為0.6%，063070302為1.6%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“3”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液和樣品溶液（批號(hào)：063070521），每間隔1h，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣13次，量取主峰面積，計(jì)算幾次進(jìn)樣結(jié)果峰面積的RSD值。對(duì)照品溶液RSD為0.9%，樣品溶液RSD為0.8%，表明對(duì)照品溶液和樣品溶液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 樣品測(cè)定

取3批阿奇霉素干混懸劑，按“3”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液和樣品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20μL，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果與抗生素微生物法比較見下表。

從表結(jié)果可看出本法與藥典采用的抗生素微生物效價(jià)法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑的含量無顯著性差異。

3、結(jié)論

3.1 本文參考有關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)流動(dòng)相的組成進(jìn)行了探討，發(fā)現(xiàn)采用本文的流動(dòng)相即0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45：55），峰形穩(wěn)定，分離較好。

3.2 溶劑的選擇。由于阿奇霉素干混懸劑的輔料較多，故溶劑選擇比較困難。本法采用流動(dòng)相和乙腈試驗(yàn)對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均可溶樣，但因純乙腈毒性較大且價(jià)格較貴，故最后溶劑定為流動(dòng)相。

3.3 樣品濃度選擇。采用阿奇霉素濃度為 1mg·mL-1時(shí)峰形對(duì)稱，和相鄰雜質(zhì)峰分離較好；濃度過大，峰拖尾嚴(yán)重且輔料量大而不好過濾；濃度過小，準(zhǔn)確度受影響。

3.4 干擾試驗(yàn) 將溶劑和按處方工藝配制不含阿奇霉素的空白輔料，按“3”項(xiàng)下方法制備空白供試液，記錄色譜圖，結(jié)果顯示空白溶劑和空白輔料對(duì)本法測(cè)定無干擾。見圖1。

圖1 HPLC色譜圖A-空白基質(zhì)；B-對(duì)照品；C-供試品

3.5 測(cè)定條件流動(dòng)相的流速±0.05mL，柱溫度±5℃，乙腈相比例±5%，緩沖鹽pH±0.4等進(jìn)行小的變動(dòng)，系統(tǒng)適用性均能達(dá)到試驗(yàn)要求，說明此方法適用范圍較廣。

綜上所述從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，使用高效液相色譜法對(duì)阿奇霉素干混懸劑中的阿奇霉素含量進(jìn)行測(cè)定，不但具備簡(jiǎn)單方便的特點(diǎn)，且準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性都很好，樣品溶液也較為穩(wěn)定，由此可見，HPLC法是一種很好的阿奇霉素干混懸劑含量測(cè)定方法。

[1]曾國富，黃玉英.HPLC法測(cè)定阿奇霉素干混懸劑中阿奇霉素的含量[J].海峽藥學(xué)，2014（3）：66-67.

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R915.877

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1672-5018（2017）02-011-1