何彥豐， 高 銳， 江 濤， 林 曦， 毛厚平

夏枯草提取物抑制大鼠腎草酸鈣結(jié)石形成作用的研究

何彥豐， 高 銳， 江 濤， 林 曦， 毛厚平

目的研究夏枯草提取物對(duì)大鼠腎草酸鈣結(jié)石的作用及機(jī)制。方法將40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為4 組：對(duì)照組、模型組、夏枯草提取物低劑量(50 g/L)和高劑量(100 g/L)實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)4周后處死動(dòng)物，將各組大鼠腎臟標(biāo)本制成組織切片，H-E染色，觀察大鼠腎組織病理學(xué)改變；檢測(cè)大鼠血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、磷(P)和Ca2+的含量，檢測(cè)24 h尿液中Ca2+和草酸(Ox)的含量；運(yùn)用熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)大鼠腎內(nèi)TRPV5 mRNA和蛋白的表達(dá)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎呈現(xiàn)草酸鈣結(jié)石病理改變，不同濃度的夏枯草提取物作用后，可明顯改善其病理變化。模型組血清BUN，Cr，Ca2+和P含量明顯升高，經(jīng)不同濃度的夏枯草提取物作用后，實(shí)驗(yàn)組BUN及Cr含量明顯低于模型組(P<0.05)，但實(shí)驗(yàn)組和模型組Ca2+及P含量比較無(wú)顯著性差異；模型組尿液Ca2+，Ox含量較對(duì)照組明顯升高，經(jīng)不同濃度的夏枯草提取物作用后，可降低實(shí)驗(yàn)組Ca2+含量，且成藥物劑量依賴(lài)性(P<0.05)，但對(duì)Ox的含量無(wú)顯著性作用；模型組腎內(nèi)TRPV5 mRNA和蛋白的表達(dá)明顯降低，經(jīng)不同濃度的夏枯草水提取物作用后，實(shí)驗(yàn)組TRPV5 mRNA和蛋白的表達(dá)逆轉(zhuǎn)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論夏枯草對(duì)大鼠腎草酸鈣結(jié)石具有防治作用；可能是通過(guò)上調(diào)大鼠腎臟尿鈣調(diào)控信號(hào)TRPV5的表達(dá)，降低血清中BUN、Cr含量及尿液中Ca2+的含量。

夏枯草； 草酸鈣； 結(jié)石，腎； 香草酸； 電位測(cè)定法

夏枯草(PrunellaVulgarisL)為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥果穗，具有降壓、降糖、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。近年來(lái)，夏枯草對(duì)草酸鈣結(jié)石的防治作用得到了深入的研究。Utsunomiya等在體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，夏枯草水提取物能有效抑制草酸鈣結(jié)晶的成核、生長(zhǎng)和聚集，降低了草酸鹽的飽和度，從而顯著抑制草酸鈣結(jié)石的形成，但其具體的理論基礎(chǔ)及機(jī)制仍不清楚[1]。瞬時(shí)性受體電位通道香草酸受體(transient receptor potential vanilloid receptor，TRPV) 蛋白是一類(lèi)編碼陽(yáng)離子通道的蛋白家族，共有6個(gè)成員：TRPVl～TRPV6，其中TRPV5是尿鈣重吸收的重要調(diào)控分子，是調(diào)控腎小管鈣離子跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的新型鈣離子通道[2]。筆者擬通過(guò)建立大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型研究不同濃度夏枯草提取物對(duì)腎草酸鈣結(jié)石模型大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、磷(P)和Ca2+含量，以及24 h尿液中Ca2+和草酸(Ox)含量的影響，同時(shí)評(píng)價(jià)大鼠腎內(nèi)TRPV5 mRNA和蛋白的表達(dá)水平，探討夏枯草提取物對(duì)腎草酸鈣結(jié)石的防治作用以及是否通過(guò)TRPV5信號(hào)通路抑制腎草酸鈣結(jié)石形成的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠40只，體質(zhì)量(225±25)g，由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào):SCXK2012-0003)。大鼠常規(guī)飼料喂養(yǎng)，正常飲水，飼養(yǎng)房溫度為(20±3)℃，濕度為35%～55%，光照10 h/d。

1.2 試劑和儀器 試劑：夏枯草全草(批號(hào)：20141005，西安天瑞生物技術(shù)有限公司)；兔抗大鼠TRPV5抗體(批號(hào)：PB0549)、羊抗兔二抗(批號(hào)：BA1003)、β-actin兔多克隆抗體(批號(hào)：BA2305)均由武漢博士德生物技術(shù)有限公司提供；RNA抽提試劑盒(批號(hào)：AM1926)、cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)：K1631)及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反應(yīng)試劑盒(批號(hào)：B55)均由加拿大Fermentas公司提供。

儀器：超低溫冰箱(U85-13型，美國(guó)Thermo公司)；自動(dòng)生化分析儀(Aul000型，日本Olympus公司)；核酸蛋白分析儀(德國(guó)Beckman公司)；穩(wěn)壓垂直電泳儀(美國(guó)Bio-Rad公司)；PCR儀(美國(guó)PTC公司)。

1.3 方法

1.3.1 夏枯草提取物的制備 50 g夏枯草加蒸餾水500 mL，煮沸30 min后過(guò)濾除渣，并濃縮成質(zhì)量濃度為1 g/mL的濃縮液。按藥物質(zhì)量濃度分別配制為低劑量50 g/L和高劑量100 g/L(以生藥量計(jì))。

1.3.2 分組 40只大鼠采用系統(tǒng)隨機(jī)化法隨機(jī)均分為4組。對(duì)照組：大鼠飲用自來(lái)水；模型組(草酸鈣腎結(jié)石模型組)：大鼠采用1%乙二醇和2%氯化銨3.0 mL每天分2次灌胃；實(shí)驗(yàn)組：在草酸鈣腎結(jié)石模型制作的同時(shí)給予藥物干預(yù)，采用50 g/L(低劑量)或100 g/L(高劑量)夏枯草水提取物1.0 g/d灌胃，每天1次。各組動(dòng)物飼養(yǎng)4周后處死，取出腎臟，將腎臟標(biāo)本修剪為1～1.5 cm3組織塊，一部分以10%甲醛溶液固定、石蠟包埋，制成厚度為4 μm的腎臟組織切片；一部分采用液氮速冷保存，用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western-blot的檢測(cè)。

1.3.3 尿液和血液生化指標(biāo)檢測(cè) 各組動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1天用代謝籠收集24 h尿量，測(cè)24 h尿液Ox含量、尿液總Mg2+和Ca2+的含量；于下腔靜脈穿刺取血，檢測(cè)血清Ca2+，P，BUN和Cr含量。

1.3.4 腎臟組織學(xué)指標(biāo) 將腎臟組織切片進(jìn)行H-E染色，光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠腎臟組織的改變。根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判定大鼠腎臟草酸鈣結(jié)石嚴(yán)重程度：腎皮質(zhì)、髓質(zhì)及腎乳頭形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)顯著的結(jié)晶沉淀物及腎結(jié)石計(jì)0分；腎臟皮質(zhì)及髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)散在的、少量的結(jié)晶沉淀計(jì)1分；腎皮質(zhì)以及髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)明顯的游離結(jié)晶以及結(jié)晶沉淀物計(jì)2分；腎乳頭部位可見(jiàn)鈣化斑、腎皮質(zhì)及髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較多結(jié)晶計(jì)3分；腎乳頭部位可見(jiàn)鈣化斑、腎皮質(zhì)及髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量結(jié)晶并伴有游離結(jié)石形成計(jì)4分[3]。

1.3.5 Western-blot測(cè)定 將取得的腎臟組織塊采用勻漿器制成勻漿后，以磷酸緩沖液(PBS)洗滌2～3次，加入組織裂解液進(jìn)行裂解，加入蛋白抽提液抽提總蛋白。紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度：取蛋白20～100 μg，經(jīng)10%SDS-PAGE電泳分離、轉(zhuǎn)膜和封閉后，加入TRPV5(1∶1 000)和β-actin(1∶500)抗體4 ℃孵育過(guò)夜，1∶5 000稀釋的HRP標(biāo)記的二抗室溫孵育1.5 h，暗室曝光，X線(xiàn)膠片顯影、定影、曝光。目的條帶以β-actin平均光密度值進(jìn)行內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)校正，用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)蛋白相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析。

1.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 以GAPDH作為內(nèi)參，人工合成GAPDH標(biāo)準(zhǔn)模板，稀釋成不同濃度，分別取樣2 μL加入30 μL的反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。以標(biāo)準(zhǔn)模板Ct為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品各稀釋度的起始靶DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)作為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。用RNA提取試劑盒提取各組腎組織中的RNA，確定樣本的純度和濃度，按照cDNA合成試劑盒的要求，將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1 μL進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增體系：5 μL 2×SYBR Green熒光定量試劑、2 μL引物(上、下游各1 μL，終濃度200 nmol/L、1 μL cDNA。擴(kuò)增條件：95 ℃ 5 min→95 ℃ 10 s→60 ℃ 35 s，40個(gè)循環(huán)。得到樣本的Ct值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所得公式，得出每組樣本的基因相對(duì)拷貝數(shù)(表1)。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物和探針

2 結(jié) 果

2.1 夏枯草提取物對(duì)大鼠腎臟組織學(xué)的影響 對(duì)照組大鼠腎小管未見(jiàn)擴(kuò)張和任何草酸鈣晶體沉積；模型組大部分鼠腎組織腫脹，表面可見(jiàn)點(diǎn)狀分布結(jié)晶或鈣化，H-E染色可見(jiàn)草酸鈣結(jié)晶為無(wú)色透明晶體，腎小管管腔明顯擴(kuò)張，多數(shù)管腔內(nèi)存在片狀結(jié)晶，鏡下見(jiàn)結(jié)晶體主要位于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管，上皮細(xì)胞明顯腫脹，腎間質(zhì)有明顯慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；不同濃度夏枯草提取物作用后，腎小管腔僅可見(jiàn)較少散在草酸鈣結(jié)晶存在，管腔擴(kuò)張程度較草酸鈣結(jié)石組輕(圖1)。組織學(xué)評(píng)分結(jié)果顯示，與對(duì)照組評(píng)分(1.08±0.22)比較，模型組為(3.56±0.95)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低、高劑量實(shí)驗(yàn)組評(píng)分分別為(2.63±0.67)和(2.08±0.34)，與模型組比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

A:對(duì)照組.大鼠腎小管未見(jiàn)擴(kuò)張和任何草酸鈣晶體沉積; B:模型組.結(jié)晶體主要位于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管,上皮細(xì)胞明顯腫脹,腎間質(zhì)有明顯慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn); C,D:低、高劑量實(shí)驗(yàn)組.腎小管腔可見(jiàn)較少散在草酸鈣結(jié)晶存在,管腔擴(kuò)張程度較模型組組輕(箭頭所指為草酸鈣結(jié)晶).圖1 各組大鼠腎臟組織切片(H-E ×400) Fig 1 Histopathological manifestation in mice of different groups(H-E ×400)

2.2 夏枯草提取物對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響 與對(duì)照組比較，模型組血清BUN,Cr,Ca2+和P含量明顯升高；經(jīng)不同濃度的夏枯草提取物作用后，血清BUN，Cr明顯降低(P<0.05)，但Ca2+,P含量變化無(wú)顯著性差異(表1)。

表1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清生化指標(biāo)的比較

n=10. BUN：尿毒氮； Cr：肌酐. 與對(duì)照組比較,☆:P<0.05;與模型組比較,△:P<0.05.

2.3 夏枯草提取物對(duì)大鼠尿Ox，Ca2+，Mg2+的影響 與對(duì)照組比較，模型組尿液Ca2+及Ox含量明顯升高；經(jīng)不同濃度的夏枯草提取物作用后，可降低Ca2+濃度濃度，且成藥物劑量依賴(lài)性(P<0.05)，但對(duì)Ox含量影響無(wú)顯著性差異；各組大鼠尿液Mg2+濃度無(wú)明顯差異(表2)。

表2 各組大鼠24 h尿液中Ca2+ ，Mg2+和Ox含量比較

n=10. Ox:草酸. 與對(duì)照組比較,☆:P<0.01;與模型組比較,△:P<0.05.

2.4 夏枯草水提取物對(duì)大鼠TRPV5 mRNA及蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，模型組TRPV5 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯降低；經(jīng)不同濃度的夏枯草提取物作用后，TRPV5 mRNA及蛋白表達(dá)明顯升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。

n=10. 與對(duì)照組比較,☆:P<0.05;與模型組比較,△:P<0.05.圖2 夏枯草水提取物對(duì)不同實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV5 mRNA及蛋白的影響Fig 2 The effect of prunella vulgaris on TRPV5 mRNA and protein of different groups

3 討 論

腎結(jié)石屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)“砂淋”“石淋”和“血淋”范疇，是泌尿外科的常見(jiàn)病和多發(fā)病，其中70%～80%為草酸鈣結(jié)石。草酸鈣結(jié)石發(fā)病機(jī)制尚不清楚，治療后容易復(fù)發(fā)，目前尚不能對(duì)其進(jìn)行有效地防治。中藥材用于防治尿石癥已有數(shù)千年歷史，研究者一直試圖在中藥材中尋找預(yù)防和治療草酸鈣結(jié)石的藥物和方劑[4]。夏枯草為唇形利夏枯草屬植物夏枯草的干燥果穗，其味苦、性寒、辛，有降壓、利尿、清熱散結(jié)和抗腫瘤等功效，已經(jīng)明確夏枯草的化學(xué)成分有三萜類(lèi)化合物、甾體類(lèi)化合物、黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)、有機(jī)酸和苯丙素類(lèi)等[5]。Koide等研究也發(fā)現(xiàn)，夏枯草能有效抑制尿草酸鈣結(jié)晶的生長(zhǎng)和聚集，有顯著抑制草酸鈣結(jié)石形成的作用[6]。尹春萍等研究也發(fā)現(xiàn)，夏枯草水提取液在體外明顯抑制尿草酸鈣結(jié)晶的生長(zhǎng)和自發(fā)性結(jié)晶的形成，隨著人工尿液的離子強(qiáng)度降低和pH值升高時(shí)，其抑制活性逐漸增強(qiáng)[7]。研究認(rèn)為，低離子強(qiáng)度和高pH可增強(qiáng)夏枯草吸附于草酸鈣晶體表面的能力，不利于草酸鈣結(jié)晶的形成。越來(lái)越多的研究證實(shí)，夏枯草水提取物在體外能夠促進(jìn)草酸鈣結(jié)晶成核和微結(jié)晶作用，降低草酸鹽的飽和度，從而顯著抑制草酸鈣晶體的聚集和生長(zhǎng)，減少草酸鈣結(jié)石的形成,但是夏枯草提取物防治結(jié)石的理論基礎(chǔ)及具體機(jī)制仍不清楚[8]。

物理化學(xué)研究表明，尿液中的草酸鈣飽和度與尿鈣的濃度有關(guān)，尿鈣增高易于誘發(fā)或促進(jìn)草酸鈣結(jié)石的形成。腎小管對(duì)鈣的主動(dòng)重吸收對(duì)尿鈣水平影響較大，是控制尿鈣水平的主要因素[9]。TRPV5是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)控Ca2+跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的重要蛋白質(zhì)分子，是位于細(xì)胞膜上的一種高度選擇性的受體活化性離子通道，具有高度鈣離子選擇性，其中以腎遠(yuǎn)曲小管和集合小管表達(dá)最強(qiáng)。TRPV5在機(jī)體內(nèi)常與鈣結(jié)合蛋白、Na+/Ca2+交換蛋白等其他鈣主動(dòng)重吸收蛋白共存在、共表達(dá)，介導(dǎo)鈣離子跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的通道，控制鈣離子的跨膜流動(dòng)，維持體內(nèi)鈣離子的平衡[10]。王少剛等研究發(fā)現(xiàn)，在遺傳性高鈣尿結(jié)石大鼠腎組織中，TRPV5是尿鈣重吸收重要的調(diào)控分子，其表達(dá)水平下降可能是特發(fā)性高鈣尿癥及尿石形成的重要發(fā)病機(jī)制[11]。Hoenderop等對(duì)TRPV5 基因敲除的小鼠研究發(fā)現(xiàn)，TRPV5蛋白失活小鼠的尿鈣排泄量比正常對(duì)照組高出6倍。表明TRPV5缺乏導(dǎo)致鈣的重吸收障礙，繼而產(chǎn)生了高尿鈣和鈣排泄量的增加[12]。由此可見(jiàn)，TRPV5是腎對(duì)尿鈣主動(dòng)重吸收的關(guān)鍵限速點(diǎn)，也是尿鈣水平的主要調(diào)控點(diǎn)，其在維持尿鈣水平中發(fā)揮了重要作用。

本研究通過(guò)草酸鈣大鼠模型從大鼠體內(nèi)研究夏枯草提取物對(duì)大鼠尿鈣調(diào)控通路的影響，結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠血清BUN、Cr均低于其他實(shí)驗(yàn)組，血清Ca2+，P的含量各組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；夏枯草提取液低劑量組及高劑量組血清BUN，Cr水平與模型組比較雖然差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是有降低趨勢(shì)，表明乙二醇-氯化銨法誘導(dǎo)草酸鈣結(jié)石模型大鼠的腎功能有一定損害，而夏枯草水提取液對(duì)大鼠腎功能無(wú)明顯的影響，而且可以起到一定程度的保護(hù)腎功能作用。夏枯草水提取液不能降低血清Ca2+的濃度，與模型組比較夏枯草提取物可降低尿液Ca2+濃度，且成藥物劑量依賴(lài)性，但是并不能降低尿液草酸的濃度。表明夏枯草水提取液對(duì)草酸的代謝無(wú)顯著性影響，其抑制草酸鈣結(jié)石的形成可能是降低了尿液中Ca2+的濃度，從而抑制了草酸鈣的飽和度。采用熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)表明，夏枯草水提取物能明顯上調(diào)大鼠腎組織TRPV5 mRNA和蛋白表達(dá)水平，并且呈藥物劑量依賴(lài)性。提示夏枯草可能上調(diào)大鼠腎組織TRPV5的表達(dá)，增加腎小管對(duì)尿Ca2+的主動(dòng)重吸收，減少尿Ca2+的排出，降低了尿液中草酸鹽的飽和度，起到抑制草酸鈣結(jié)石形成的作用。

[1] Utsunomiya M,Koide T,Yamaguchi S,etal. The effect of kanpou medicine on the growth and aggregation of calcium oxalate crystalsinvitro[J].HinykikaKiyo, 1991,37(10):1097-1101.

[2] Santonil G,Farfariello V. TRP channels and cancer: new targets for diagnosis and chemotherapy[J].EndocrMetabImmuneDisordDrugTargets, 2011,11(1):54-67.

[3] 米 軍,王志平,段建敏,等． 金錢(qián)草聯(lián)合碳酸鋰預(yù)防草酸鈣腎結(jié)石機(jī)制[J]． 暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版), 2014,35(2):171-176.

[4] 王 林，朱曉玲. 利水滲濕中藥防治草酸鈣腎結(jié)石的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中西結(jié)合腎病雜志, 2005,116(10):924-926.

[5] Gohel M D,Wong S P． Chinese herbal medicines and their efficacy in treating renal stones[J]．UrolRes, 2006,34(6):365-372.

[6] Koide T,Yamaguchi S,Utsunomiya M,etal. The inhibitory effect of kampou extracts on in vitro calcium oxalate crystallization and in vivo stone formation in an animal model[J].IntJUrol, 1995,2(2):81-86.

[7] 尹春萍,劉繼紅,張長(zhǎng)弓. 不同離子強(qiáng)度及pH值時(shí)澤瀉和夏枯草對(duì)草酸鈣結(jié)晶形成的抑制作用觀察[J]. 同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1996,25(4):321-323.

[8] 肖勁逐,李浩勇,粱培育,等. 夏枯草提取物對(duì)尿草酸鈣結(jié)石形成的抑制作用[J]. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志, 2007,24(12):1605-1608.

[9] Vezzoli G,Terranegra A,Rainone F,etal. Calcium-sensing receptor and calcium kidney stones[J].JTransMed, 2011,22(9):201-203.

[10] Jang H R,Kim S,Heo N J,etal. Effects of thiazide on the expression of TRPV5, Calbindin-D28K, and sodium transporters in hypercalciuric rats[J].JKoreanMedSci, 2009,24(Suppl):161-169.

[11] 王少剛,胡東亮,席啟林,等. 新型鈣離子通道TRPV5在遺傳性高鈣尿結(jié)石大鼠腎組織中的表達(dá)[J]． 中華泌尿外科雜志,2008,29(2):124-126.

[12] Hoenderop J G,van Leeuwen J P,Van der Eerden B C,etal. Renal Ca2+wasting, hyperabsorption, and reduced bone thickness in mice lacking TRPV5[J].JClinInvest, 2003,112(12):1906-1914.

(編輯:常志衛(wèi))

The Effect and Its Mechanism ofPrunellaVulgarison Inhibiting Renal Calcium Oxalate Stone Formation

HE Yanfeng, GAO Rui, JIANG Tao, LIN Xi, MAO Houping

The Second Department of Urology, The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou350005，China

Objective To study the effect of prunella vulgaris on calcium ion channel TRPV5 in rat, and investigate its mechanism on calcium oxalate nephrolithiasis. Methods The Wistar rats were randomly divided into four groups(n=10 each): A group (normal control), B group (stone formation model), C group (treated by 50 g/L methanolic extract from prunella vulgaris), D group(treated by 100 g/L methanolic extract from prunella vulgaris). The model rats with renal calcium oxalate stone formation were induced by intragastric administration of ethylene glycol and ammonium chloride. After 4 weeks, the concentration of serum creatinine(Cr), blood urea nitrogen(BUN), Ca2+, P, 24 h urinary excretion Ca2+, Mg2+, and oxalate were detected. Renal samples were collected to prepare tissue slices and observe the pathological changes. The expression of TRPV5 was detected by Western blotting and real-time PCR. Results Compared with control group, nephrolithiasis rats in B group (model group) showed significant pathological changes in calcium oxalate calculus. After prunella vulgaris treatments, the renal pathological changes were shown. The concentration of Cr, BUN and urine calcium in group C and D were lower than those in group B(P<0.05) , There was no difference in serum Ca2+，P, urine Mg2+, and oxalate between group C, D and group B(P>0.05). The expressions of TRPV5 protein and mRNA in group C and D were higher than those in group B(P<0.05). Conclusion The results showed that prunella vulgaris may increase the expression of TRPV5 in rats, while decrease the urine Ca2+, and reduce calcium oxalate saturation. It can inhibit renal calcium oxalate stone formation.

prunella asiatica;calcium oxalate；calculi, kidney；vanillic acid;potentiometry

2016-12-23

福建省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題(WZSY201310)

福建醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院泌尿外科二區(qū)， 福州 350005

何彥豐，男，住院醫(yī)師

高 銳.Email：fyyyruigao@163.com

R-332； R282.71； R322.61； R348.1； R692.4

: A

: 1672-4194(2017)04-0223-05