王雷

摘 要：本文采用高校液相測定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動(dòng)相，檢測波長為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。阿奇霉素在0.5～5.0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。阿奇霉素的平均回收率為99.3%，RSD為0.81%（n=6）；此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量測定。

關(guān)鍵詞：注射用乳糖酸阿奇霉素；阿奇霉素；含量

阿奇霉素（Azithromycin）是一種屬于大環(huán)內(nèi)酯的抗生素，是一種在臨床上使用非常普遍的抗生素。注射用乳糖酸阿奇霉素適應(yīng)于由沙眼衣原體、淋病雙球菌、人型支原體引起的需首先采取靜脈給藥治療的盆腔炎或由肺炎衣原體、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、卡他摩拉菌、嗜肺軍團(tuán)菌或肺炎鏈球菌引起的需要首先采取靜脈給藥治療的社區(qū)獲得性肺炎。本文采用高校液相測定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量。

1 儀器與試藥

FR224CN奧豪斯電子天平（上海書培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HH-601超級恒溫水?。ńK金壇市億通電子有限公司）；屹譜儀器U-1810準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；Aurora-F1實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)洗瓶機(jī)（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）；1810-B石英自動(dòng)雙重蒸餾水器（上海康路儀器設(shè)備有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；SCQ-7201E雙頻加熱型超聲波清洗機(jī)（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；HYYTH-10小型實(shí)驗(yàn)室污水處理設(shè)備（濰坊浩宇環(huán)保有限公司）；UV2800雙光束紫外可見分光光度計(jì)（四川匯巨儀器設(shè)備有限公司）。阿奇霉素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫銨（德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、乙腈（德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、磷酸二氫鉀（德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、磷酸（德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、三乙胺（德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、磷酸（廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司）、甲醇（廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司）、醋酸（廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司）、醋酸銨（廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動(dòng)相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按阿奇霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取注射用乳糖酸阿奇霉素，精密稱取，加60毫升流動(dòng)相超聲處理10分鐘，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用流動(dòng)相分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾人同一量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含2mg的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除阿奇霉素外等的輔料及阿奇霉素合成過程中原輔料，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在阿奇霉素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，阿奇霉素對照品在0.5～5.0mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對照品溶液，精密吸取阿奇霉素對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.67%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的注射用乳糖酸阿奇霉素樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.63%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定，供試品阿奇霉素峰面積積分值的RSD為0.66%。結(jié)果表明阿奇霉素至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的阿奇霉素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時(shí)測定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.81%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定注射用乳糖酸阿奇霉素三批樣品中阿奇霉素的含量，含量為標(biāo)示量的100.1%、100.3%、99.8%。

3 討論

分別考察0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1），0.02moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈（90∶10），1%醋酸0.025mol.L-1醋酸銨溶液-乙腈（75∶25），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（95：5），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調(diào)pH至3.0）（40：60），磷酸鹽緩沖液一甲醇（70：30），0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液∶甲醇（95∶5）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動(dòng)相。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量測定。注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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