葛莉, 姚園園, 康天蘭, 李京耀, 何恒軍, 楊德龍, 栗孟飛*

(1.甘肅省干旱生境作物學(xué)重點實驗室，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州730070；2.甘肅省經(jīng)濟作物技術(shù)推廣站，甘肅 蘭州730030；3.甘肅省康縣中藥材技術(shù)指導(dǎo)站，甘肅 隴南746500；4.甘肅省康縣恒茂源中藥材專業(yè)合作社，甘肅 隴南746500)

不同收獲期貫葉連翹花中抗氧化能力、主要活性物質(zhì)變化及揮發(fā)性組分分離鑒定

葛莉1, 姚園園1, 康天蘭2, 李京耀3, 何恒軍4, 楊德龍1, 栗孟飛1*

(1.甘肅省干旱生境作物學(xué)重點實驗室，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州730070；2.甘肅省經(jīng)濟作物技術(shù)推廣站，甘肅 蘭州730030；3.甘肅省康縣中藥材技術(shù)指導(dǎo)站，甘肅 隴南746500；4.甘肅省康縣恒茂源中藥材專業(yè)合作社，甘肅 隴南746500)

為了探明不同收獲期(花蕾期、盛花期、結(jié)果期)貫葉連翹花中抗氧化能力、總黃酮、酚類和金絲桃素含量等的變化，以栽培花器官為實驗材料，采用HPLC和GC-MS等方法對70%乙醇提取液進行測定與分析。結(jié)果表明，花蕾期和盛花期貫葉連翹花提取液自由基抑制率(inhibition percentage, I%)和鐵離子還原/氧化能力(ferric reducing/antioxidant power, FRAP)均顯著高于結(jié)果期，花蕾期和盛花期二者之間無顯著差異；總黃酮和酚類化合物以及金絲桃素含量均呈現(xiàn)為盛花期>花蕾期>結(jié)果期，且在P<0.05水平下達到顯著差異；盛花期花中分離鑒定得到37種揮發(fā)性化學(xué)組分，其中，主要成分有1,1-二乙氧基-乙烷(19.26%)、1-十六醇(17.85%)、β-衣蘭烯(10.71%)、(Z, Z)-9,12-十八碳二烯酰氯(8.42%)、十六烷酸乙酯(8.40%)、葉綠醇(5.79%)、石竹烯氧化物(4.56%)等。以上研究結(jié)果表明，花蕾期至盛花期采集貫葉連翹花器官較佳，提取液抗氧化能力較強，主要活性物質(zhì)含量較高，揮發(fā)性成分較為豐富，該研究結(jié)果將對貫葉連翹生產(chǎn)、大面積種植栽培具有重要的參考價值和實踐意義。

貫葉連翹；收獲時期；抗氧化能力；總黃酮和酚類；金絲桃素；揮發(fā)性組分；GC-MS分離鑒定

貫葉連翹(Hypericumperforatum)，又名貫葉金絲桃，西方稱為圣·約翰草(St. John’s Wort)，是藤黃科(Guttiferae) [亦作為金絲桃科(Hypericaceae)]多年生草本植物，主要分布于我國甘肅、陜西、新疆、四川等地，成熟全草具有悠久的藥用歷史[1-2]。傳統(tǒng)中醫(yī)認為，貫葉連翹具有抗菌消炎、收斂止血、調(diào)經(jīng)活血、消腫止痛之功效，主要集中于鎮(zhèn)靜、抗炎、傷口愈合等方面[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，貫葉連翹具有抗抑郁、抗癌、抗病毒、抗氧化、鎮(zhèn)痛等作用[4-6]。由于貫葉連翹獨特的藥理學(xué)作用，目前已成為全球研究開發(fā)的熱點草藥之一[3,7]。

研究表明，貫葉連翹含有多種具生物活性的化學(xué)成分，其中主要有苯并二蒽酮類化合物，如金絲桃素、偽金絲桃素、異金絲桃素等，黃酮類化合物，如蘆丁、槲皮素、金絲桃苷等，間苯三酚類化合物，如貫葉金絲桃素和加貫葉金絲桃素，以及揮發(fā)油和氨基酸類化合物等[8-9]。很多研究發(fā)現(xiàn)，貫葉連翹中金絲桃素及其他活性物質(zhì)的含量存在組織器官、生長季節(jié)和原料產(chǎn)地的差異。比如，錢秋霞等[8]報道稱，貫葉連翹中金絲桃素在花和種子中的含量明顯高于莖和葉；溫普紅等[10]研究發(fā)現(xiàn)，貫葉連翹各部位中金絲桃素含量分布為：花>全草上>葉>全草>果>全草下>莖>根，且結(jié)果前期采集植株分枝以上部位品質(zhì)最佳；前期研究也發(fā)現(xiàn)，貫葉連翹中金絲桃素的含量顯著表現(xiàn)為花>葉>莖，總黃酮和酚類化合物含量在花和葉中的含量顯著大于莖[2]。在揮發(fā)性成分組成方面，曾虹燕等[11]通過對長沙栽培的貫葉連翹葉進行氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectrometer, GC-MS)分析，54種揮發(fā)性組分得到分離鑒定，且多為倍半萜類物質(zhì)；孫建勛等[12]對貴州省貫葉連翹葉進行分離鑒定，41種揮發(fā)性組分得到分離，其中，主要成分有γ-衣蘭油烯、α-姜黃烯、δ-蓽澄茄烯、β-反-金合歡烯等；孟祥穎等[13]通過對甘肅省通渭縣貫葉連翹花進行分析，得到41種揮發(fā)性組分。王小芳等[14]從甘肅省天水市小隴山貫葉連翹全草分離鑒定出75個揮發(fā)性組分。

到目前為止，金絲桃素主要從野生貫葉連翹植株中提取分離，隨著市場對金絲桃素需求的逐漸增加，使得野生貫葉連翹資源被過度采挖[6-7]，因此，野生轉(zhuǎn)栽培以及大規(guī)模種植研究勢在必行。對于栽培貫葉連翹在不同收取時期抗氧化能力、主要活性物質(zhì)含量以及揮發(fā)性組分的變化，目前研究報道較少。實驗在前期野生貫葉連翹馴化栽培研究的基礎(chǔ)上[2]，采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography, HPLC)和GC-MS等方法對不同收獲期(花蕾期、盛花期、結(jié)果期)貫葉連翹花中抗氧化能力、總黃酮、酚類和金絲桃素含量以及揮發(fā)性成分進行分析，旨在為貫葉連翹生產(chǎn)、大面積種植栽培提供主要理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1實驗材料

以3年野生馴化栽培的貫葉連翹花器官為實驗材料，采自甘肅省康縣岸門口鎮(zhèn)中節(jié)村(甘肅省中藥材野生貫葉連翹引種馴化示范區(qū))，于貫葉連翹花蕾期(2016年5月29日)、盛花期(2016年6月8日)、結(jié)果期(2016年6月19日)采集實驗材料，陰干后在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)干旱生境作物學(xué)重點實驗室進行測定與分析。

1.2實驗方法

1.2.1提取液的制備 取陰干的材料，研碎后過0.177 mm篩，準(zhǔn)確稱取0.50 g粉末，分別置于含20 mL 70%乙醇具塞三角瓶中，室溫、黑暗、120 r/min旋轉(zhuǎn)振蕩提取4 d；然后在4℃、5000 r/min條件下離心10 min，取上清液，用70%乙醇定容至25 mL，提取液25 mL置于4 ℃冰箱中保存，用于抗氧化能力、總黃酮、總酚類、金絲桃素含量以及揮發(fā)性組分測定與分析。

1.2.2抗氧化能力的測定 為了更準(zhǔn)確、全面地反映提取液的總抗氧化能力，分別采用較為廣泛應(yīng)用的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)和鐵離子還原/氧化能力(ferric reducing/antioxidant power, FRAP)兩種測定方法。

DPPH法參考Nencini等[15]的方法測定。具體步驟為：吸取1.2.1中提取液20 μL，加到提前制備好的7.0 mL×10-4mol/L DPPH 甲醇溶液中，室溫黑暗振蕩反應(yīng)30 min，取出在 515 nm 下測定反應(yīng)液的吸光值A(chǔ)(以不加樣品溶液為參比對照，吸光值A(chǔ)0；以70%乙醇為空白對照)，每個實驗重復(fù)3次。計算公式為：

抑制率(inhibition percentage, I%)=[(A0-A)/A0]×100

式中：A為樣品溶液的吸光值；A0為不加樣品溶液的吸光值。

FRAP法參考Benzie等[16]的方法測定。具體步驟為：吸取1.2.1中提取液20 μL加到提前制備好的3.0 mL FRAP 溶液中(要求現(xiàn)配現(xiàn)用)，溶液配制方法為：取10倍體積的乙酸鹽緩沖液，pH 3.6；1倍體積 10 mmol/L 2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪[2,4,6-tris (2-pyridyl)-s-triazine, TPTZ]的40 mmol/L HCl溶解液，1倍體積的20 mmol/L FeCl3·6H2O，三者混合均勻。水浴鍋中37 ℃ 反應(yīng)4 min后，取出在 593 nm 下測定反應(yīng)液的吸光值A(chǔ)(以不加樣品溶液為參比對照，吸光值A(chǔ)0；以70%乙醇為空白對照)。每個實驗重復(fù)3次，樣品溶液的抗氧化能力以 500 μmol/L Fe2+(FeSO4·7H2O) 為參比基礎(chǔ)。計算公式為：

FRAP 值 (μmol/L)=[(A-A0)/(AFeSO4·7H2O-A0)]×500 (μmol/L)

式中：A為樣品溶液的吸光值；AFeSO4·7H2O為FeSO4·7H2O溶液的吸光值；A0為不加樣品溶液的吸光值。

1.2.3總黃酮含量的測定 采用亞硝酸鈉—硝酸鋁—氫氧化鈉法測定總黃酮化合物的含量，參考Ma等[17]的測定方法。具體步驟為：吸取1.2.1中提取液200 μL置于試管中，依次加入2.0 mL ddH2O和0.3 mL 5% NaNO2，混合振蕩5 min后，加入0.3 mL 10%AlCl3，混合振蕩1 min后，加入2.0 mL 1 mol/L NaOH，充分混合后，在 510 nm下測定反應(yīng)液的吸光值A(chǔ)，以不加樣品溶液的為空白對照。每個實驗重復(fù)3次，總黃酮化合物的含量以兒茶素(catechin，CE)為標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。計算公式為：

總黃酮含量(mg/g DW)=(C×V2)/(V1×M×1000)

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C(CE μg)= 200A-5.80 (R2=0.996)

式中：C為總黃酮的量(μg)；V1為測定樣品溶液的體積(mL)；V2為提取液的體積(mL)；A為樣品溶液的吸光值；M為材料的干物質(zhì)重量(g)。

1.2.4總酚類含量的測定 采用福林酚(Folin-Ciocalteu)試劑法測定總酚類化合物的含量，參考Beato等[18]的測定方法。具體步驟為：吸取1.2.1中提取液20 μL置于試管中，依次加入2.0 mL 10% Folin-Ciocalteu和1.0 mL 7.5% Na2CO3，混合振蕩5 min后，置于水浴鍋中37 ℃ 下避光反應(yīng)1 h，取出在760 nm下測定反應(yīng)液的吸光值A(chǔ)，以不加樣品溶液的為空白對照。每個實驗重復(fù)3次，總酚類化合物的含量以沒食子酸(gallic acid, GAE)為標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。計算公式為：

總酚類含量(mg/g DW)=(C×V2)/(V1×M×1000)

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C(GAE μg)=34.48A+0.72 (R2=0.994)

式中：C為總酚類的量(μg)；V1為測定樣品溶液的體積(mL)；V2為提取液的體積(mL)；A為樣品溶液的吸光值；M為材料的干物質(zhì)重量(g)。

1.2.5金絲桃素含量的測定 采用HPLC法測定材料中金絲桃素的含量，參考吳畏等[19]的方法測定。具體步驟為：將1.2.1中提取液用0.22 μm有機濾膜過濾，色譜柱為C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)，流動相為甲醇∶水(85∶15，氨水調(diào)pH 9.5)，流速1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測波長588 nm，進樣量5 μL，每個實驗重復(fù)3次。以金絲桃素(sigma，純度>95%，HPLC，貨號56690)為對照品。首先，用90%甲醇配制10.0 μg/mL的金絲桃素溶液；然后，采用梯度濃度稀釋法分別獲得5.0，2.0，1.0，0.5，0.25 μg/mL的低濃度溶液；以峰面積(Y)對檢測濃度(C, μg/mL)進行回歸計算，得到標(biāo)準(zhǔn)品金絲桃素的標(biāo)準(zhǔn)方程分別為Y=48246C+1071 (R2=0.994)，說明金絲桃素在0.25～10.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈線性關(guān)系。樣品中金絲桃素的含量計算公式為：

金絲桃素含量(mg/g DW)=(C×V)/(M×1000)

式中：C為金絲桃素的濃度(μg/mL)；V為提取液的體積(mL)；M為材料的干物質(zhì)重量(g)。

1.2.6GC-MS分離鑒定 吸取1.2.1中提取液10.0 mL，在70 ℃條件下減壓蒸發(fā)濃縮至小體積，濃縮液用無水乙醇溶解并定容至2.0 mL，用于GC-MS分離與鑒定。氣相色譜條件為：PE-8700氣相色譜儀(美國PE 公司)，帶火焰離子化檢測器(FID)，石英毛細管柱：30 m×0.32 cm×0.25 mm，載氣為N2，柱流量為1.0 mL/min，柱前壓為115 kPa，分流比為100∶1；進樣量為1 μL，可編程序升溫進樣器(PTV)：初始溫度50 ℃, 10 s內(nèi)升至280 ℃；FID溫度為300 ℃；程序升溫為80 ℃(2 min)，每5 ℃/min升溫至280 ℃(10 min)。質(zhì)譜條件為：離子源，EI；源溫，200 ℃；電離電壓，70 eV；收集電流：300 μA；發(fā)射電流，1 mA；儀器分離率，600；質(zhì)量范圍，50～500。

1.3統(tǒng)計與分析

每個實驗重復(fù)3次，采用Microsoft Office Excel 2007軟件作圖，SPSS 11.5軟件進行One-Way ANOVA Duncan數(shù)據(jù)差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1不同收獲期貫葉連翹花提取液的抗氧化能力

圖1為不同收獲期貫葉連翹花提取液的抗氧化能力。結(jié)果顯示，在利用DPPH和FRAP兩種方法測定的結(jié)果中，花提取液的抑制率(圖1A)和FRAP值(圖1B)均表現(xiàn)為盛花期>花蕾期>結(jié)果期，其中，花蕾期和盛花期均顯著高于結(jié)果期，但花蕾期和盛花期之間在P<0.05水平下未達到顯著差異。

圖1 不同收獲期貫葉連翹花提取液的抑制率(A)和FRAP值(B)Fig.1 Inhibition percentage (A) and FRAP value (B) of extracts from flower of H. perforatum at different harvest stages 不同小寫字母表示在P<0.05水平下達到顯著性差異。下同。Different lowercase letters indicate significant differences at P<0.05 level. The same below.

2.2不同收獲期貫葉連翹花中總黃酮和酚類物質(zhì)含量的變化

圖2為不同收獲期貫葉連翹花中總黃酮(圖2A)和酚類(圖2B)化合物的含量。結(jié)果顯示，在3個不同收獲時期，盛花期花中總黃酮和酚類化合物的含量分別達到56.68和97.03 mg/g DW，均呈現(xiàn)為盛花期>花蕾期>結(jié)果期，且均在P<0.05水平下達到顯著差異。

圖2 不同收獲期貫葉連翹花中總黃酮(A)和酚類(B)化合物的含量Fig.2 Content of total flavonoids (A) and phenolics (B) in flower of H. perforatum at different harvest stages

2.3不同收獲期貫葉連翹花中金絲桃素含量的變化

圖3 不同收獲期貫葉連翹花中金絲桃素的含量Fig.3 Hypericin content in flower of H. perforatum at different harvest stages

圖3為不同收獲期貫葉連翹花中金絲桃素的含量。結(jié)果顯示，在花蕾期、盛花期和結(jié)果期3個不同收獲時期，花中金絲桃素的含量分別為1.20，1.57和0.85 mg/g DW，呈現(xiàn)為盛花期>花蕾期>結(jié)果期，且在P<0.05水平下達到顯著差異。

2.4盛花期貫葉連翹花提取液的GC-MS分離與鑒定

為了進一步了解貫葉連翹盛花期花器官中提取液揮發(fā)性組分特性，實驗對70%乙醇提取液進行了GC-MS分離與鑒定。表1為盛花期貫葉連翹花提取液GC-MS分離與鑒定結(jié)果。由表1可知，盛花期花70%乙醇提取液共含有37種揮發(fā)性組分，其中，1,1-二乙氧基-乙烷、1-十六醇、β-衣蘭烯、(Z, Z)-9,12-十八碳二烯酰氯、十六烷酸乙酯、葉綠醇和石竹烯氧化物相對含量較高，分別為19.26%，17.85%，10.71%，8.42%，8.40%，5.79%和4.56%，而2-肉豆蔻酰泛酰巰基乙胺、3-乙基-5-(2-乙基丁基)-十八烷、(Z,Z,Z)-8,11,14-二十碳三烯酸和辛糖相對含量較低，分別為0.08%，0.05%，0.03%和0.02%。

3 討論與結(jié)論

植物的次生代謝是植物在長期進化過程中與環(huán)境(生物的和非生物的)相互作用的結(jié)果，次生代謝產(chǎn)物在植物提高自身保護和生存競爭能力、協(xié)調(diào)與環(huán)境關(guān)系上充當(dāng)著重要的角色，其產(chǎn)生和變化比初生代謝產(chǎn)物與環(huán)境有著更強的相關(guān)性和對應(yīng)性[20-21]。植物次生代謝具有不同于初生代謝的特點，不僅具有明顯的種屬特異性，就是同一種或一類次生代謝產(chǎn)物在植物體內(nèi)也不是普遍存在，而是限制于一些特定的細胞、組織、器官或是特定的發(fā)育時期[21]。報道稱，貫葉連翹中金絲桃素和偽金絲桃素含量與基因型和生長季節(jié)有關(guān)，狹葉地上部分金絲桃素含量明顯高于寬葉基因型，7至9月(澳大利亞新南威爾士州)采集地上部分金絲桃素和偽金絲桃素含量較高[22]。本研究表明，在花蕾期、盛花期和結(jié)果期3個收獲時期，盛花期貫葉連翹花70%乙醇提取液中總黃酮、酚類和金絲桃素含量分別達到56.68，95.89和1.57 mg/g DW，均顯著高于其他兩個時期；DPPH和FRAP兩種抗氧化能力測定方法均顯示，花器官在花蕾期和盛花期采集的抗氧化能力顯著優(yōu)于結(jié)果期。

表1 盛花期貫葉連翹花70%乙醇提取液的GC-MS分離與鑒定Table 1 Separation and identification of 70% ethanol extracts from flower of H. perforatum at blooming stages by GC-MS

Schwob等[23]通過對生長期、花蕾期、盛花期和結(jié)果期4個采集時期野生貫葉連翹地上部分進行揮發(fā)油GC-MS分析，97個化學(xué)組分得到分離鑒定，4個采集時期均含有64個化學(xué)組分，其中主要有石竹烯氧化物、β-石竹烯、斯巴醇、1-十四醇、柏木萜烯、1-十二醇、衣蘭油烯；單萜類和脂肪族類化合物含量水平因采收季節(jié)而改變，但化學(xué)組分?jǐn)?shù)量隨著采集季節(jié)延遲而增加。Majid[24]對花蕾期、盛花期和結(jié)果期3個采集時期栽培貫葉連翹地上部分進行GC-MS分離鑒定，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油的總量在盛花期高于花蕾期和結(jié)果期，其中揮發(fā)油的化學(xué)組分主要有長葉烯、α和γ桉葉油醇、斯巴醇、牛兒烯、β-石竹烯、杜松醇、α-杜松萜烯和甜沒藥烯，并且這些化學(xué)組分的含量水平受到采集時期的影響。本研究通過對盛花期采集的栽培貫葉連翹花進行GC-MS分析，共有37個化學(xué)組分得到分離與鑒定，其中主要有1,1-二乙氧基-乙烷(19.26%)、1-十六醇(17.85%)、β-衣蘭烯(10.71%)、(Z, Z)-9,12-十八碳二烯酰氯(8.42%)、十六烷酸乙酯(8.40%)、葉綠醇(5.79%)和石竹烯氧化物(4.56%)。對于不同研究報道貫葉連翹中揮發(fā)性組分存在種類和含量的差異，其主要受到貫葉連翹基因型和生長環(huán)境的影響[23,25-26]。很多研究表明，貫葉連翹中揮發(fā)性組分也具有顯著的生物學(xué)活性，比如，抗菌、消炎和抗氧化活性等[2，27-28]。但是，對于揮發(fā)性組分中具體某一化合物的生物學(xué)活性，目前還鮮見報道。

研究顯示，貫葉連翹各器官的分泌結(jié)構(gòu)與植株中金絲桃素以及其他分泌物的積累密切相關(guān)，葉和花中具有分泌細胞團(黑色腺點)和分泌囊(半透明腺點)二類內(nèi)部分泌結(jié)構(gòu)，它們來源相同，而分化發(fā)育不同；金絲桃素存在于分泌細胞團中，揮發(fā)油存在于分泌囊內(nèi)，并且分泌細胞團的大小和密度與金絲桃素的含量呈正比[29-30]。有報道稱，分泌細胞團和分泌囊是貫葉連翹對外界傷害的一種保護機制，可以避免病蟲害和食草動物的啃食[31-32]。將山林及溝邊的野生貫葉連翹栽培到光照充足的向陽區(qū)域，植株呈現(xiàn)為較強的光合特性[2]，而金絲桃素有可能是通過光合作用、脂肪酸代謝路徑等在細胞質(zhì)中進行初生代謝物(如乙酸、丙二酸等)的積累，進而通過一系列復(fù)雜的物質(zhì)轉(zhuǎn)運過程和酶促反應(yīng)來合成金絲桃素[33]。另外，黃酮類和酚類化合物在植物防御食草昆蟲和真菌侵襲中也起到重要作用，其還參與調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育等各種生理活性[20]，將光照不足的野生貫葉連翹栽培到光照充足的向陽區(qū)域，在盛花期黃酮和酚類化合物積累量顯著增加，可能是植株適應(yīng)強光的一種機制。綜合以上研究表明，不同收獲時期會對貫葉連翹花中總黃酮、酚類和金絲桃素含量、抗氧化能力以及揮發(fā)性組分產(chǎn)生顯著影響，花蕾期至盛花期采集花器官品質(zhì)較佳。該研究結(jié)果將對貫葉連翹生產(chǎn)、大面積種植栽培具有重要的參考價值和實踐意義。

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Antioxidantcapacity,bioactivecompounds,andvolatileconstituentsofflowersofHypericumperforatumatdifferentharveststages

GE Li1, YAO Yuan-Yuan1, KANG Tian-Lan2, LI Jing-Yao3, HE Heng-Jun4, YANG De-Long1, LI Meng-Fei1*

1.GansuProvincialKeyLabofAridlandCropScience,CollegeofLifeScienceandTechnology,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China; 2.StationofIndustrialCropPromotionofGansuProvince,Lanzhou730030,China; 3.GuidanceStationofHerbsCultivationofKangxian,Longnan746500,China; 4.HengMaoYuanProfessionalCooperativeofChineseHerbalMedicine,Longnan746500,China

The aim of this study was to investigate the antioxidant capacity and the contents of total flavonoids, phenolics, and hypericin inHypericumperforatumflowers at different harvest stages (bud stage, blooming stage, fruit stage). Flowers at each stage were extracted in 70% ethanol, and the extracts were subjected to high performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The I% (inhibition percentage) and FRAP (ferric reducing/antioxidant power) values were significantly higher at the bud and blooming stages than at the fruit stage, but did not differ significantly between the bud and blooming stages. The contents of total flavonoids, phenolics, and hypericin differed significantly among stages, with the highest contents at the blooming stage, followed by the bud stage, and then the fruit stage. Thirty-seven compounds were separated and identified in the 70% ethanol extracts from flowers at the blooming stage. The main components were 1,1-diethoxy-ethane (19.26%), 1-hexadecanol (17.85%), β-ylangene (10.71%), (Z,Z)-9,12-octadecadienoyl chloride (8.42%), hexadecanoic acid ethyl ester (8.40%), phytol (5.79%), and caryophyllene oxide (4.56%). These results indicated that the optimal harvest stage ofH.perforatumflowers is at the bud to blooming stages, when the flowers contain high levels of bioactive compounds, antioxidants, and volatile components. This study provides important reference information for the large-scale cultivation ofH.perforatum.

Hypericumperforatum; harvest stages; antioxidant capacity; total flavonoids and phenolics; hypericin; volatile constituents; GC-MS separation and identification

http://cyxb.lzu.edu.cn

10.11686/cyxb2016484

2016-12-14；改回日期：2017-03-13

國家自然科學(xué)基金(81560617,31360148), 甘肅省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新(GNCX-2016-12), 甘肅省中藥材產(chǎn)業(yè)科技攻關(guān)(GYC14-03), 國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃(201510733007)和甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)SRTP(20150801)資助。

葛莉(1993-), 女, 甘肅寧縣人，在讀本科。E-mail:geli199308@163.com*通信作者Corresponding author. E-mail:lmf@gsau.edu.cn

葛莉, 姚園園, 康天蘭, 李京耀, 何恒軍, 楊德龍, 栗孟飛. 不同收獲期貫葉連翹花中抗氧化能力、主要活性物質(zhì)變化及揮發(fā)性組分分離鑒定. 草業(yè)學(xué)報, 2017, 26(9): 66-74.

GE Li, YAO Yuan-Yuan, KANG Tian-Lan, LI Jing-Yao, HE Heng-Jun, YANG De-Long, LI Meng-Fei. Antioxidant capacity, bioactive compounds, and volatile constituents of flowers ofHypericumperforatumat different harvest stages. Acta Prataculturae Sinica, 2017, 26(9): 66-74.