劉培培,程培培,侯松萍*

(1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 呼吸科，吉林 長春130033； 2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院 小兒內(nèi)科)

慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴細胞免疫分型變化的相關(guān)因素分析

劉培培1,程培培2,侯松萍1*

(1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 呼吸科，吉林 長春130033； 2.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院 小兒內(nèi)科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴重危害人類健康的疾病，目前研究結(jié)果初步顯示細胞免疫參與了COPD的病因、發(fā)病機制、恢復及預(yù)后整個過程。本文通過檢測COPD患者外周血淋巴細胞的免疫分型變化，探討COPD患者急性加重期的肺功能、血氣分析、呼吸困難量表評分、病程長短等各項指標與其免疫功能變化的相關(guān)性，為臨床綜合診治COPD提供一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院2014年12月至2015年9月慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者137例，納入標準：均符合中華醫(yī)學會呼吸病學會2013年修訂版慢性阻塞性肺疾病診治指南[1]。排除標準：不能配合完成支氣管舒張實驗者，合并其它心肝腎等疾病者，近期使用激素、免疫抑制劑等影響免疫功能的患者，伴有其他部位慢性炎癥的患者。確診137例COPD患者，年齡35-78歲，平均66.01±10.78歲，其中男57例，女80例。測定所有患者外周血淋巴細胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD56+，并計算CD4+/CD8+比值。以COPD急性加重期患者淋巴細胞免疫分型的各項指標作為應(yīng)變量，MMRC評分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙作為自變量，進行相關(guān)性分析。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3- PC5(貨號：6607013)；細胞裂解液：OptiLyse○RNO-lysing Solution(貨號：A11894)；流式細胞儀：Beckman Coulter FC500；以上所有試劑均購自美國Beckmen Coulter公司。肺功能測定采用MasterScreenPneumo型肺功能儀 (德國康爾福盛CareFusion公司)，技術(shù)標準參考2005年美國胸科學會和歐洲呼吸協(xié)會共同制定的肺功能測試標準[2]；血氣分析測定采用GEMpremier3500分析檢測儀(美國Instrumentation Laboratory公司)。

1.2.2 血液樣本制備 采集患者外周血2 ml，加入到EDTA抗凝的真空管中混勻。取兩只流式細胞儀上樣管，分別命名為同型對照管和實驗管，每管中均加入100 μl抗凝全血，然后分別加入20 μl同型對照抗體、CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5抗體和CD45-FITC/CD56-PE/CD19-ECD/CD3-PC5，充分混勻，避光室溫孵育15 min；然后向每管中加入紅細胞裂解液500 μl，充分混勻，避光孵育10 min后加入500 μl PBS，1 000 r/min離心5 min，棄上清，每管加入500 μl鞘液，混勻，等待上機檢測。血氣分析動脈血由專業(yè)人員采集，采用一次性威世德動脈血氣針，型號3302通用性動脈血氣針，由全自動血液細胞分析儀讀取結(jié)果。

1.2.3 指標測定 外周血淋巴細胞亞群及NK細胞檢測均采用流式細胞檢測技術(shù)，由我院中心實驗室專人操作檢測。每管獲取細胞1×104個，以熒光抗體染色陽性細胞所占百分比記錄結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 COPD急性加重期患者病程、MMRC評分、FEV1Pred%、血氣分析結(jié)果等臨床資料詳見表1。

表1 COPD急性加重期患者臨床資料

2.2 COPD急性加重期患者淋巴細胞免疫分型的各項指標與MMRC評分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙相關(guān)性分析顯示： CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，但是CD4+/ CD8+比值與PaCO2呈顯著負相關(guān)(P<0.05)；CD56+與mMRC評分呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，CD3+與mMRC評分呈顯著負相關(guān)(P<0.05)，詳見表2、表3。

表2 慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期患者淋巴細胞免疫分型的多因素相關(guān)性分析

表3 慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期患者淋巴細胞免疫分型的多因素相關(guān)性分析

*P<0.05，**P<0.01

3 討論

Saetta 等研究結(jié)果提示發(fā)展為COPD的吸煙者與肺功能正常、無臨床癥狀的吸煙者相比，CD3+CD8+T淋巴細胞數(shù)目明顯增加，提示CD3+CD8+T淋巴細胞在氣道的重塑方面起到了重要作用[3]。本研究結(jié)果顯示外周血CD3+CD8+T淋巴細胞與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，說明氣道阻塞性通氣功能障礙越嚴重，CD3+CD8+T淋巴細胞也隨著氣道阻塞程度加重而造成的PaCO2增高而升高。Saetta等研究結(jié)果和本實驗結(jié)果均提示CD3+CD8+T淋巴細胞在COPD患者氣道炎癥反應(yīng)過程中起重要作用。

Won-Dong Kim等研究表明彌散功能正常的COPD患者與健康吸煙者或COPD伴有彌散功能減低的患者相比，其CD3+CD8+T淋巴細胞比例升高，CD4+/CD8+比值下降，且在這組患者中FEV1/FVC與CD4+/CD8+比值具有顯著正相關(guān)性，推測CD3+CD8+T淋巴細胞可能參與部分COPD病人小氣道病變及氣流受限的炎癥反應(yīng)過程[4]。本研究結(jié)果顯示COPD急性加重期患者，CD4+/CD8+比值與PaCO2呈顯著負相關(guān)(P<0.05)，Won-Dong Kim等研究結(jié)果和本實驗結(jié)果均提示CD4+/CD8+比值與氣道阻塞程度密切相關(guān)。

表2、表3顯示外周血CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，但是CD4+/CD8+與PaCO2呈顯著負相關(guān)(P<0.05)，說明動脈血PaO2、PaCO2與外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比值密切相關(guān)。表2還顯示CD3+T淋巴細胞與MMRC評分呈顯著負相關(guān)(P<0.05)。這些結(jié)果說明COPD患者出現(xiàn)Ⅱ型呼吸衰竭和呼吸困難時能引起機體內(nèi)CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+T淋巴細胞參與的細胞免疫功能紊亂，臨床上應(yīng)給予高度重視。

CD56分子是自然殺傷細胞 (NK細胞)主要的表面標志，本研究結(jié)果顯示CD56+與MMRC評分呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，說明NK細胞參與了COPD患者的疾病進展過程，可能隨著患者病情加重，NK細胞逐漸被激活，進一步發(fā)揮其免疫調(diào)控作用和抗感染作用。本研究結(jié)果顯示CD19+B淋巴細胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞與COPD急性加重期患者的肺功能、血氣分析、呼吸困難量表評分、病程長短、吸煙等各項指標均無明顯相關(guān)性；Jong JWD等研究表明吸煙的COPD患者中，F(xiàn)EV1占預(yù)計值百分比與CD19+B淋巴細胞具有正相關(guān)性[5]，Zhu X等研究結(jié)果顯示在COPD患者中，吸煙可能對CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞功能產(chǎn)生抑制作用[6]，這兩項研究結(jié)果與本實驗不一致，因此，吸煙對COPD急性加重期患者外周血淋巴細胞亞群是否產(chǎn)生影響，還需進一步研究。

[1]慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)，中華醫(yī)學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013,36(4)：255.

[2]Pellegrino R,Viegi G,Brusasco V，et al.Interpretative strategies for lung function tests[J].European Respiratory Journal,2005,26(5):948.

[3]Saetta M ，Stefano AD，Turato G ，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].American Journal of Respiratory & Critical Care Medicine,1998,157(1):822.

[4]Won-Dong K,Woo-Sung K,Younsuck K,et al.Abnormal peripheral blood T- lymphocyte subsets in a subgroup of patients with COPD[J].Chest,2002,122(2):437.

[5]Jong JWD,Belt-Gritter BVD,Koeter GH,et al.Peripheral blood lymphocyte cell subsets in subjects with chronic obstructive pulmonary disease:association with smoking,IgE and lung function[J].Respiratory Medicine,1997,91(2):67.

[6]Zhu X,Gadgil AR,George M,et al.Peripheral T cell functions correlate with the severity of chronic obstructive pulmonary disease[J].Journal of Immunology,2009,182(5):3270.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1364-03

2016-10-17)