尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，?；蹫?/p>

(鄭州市第六人民醫(yī)院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結(jié)核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)

尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，?；蹫?/p>

(鄭州市第六人民醫(yī)院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結(jié)核的發(fā)病原因與機(jī)體的免疫功能有著密切關(guān)系，結(jié)核患者外周血免疫功能檢測(cè)的報(bào)道較多，對(duì)于肺泡灌洗液的T淋巴細(xì)胞水平的研究相對(duì)較少[1]。本研究采用流式細(xì)胞儀對(duì)60例肺結(jié)核患者及40例健康體檢者肺泡灌洗液(BALF)及外周血中T細(xì)胞亞群表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2015年1月-2016年6月收治的60例肺結(jié)核患者及40例健康體檢者為研究對(duì)象，分為觀(guān)察組和對(duì)照組。觀(guān)察組中男37例，女23例，年齡23-72歲，平均年齡(43.23±14.34)歲?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)：(1) 入選者均符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》中的診斷要求；(2) 有咳嗽、咳痰、低熱及痰中帶血等癥狀；(3) X光檢查可見(jiàn)肺部斑片狀陰影；(4) 患者入院前未接受過(guò)抗結(jié)核病的治療；(5) 患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。對(duì)照組40例為健康體檢者，其中男23例，女17例，年齡21-68歲，平均年齡(42.09±13.76)歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1) 對(duì)照組患者無(wú)肺結(jié)核類(lèi)相關(guān)癥狀；(2) 痰液結(jié)核分枝桿菌涂片及培養(yǎng)均陰性；(3) X胸片檢查無(wú)肺結(jié)核病灶出現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1) 并發(fā)其他嚴(yán)重疾病的患者，包括心腦血管疾病、腫瘤癌癥等；(2) 患有精神類(lèi)疾病的受試者；(3) 妊娠和哺乳期婦女。組間患者在基線(xiàn)資料比較無(wú)差異性，P>0.05。

1.2 方法

患者在入院當(dāng)天采集3 ml外周靜脈血，保存在肝素鈉抗凝管中。2 h內(nèi)處理外周血樣品，5 000 rpm離心10 min后，然后進(jìn)行T細(xì)胞各項(xiàng)亞群細(xì)胞的檢測(cè)。肺泡灌洗采用纖支鏡在患者的肺部病變部位進(jìn)行操作。操作前進(jìn)行局部麻醉，采用奧林巴斯電子氣管鏡經(jīng)口插入，其頂端緊密鍥入病變段處(健康受試者統(tǒng)一灌洗右肺上葉)，由灌洗導(dǎo)管將30 ml生理鹽水分次快速注入肺泡內(nèi)，通過(guò)負(fù)壓吸引回收，其回收率應(yīng)不小于40%。除去肺泡灌洗液中的粘液并加入到硅塑瓶?jī)?nèi)，兩小時(shí)內(nèi)送檢完畢。采用賽默飛Attune○RNxT 聲波聚焦流式細(xì)胞儀對(duì)收集的樣品進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8細(xì)胞)的檢測(cè)分析，相關(guān)的單抗試劑盒均購(gòu)置于美國(guó)賽默飛公司，相關(guān)檢測(cè)操作均按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 20.0進(jìn)行相關(guān)操作，組間計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者BALF和外周T細(xì)胞對(duì)比

治療前兩組BALF和外周血中CD3、CD8比較無(wú)差別，P>0.05；觀(guān)察組BALF及外周血中CD4、CD4/CD8低于對(duì)照組，P<0.05，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 觀(guān)察組不同治療時(shí)間BALF和外周血T淋巴細(xì)胞水平比較

觀(guān)察組治療1個(gè)月后 CD4細(xì)胞水平升高，3個(gè)月后BALF和外周血中CD4、CD4/CD8水平比治療前升高，P<0.05，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 兩組患者BALF和外周血T淋巴細(xì)胞水平比較

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05

表2 觀(guān)察組不治療時(shí)間BALF和外周血T淋巴細(xì)胞水平比較

注：與治療前相比，*P<0.05。

3 討論

近幾年隨著分子免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)科的快速發(fā)展， T細(xì)胞亞群在結(jié)核病發(fā)病過(guò)程中的重要作用得到確認(rèn)[2]。CD4T淋巴細(xì)胞是一種輔助性的亞細(xì)胞群體，在肺結(jié)核免疫機(jī)制中占據(jù)重要地位，其水平值的降低提示機(jī)體有患肺結(jié)核的可能[3]。CD8細(xì)胞與CD4細(xì)胞有著相反的免疫效應(yīng)，其水平值的增高提示疾病的病情加劇，治療周期延長(zhǎng)、增加治療難度。對(duì)于肺結(jié)核患者T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)，常規(guī)外周靜脈血的免疫細(xì)胞水平檢測(cè)特異性不強(qiáng)，肺泡灌洗液可以較為準(zhǔn)確的對(duì)患者的肺部免疫功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。丁士標(biāo)等人[4]采用肺結(jié)核患者的肺泡灌洗液進(jìn)行T淋巴細(xì)胞免疫功能方面的研究，建立了良好的診斷指標(biāo)的相關(guān)性研究模型，提高了T淋巴細(xì)胞對(duì)肺結(jié)核診斷的特異性。Kumagai等[5]在研究中也表明肺泡灌洗液中T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)更能有助于對(duì)肺結(jié)核疾病的確診。

本研究結(jié)果顯示肺結(jié)核患者免疫功能的檢測(cè)， BALF和外周血中CD4、CD4/CD8細(xì)胞水平值與正常組患者相比均有降低， BALF中CD4/CD8的數(shù)值下降是由CD4細(xì)胞減少和CD8細(xì)胞增多導(dǎo)致，外周血相應(yīng)比值的降低則是單純的CD4細(xì)胞減少導(dǎo)致，從而初步說(shuō)明了患者的體內(nèi)CD4、CD4/CD8細(xì)胞水平值的上下波動(dòng)變化與肺部疾病的出現(xiàn)有著明顯的相關(guān)性[6]。本研究中CD3在兩組患者中，BALF及外周血部位的水平值均相似，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CD3細(xì)胞水平可能與肺結(jié)核患者發(fā)病無(wú)必然聯(lián)系。再者，本研究對(duì)觀(guān)察組患者不同治療階段的T淋巴細(xì)胞水平檢測(cè)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)在治療后1月、3月患者的CD4細(xì)胞、CD4/CD8細(xì)胞水平均有明顯增加，結(jié)合患者的臨床癥狀改善、肺部病變減輕等結(jié)果共同表明T淋巴細(xì)胞尤其是CD4、CD8、CD4/CD8等水平值檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷和療效判斷有重要作用。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì).氣管支氣管結(jié)核診斷和治療指南(試行)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2012,35(8):230.

[2]Jang H B,Lee A J,Kim M J,et al.Evaluation of CD3+CD4-CD8- (Double-negative) T Cells in Bronchoalveolar Lavage Fluid:an Effective Tool for Pulmonary Disease Diagnosis[J].Laboratory Medicine Online,2015,5(1):20.

[3]陳品儒,譚守勇.非結(jié)核分枝桿菌肺病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群與營(yíng)養(yǎng)狀況相互關(guān)系的探討[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2014,10(11):1768.

[4]丁士標(biāo),陳愛(ài)鳳,潘亞萍,等.肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液病原菌分布與耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014(17):4203.

[5]Kumagai T,Tomita Y,Inoue T,et al.Pleural sarcoidosis diagnosed on the basis of an increased CD4/CD8 lymphocyte ratio in pleural effusion fluid:a case report[J].Journal of Medical Case Reports,2015,9(1):1.

[6]袁 媛，陳 驥.IL-18、OPN、INF-γ及 hs-CRP 在肺結(jié)核中的檢測(cè)意義[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2016，13(2):117.

1007-4287(2017)09-1371-02

2016-11-10)