呂 璐 鄭源強(qiáng) 張精彩 李斯琦 王曉東 尹 星 徐 佳 韓新榮 石艷春

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)自治區(qū)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010058)

六味地黃丸對自發(fā)性2型糖尿病模型小鼠肝、腎和胰腺組織學(xué)變化的影響

呂 璐 鄭源強(qiáng) 張精彩1李斯琦1王曉東1尹 星1徐 佳1韓新榮1石艷春

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)自治區(qū)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010058)

目的探討不同劑量六味地黃丸對自發(fā)性2型糖尿病(T2DM)模型小鼠肝臟、腎臟和胰腺組織學(xué)變化的影響。方法將6～8周齡自發(fā)性T2DM模型小鼠(KK-Ay小鼠)隨機(jī)分為無藥對照組、低劑量組和高劑量組，C57BL/6J小鼠作為遺傳對照組。各組小鼠分別給予蒸餾水或六味地黃丸灌胃15 w。給藥15 w后，HE染色觀察小鼠肝臟、腎臟和胰腺組織學(xué)變化。結(jié)果給藥組小鼠肝臟、腎臟和胰腺組織病變明顯減輕。低劑量組對小鼠肝臟的保護(hù)效果優(yōu)于高劑量組；高劑量組對腎臟病變的治療效果好于低劑量組；低劑量組對胰島內(nèi)胰島細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。結(jié)論六味地黃丸對自發(fā)性T2DM所致的實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟、腎臟和胰腺組織病理性改變具有明顯的改善作用，且與給藥劑量相關(guān)。

2型糖尿病；六味地黃丸；肝臟；腎臟；胰腺

2型糖尿病(T2DM)的發(fā)病機(jī)制、治療措施等研究一直是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)課題〔1,2〕。T2DM常見并發(fā)癥包括腎病、神經(jīng)病變、眼病及感染等。六味地黃丸常用于糖尿病及其并發(fā)癥的治療，可單獨(dú)使用或者與西藥聯(lián)合用藥，療效明顯〔3,4〕。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，六味地黃丸對自發(fā)性T2DM模型小鼠(KK-Ay小鼠)高血糖和肥胖具有一定的治療作用，并且能夠降低血清和胰島內(nèi)胰島素表達(dá)水平〔5〕。本研究探討不同劑量六味地黃丸對自發(fā)性T2DM模型小鼠肝臟、脾臟和胰腺組織學(xué)變化的影響。

1 材料與方法

1.1主要試劑及儀器 濃縮六味地黃丸〔北京同仁堂(集團(tuán))有限責(zé)任公司〕；組織包埋機(jī)(BKJ)、石蠟切片機(jī)(LEICA)等。

1.2實(shí)驗(yàn)動物及分組 自發(fā)性T2DM模型小鼠(SPF級KK-Ay小鼠，雌性)24只，6～8周齡，隨機(jī)分為3組，每組8只，即無藥對照組、低劑量組和高劑量組。C57BL/6J小鼠8只，雌性，6～8周齡。KK-Ay小鼠和C57BL/6J小鼠的體質(zhì)量均為18～20 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK(京)2014-0004。C57BL/6J小鼠作為遺傳對照組。高糖飼料：購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK(京)2009-0008。

1.3小鼠灌胃給藥與飼養(yǎng) 各組小鼠購買后先進(jìn)行2 w適應(yīng)性飼養(yǎng)，并且全程給予高糖飼料。第3周開始灌胃給藥，各組每只小鼠灌胃0.1 ml/次，2次/d。六味地黃丸用滅菌蒸餾水配成混懸液，低劑量組和高劑量組給藥濃度分別為70 mg/ml和140 mg/ml(按照濃縮六味地黃丸藥品說明書并根據(jù)開始灌胃時全部小鼠平均體重為37.51 g，綜合換算給藥量。140 mg/ml是按正常成人給藥劑量換算而得，70 mg/ml為減半給藥劑量)；無藥對照組和遺傳對照組給予等劑量無菌蒸餾水。

1.4小鼠組織臟器的收集、制片及染色 灌胃給藥15 w后，各組小鼠脫頸處死后，常規(guī)條件下取肝臟、腎臟和胰腺，4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠肝臟HE染色檢測結(jié)果 與遺傳對照組相比，無藥對照組小鼠肝臟脂肪空泡較多且?guī)缀跛懈渭?xì)胞脂肪變性明顯；低劑量組雖然也存在脂肪空泡且極少有肝細(xì)胞脂肪變性；高劑量組偶有脂肪空泡，肝細(xì)胞脂肪變性也較明顯，部分肝細(xì)胞脂肪變性得到改善(圖1)。表明六味地黃丸對T2DM模型小鼠肝臟具有保護(hù)作用，且低劑量組對肝細(xì)胞脂肪變性的治療效果優(yōu)于高劑量組。

2.2各組小鼠腎臟HE染色檢測結(jié)果 (圖2)遺傳對照組腎臟組織形態(tài)正常，腎小球規(guī)則，腎小管排列整齊，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常；無藥對照組小鼠腎小球肥大、毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜基質(zhì)增生，腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變；給藥組小鼠腎臟病變明顯輕于無藥對照組，且高劑量組更輕，僅有少量腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變，表明六味地黃丸對T2DM小鼠伴發(fā)的腎臟損傷具有改善作用，且高劑量組效果優(yōu)于其他組。

圖1 各組肝臟HE染色結(jié)果(×100)

圖2 各組腎臟HE染色結(jié)果(×100)

2.3各組小鼠胰腺HE染色檢測結(jié)果 遺傳對照組胰島為形狀規(guī)則的橢圓形或圓形的細(xì)胞團(tuán)，界線清楚，胰島內(nèi)細(xì)胞排列緊密。其余組均有胰島代償性增大，且無藥對照組小鼠胰島外形不規(guī)則，胰島內(nèi)組織結(jié)構(gòu)松散，有空虛區(qū)域，部分胰島細(xì)胞胞質(zhì)空泡化。給藥組胰島病變均輕于無藥對照組，其中低劑量組仍存在胰島代償性增大，但胰島內(nèi)細(xì)胞排列緊密；高劑量組胰島代償性增大現(xiàn)象得到明顯改善，但胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量較少，存在空虛區(qū)域(圖3)。

圖3 各組胰腺HE染色比較(×100)

3 討 論

國際糖尿病聯(lián)盟統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示：2011年全球糖尿病人數(shù)已達(dá)到3.7億，其中絕大部分存在于發(fā)展中國家，預(yù)計2035年全球?qū)⒂薪?.31億糖尿病患者〔6〕。我國的流行病學(xué)調(diào)查顯示：18歲以上人群糖尿病的患病率為9.7%，且以T2DM為主〔7〕。T2DM常伴有腎病、神經(jīng)病變等并發(fā)癥，但其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為慢性低密度炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致糖尿病的主要致病因素。炎癥激活天然免疫系統(tǒng)導(dǎo)致機(jī)體長期處于低密度炎癥狀態(tài)、脂源性細(xì)胞因子及激素分泌紊亂，最終會導(dǎo)致糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生〔8,9〕。肝臟作為胰島素作用的靶器官，在T2DM患者體內(nèi)易發(fā)生胰島素抵抗，加重機(jī)體代謝紊亂，而該病的脂代謝紊亂是形成非酒精性脂肪肝的獨(dú)立危險因素〔10,11〕。糖尿病腎病是糖尿病常見的微血管病變的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病及死亡的主要原因〔12〕。

六味地黃丸是中醫(yī)治療腎陰虛的基礎(chǔ)方。六味地黃丸(包括加減方)在臨床實(shí)踐中常用于輔助治療糖尿病尤其是T2DM及其并發(fā)癥，具有較好的治療效果〔13,14〕。KK-Ay小鼠作為典型的自發(fā)性T2DM模型小鼠，與人的發(fā)病特征相似〔15〕。我們的前期結(jié)果顯示，六味地黃丸能夠降低KK-Ay小鼠血清和胰島內(nèi)胰島素表達(dá)水平。在大鼠模型研究中，六味地黃丸也顯示出對大鼠胰腺和胰島β細(xì)胞具有保護(hù)作用〔16,17〕。糖尿病是一類代謝性疾病，肝臟、腎臟和胰腺的功能狀態(tài)與糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展與預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，六味地黃丸對糖尿病尤其是T2DM所致的模型動物肝臟、腎臟和胰腺損傷具有保護(hù)和治療作用，但確切機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。

1Doria A,Patti ME,Kahn CR.The emerging genetic architecture of type 2 diabetes〔J〕.Cell Metab,2008;8(3):186-200.

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4李征鋒,陳 喬,何 紅.六味地黃丸輔治2型糖尿病的療效觀察及對神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的影響〔J〕.江西醫(yī)藥,2014;49(9):860-1,866.

5呂 璐,鄭源強(qiáng),張精彩,等.六味地黃丸對自發(fā)性2型糖尿病模型小鼠胰島素表達(dá)水平的影響〔J〕.中國免疫學(xué)雜志,2016;32(3):350-3.

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〔2017-06-14修回〕

(編輯 曹夢園)

R967

A

1005-9202(2017)18-4455-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.010

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(2012MS1126)；內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)英才培育項(xiàng)目資助(2015年)

1 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院

石艷春(1958-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事抗感染免疫與疫苗研究。 韓新榮(1957-)，男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥與免疫學(xué)研究。

呂 璐(1988-)，女，碩士，主要從事抗感染免疫與中藥免疫研究。