葛洪偉，張文明，韓 杰，陳玥秀，譚 珊，劉立強，楊素芳

（1.廣西金誠雙豐農(nóng)牧科技有限公司，廣西 南寧 530001；2.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧 530004；3.廣西崇左市扶綏縣動物疫病預(yù)防控制中心，崇左 532100；4.廣西河池市南丹縣水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局，河池 547200）

肉豬用中藥飼料添加劑的抑菌和毒理學(xué)試驗

葛洪偉1，張文明1，韓 杰2，陳玥秀3，譚 珊4，劉立強1，楊素芳2

（1.廣西金誠雙豐農(nóng)牧科技有限公司，廣西 南寧 530001；2.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧 530004；3.廣西崇左市扶綏縣動物疫病預(yù)防控制中心，崇左 532100；4.廣西河池市南丹縣水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局，河池 547200）

為研究中藥飼料添加劑的抑菌和毒理學(xué)效果，設(shè)計兩種肉豬專用的中藥飼料添加劑提取液進行抑菌效果試驗和毒理學(xué)試驗。結(jié)果表明，大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的抑菌圈直徑，試驗A組分別比試驗B組高2.1 mm、2.1 mm、0.7 mm和1.8 mm；大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的最小抑菌濃度，試驗A組分別比試驗B組低0.18 mg/mL、0.25 mg/mL、0.13 mg/mL和0.10 mg/mL；大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的最小殺菌濃度試驗A組分別比試驗B組低0.32 mg/mL、0.25 mg/mL、0.12 mg/mL和0.24 mg/mL。急性攻毒試驗和蓄積毒性試驗結(jié)果表明，兩組肉豬中草藥飼料添加劑是無毒類物質(zhì)，說明本試驗設(shè)計的兩種中藥組方在肉豬飼養(yǎng)過程中可以作為中藥添加劑使用，且試驗A組的抑菌效果強于試驗B組。

中藥飼料添加劑；抑菌試驗；毒理學(xué)試驗

AbstractThe test was conducted to evaluate the effect of Chinese herb feed additives on bacteriostatic efficacy and toxicity.Two Chinese medicine feed additive extract for pigs of bacteriostasis experiment and toxicological test experiment were designed.The results showed that test group A was more than 2.1 mm,2.1 mm,0.7 mm and 1.8 mm compared with the test group B in diameter of bacteriostatic circle of Escherichia coli,salmonella,pasteurella and haemophilus paragallinarum.Test group A was more than 0.18 mg/mL,0.25 mg/mL,0.13 mg/mL and 0.10 mg/mL compared with the test group B in minimal inhibitory concentration (MIC)of Escherichia coli,salmonella,pasteurella and haemophilus paragallinarum.Test group A was more than 0.32 mg/mL,0.25 mg/mL,0.12 mg/mL and 0.24 mg/mL compared with the test group B in minimum bactericidal concentration(MBC).The results of acute toxicity test and cumulative toxicity test showed that two Chinese medicine feed additive extract for pigs is non-toxic substances.Two kinds of traditional Chinese medicine in this experiment can be used as a traditional Chinese medicine additive in pig breeding process,and the bacteriostatic effect of the test group A is better than test group B.

Key wordsChinese medicine feed additive；bacteriostasis experiment；toxicological test experiment

隨著飼料工業(yè)的快速發(fā)展，大量人工合成的抗生素及促生長劑在飼料中添加。這些添加劑的應(yīng)用確實對畜牧業(yè)的發(fā)展起到了推動作用，但是由于這些添加劑大量使用，甚至濫用，導(dǎo)致細菌耐藥性不斷增強，同時藥物殘留也越來越嚴重，對環(huán)境的污染也日益加重，直接或間接地影響著人類的健康，這已經(jīng)是世界性問題。因此尋求有效的抗生素替代品，是目前畜禽健康養(yǎng)殖領(lǐng)域的研究重點和熱點[1-15]。近年來，中藥以其獨有的天然性、多功能性、低/無藥殘性、低/無抗藥性等優(yōu)點，越來越受到重用。本試驗依據(jù)中藥配伍的原理，配制兩組肉豬專用中藥添加劑的前期提取液，并對其進行抑菌試驗和毒理試驗研究，驗證其作為肉豬用飼料添加劑的安全性。

1 材料與方法

1.1 中藥飼料添加劑前期提取物制備

根據(jù)單味中藥的抑菌效果和病原菌種類，以及復(fù)方中藥的君臣佐使、七情配伍、十八反十九畏等中藥配伍原則，對比篩選后的中藥有效成分，配制出兩組中藥飼料添加劑前期提取液。

A組提取液組中藥組方：黃精17份、生首烏16份、黃芪12份、當(dāng)歸10份、皂角刺9份、黨參9份、漏蘆9份、路路通7份、刺蒺藜5份、通草5份。

B組提取液組中藥組方：黃精18份、筋骨草19份、黨參15份、黃芪14份、蒼術(shù)12份、板藍根12份、穿心蓮10份。

提取液由江蘇樂普生物技術(shù)有限公司協(xié)助進行提取，步驟為：按照A組提取液和B組提取液的組方稱取各自原藥材，首次水提加水量為藥材重量的10倍，提取時間為2 h，過濾，制得水提液；再次加入適量的水進行二次水提，提取時間為1 h，過濾，制得水提液；合并兩次水提液，濃縮至相對密度1.18，即可得到A組提取液和B組提取液的原液，分別為試驗A組中藥提取液和試驗B組中藥提取液。

1.2 試驗時間、地點及試驗動物

試驗于2017年3月3日至4月16日在廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室進行，試驗全期45 d。試驗動物為體重16～18 g的成年小白鼠。

1.3 試驗儀器

培養(yǎng)皿、低速臺式水平離心機、低溫冰箱、牛津杯、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡等。

1.4 抑菌試驗方法

1.4.1 藥敏性試驗 將培養(yǎng)皿滅菌后分成6個扇區(qū)，將瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，在每個培養(yǎng)皿內(nèi)均勻加入0.5 mL已制備的病原菌稀釋菌液。將牛津杯內(nèi)加入100 μL藥液按順序放入6個扇區(qū)中央，37℃下培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈直徑。

1.4.2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測定 根據(jù)水提物的抑菌結(jié)果，采用10倍稀釋法及2倍稀釋法，測定最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。具體測定方法參考黃亞東2005年公布的方法進行[16]。

1.5 毒理學(xué)試驗方法

1.5.1 急性毒性試驗（LD50的測定） 設(shè)10000mg/kg、20 000 mg/kg、40 000 mg/kg、80 000 mg/kg 4 個劑量組和1個空白對照組，兩個試驗組的每個劑量組有10只小白鼠，空白對照組不給藥，試驗A組和試驗B組的4個劑量組按設(shè)定劑量連續(xù)給藥1周，每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、中毒情況，并記錄小白鼠的死亡數(shù)目[17-18]。

1.5.2 蓄積毒性試驗 設(shè)1 000 mg/kg、2 000 mg/kg、4 000 mg/kg、8 000 mg/kg 4個劑量組和1個空白對照組，對照組有12只小白鼠，分3個重復(fù)，每個重復(fù)4只。試驗A組和試驗B組的每個劑量組有12只小白鼠，每個劑量組再分3個重復(fù)，每個重復(fù)4只小白鼠?？瞻讓φ战M不給藥，試驗A組和試驗B組的4個劑量組按設(shè)定劑量進行灌胃給藥，連續(xù)給藥3周，在給藥期間每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、體重情況以及中毒情況，并記錄小白鼠的死亡數(shù)目。在給藥停止后觀察1周內(nèi)小白鼠的死亡情況[19]。1.6 統(tǒng)計分析

試驗結(jié)果用SPSS 10.0軟件整理，采用One Way ANOVA進行統(tǒng)計分析，并用Duncan法進行多重比較，結(jié)果用平均數(shù)±標準誤表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 抑菌試驗效果

2.1.1 抑菌圈直徑 試驗A組和試驗B組的大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的抑菌試驗各有2個樣本數(shù)，試驗完成后，測定每組每個菌種的抑菌圈直徑取平均值。由表1可知，兩組肉豬用中藥飼料添加劑的前期提取液均有一定的抑菌作用，試驗A組大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌抑菌圈直徑分別比試驗B組高2.1 mm、2.1 mm、0.7 mm和1.8 mm，說明試驗A組的抑菌效果強于試驗B組。

表1 抑菌圈直徑 mm

2.1.2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）試驗A組和試驗B組的大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的最小抑菌濃度（MIC）試驗和最小殺菌濃度（MBC）試驗各有2個樣本數(shù)，試驗完成后，測定每組每個菌種的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）取平均值。由表2可知，兩組中藥提取液的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）都較為理想，但是相比較而言，試驗A組的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度較試驗B組更為理想。大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的最小抑菌濃度試驗A組分別比試驗B組低0.18 mg/mL、0.25 mg/mL、0.13 mg/mL 和 0.10 mg/mL；大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌的最小殺菌濃度試驗A組分別比試驗B組低0.32 mg/mL、0.25 mg/mL、0.12 mg/mL 和 0.24 mg/mL。

表2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）濃度 mg/mL

2.2 毒理學(xué)試驗

2.2.1 急性攻毒試驗 試驗A組、試驗B組和空白對照組試驗小白鼠在急性攻毒后1周，兩個試驗組小白鼠與對照組相比無異常表現(xiàn)，急性攻毒的小白鼠在食欲狀況、精神狀態(tài)、飲水采食等情況均表現(xiàn)正常。在分別灌服A組和B組的中藥提取液80 000 mg/kg后，兩組急性攻毒的小白鼠均沒有出現(xiàn)中毒死亡。按毒理學(xué)評價標準，無需測定半數(shù)致死量，即LD50＞80 000 mg/kg。急性攻毒試驗結(jié)果表明，本試驗所設(shè)計的肉豬中藥飼料添加劑是無毒類物質(zhì)。

2.2.2 蓄積毒性試驗 試驗A組和試驗B組在給藥3周后，兩組小白鼠的食欲、精神、飲水等均表現(xiàn)正常，也未出現(xiàn)死亡情況，停止給藥1周后，小白鼠表現(xiàn)正常。由表3可知，給藥3周后，兩個試驗組與空白對照組相比，在試驗初始重、結(jié)束重和平均增重方面無明顯差異。

表3 蓄積毒性試驗 g

3 討論

3.1 中藥的抑菌效果

唐艷等以金銀花為主藥和其他中藥材配伍，研究所配中藥的抑菌效果，結(jié)果表明，所配中藥對大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌有較好的抑菌效果，尤其是設(shè)計的中藥能夠破壞大腸埃希氏菌細胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細胞內(nèi)容物外泄，細胞死亡[20]。宮錫坤等研究了黃連、黃芩、大黃、黃柏、苦參5種中藥抑菌效果，結(jié)果表明，5味中藥提取液均有較好的抑菌效果[21]。本試驗結(jié)果表明，兩組中藥飼料添加劑前期提取液的抑菌效果和殺菌效果都較好，其中A組提取液的抑菌效果和殺菌效果要好于B組。

3.2 中藥的毒理學(xué)效果

張建清等對5種中藥材的急性毒性、致突變性及生殖毒性進行了毒理學(xué)試驗研究，結(jié)果表明，靈芝、冬蟲夏草、紅芪、鎖陽、杜仲這5種中藥是無毒類物質(zhì)[22]。吳永魁等對抗疲勞中藥復(fù)方制劑進行了安全性毒理學(xué)試驗，結(jié)果表明，抗疲勞中藥復(fù)方制劑屬于實際無毒類、無致突變性的中藥制劑[23]。本試驗結(jié)果表明，兩組中藥飼料添加劑前期提取液屬于實際無毒類中藥制劑，可以安全使用。

4 結(jié)論

本試驗設(shè)計的提取液具有較好的抑菌殺菌作用，無毒副作用，在肉豬飼養(yǎng)過程中可以作為中藥添加劑使用。

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（編輯：富春妮）

Bacteriostasis Experiment and Toxicological Test Experiment of Chinese Herb Feed Additive for Pig

GE Hongwei1,ZHANG Wenming1,HAN Jie2,CHEN Yuexiu3,TAN Shan4,LIU Liqiang1,YANG Sufang2
(1.Guangxi Jinchengshuangfeng Agriculture and Animal Husbandry Science and Technology Co.,Ltd.,Nanning 530001,China;2.College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China;3.Animal Disease Control and Prevention Center of Fusui in Guangxi,Chongzuo 532100,China;4.Bureau of Animal Husbandry of Nandan County Hechi City,Hechi 547200,China)

S816.7

A

1002-1957(2017)05-0017-03

2017-08-11

廣西南寧市興寧區(qū)2017年度科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項目[南興科發(fā)通（2017）8號]

葛洪偉（1978-），男，江蘇丹陽人，畜牧師，碩士，研究方向為畜禽遺傳育種和標準化健康養(yǎng)殖.E-mail:ghwxyl@163.com

楊素芳（1972-），女，廣西全州人，教授，博士，研究方向為畜禽遺傳育種和標準化健康養(yǎng)殖.E-mail:ysfang3511@qq.com