劉曉鳳， 蔣天宇， 徐滕達， 寇 強， 劉 濤

(1.四川天一學院, 四川 綿竹 618200； 2.成都大學 藥學與生物工程學院, 四川 成都 610106)

基于化學成分臨床利用量的郁金質(zhì)量評價研究

劉曉鳳1， 蔣天宇2， 徐滕達2， 寇 強2， 劉 濤2

(1.四川天一學院, 四川 綿竹 618200； 2.成都大學 藥學與生物工程學院, 四川 成都 610106)

目的:通過姜黃素的臨床利用量對郁金的品質(zhì)進行評價研究.方法:采用單因素實驗法考察郁金藥材中姜黃素含量的測定方法，設計正交實驗優(yōu)選郁金中姜黃素的最佳提取工藝,根據(jù)最佳提取工藝采用HPLC法測定多批不同產(chǎn)地郁金中姜黃素的含量,從而計算其臨床利用量對藥材進行質(zhì)量評價.結果:姜黃素含量測定供試品制備方法為取細粉2 g，加入20 mL甲醇，超聲提取30 min；郁金姜黃素最佳提取工藝為藥材加10倍量的60%乙醇提取3次，每次2 h.姜黃素的臨床利用量與藥材的真實含量呈正相關.結論:本研究建立的方法重視臨床效果，體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色，為郁金及其他中藥材質(zhì)量評價研究提供了一種新的思路.

郁金;臨床利用量;質(zhì)量評價

0 引 言

郁金為姜科植物溫郁金、姜黃、廣西莪術或蓬羲術的干燥塊根，前兩者分別稱為“溫郁金”和“黃絲郁金”，后兩者按性狀不同稱為“桂郁金”或“綠絲郁金”[1].據(jù)相關文獻報道，郁金的主要成分為姜黃素、揮發(fā)油等，其中姜黃素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等多種藥理作用,且毒性較低,具有良好的臨床應用潛力[2-6].

目前，業(yè)內(nèi)主要采用以化學有效成分的量為指標的評價模式對中藥材的品質(zhì)進行評價，但有研究表明，以化學成分含量高低對藥材品質(zhì)評價的方法,與其是否在臨床中被應用相關性不強，且存在一些缺陷，如藥材中某些成分含量雖然較高，但提取轉移率不高或不穩(wěn)定，導致“質(zhì)優(yōu)用劣”的現(xiàn)象發(fā)生[7].化學成分臨床利用量，是指在臨床應用時，藥材中的主要成分可被臨床使用的量.對此，本研究以姜黃素的臨床利用量對不同產(chǎn)地的郁金藥材進行品質(zhì)評價，希望對郁金藥材質(zhì)量控制及臨床應用提供一定的參考.

1 儀器與試藥

1)實驗所用儀器.iChrom P5100型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司),FA2004型電子分析天平(上海良平儀器儀表有限公司),KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),HH-S6型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司).

2)實驗所用試藥.郁金，來自四川省中醫(yī)藥科學院，經(jīng)成都大學劉濤研究員鑒定為姜科植物姜黃的干燥塊根，即黃絲郁金；姜黃素對照品(批號，150824，HPLC>98%)，購自成都植標化純生物科技有限公司；甲醇與乙腈為色譜純,水為怡寶純凈水，其余試劑均為分析純.

2 方法與結果

2.1 色譜條件

實驗的色譜條件為：色譜柱為Global Chromatography C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為乙腈—4%冰乙酸溶液(48∶52)；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；檢測波長為430 nm；理論板數(shù)按姜黃素峰計算應不低于4 000[8-9].

2.2 對照品溶液的制備

稱取姜黃素對照品適量,精密稱定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配置成濃度為0.137 mg/mL對照品溶液.精密吸取上述溶液5 mL置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.0137 mg/mL姜黃素對照品溶液.

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 提取方法考察.

稱取黃絲郁金細粉(批號，20160409)4份， 每份約2 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇20 mL，稱定重量，分別加熱回流60 min、超聲提取60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，作為供試品并測定含量，結果見表1.

表1 提取方法考察結果

表1數(shù)據(jù)表明，利用回流法與超聲法姜黃素含量相近，但超聲法更便捷，故本實驗優(yōu)選超聲法提取.

2.3.2 提取時間考察.

稱取黃絲郁金細粉(批號，20160409)6份， 每份約2 g，精密稱定， 分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇20 mL， 稱定重量，分別超聲提取30、60、90 min，放冷， 再稱定重量， 用甲醇補足減失的重量，搖勻， 過濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻， 作為供試品并測定含量， 結果見表2.

表2 提取時間考察結果

表2數(shù)據(jù)表明，在上述條件下超聲提取30、60、90 min姜黃素含量相近，故本實驗優(yōu)選超聲提取30 min.

2.3.3 提取溶媒考察.

稱取黃絲郁金細粉(批號，20160409)8份，每份約2 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇、70%甲醇、無水乙醇、乙醇各20 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用溶媒補足減失的重量，搖勻，過濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，作為供試品并測定含量，結果見表3.

表3數(shù)據(jù)表明，提取溶媒為甲醇時，姜黃素含量較高，故本實驗優(yōu)選甲醇為溶媒.

2.3.4 結 論

實驗結果表明，郁金供試品溶液制備方法為，取黃絲郁金細粉約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

3 方法學考察

3.1 線性考察

按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10 μL進樣，測定峰面積.以姜黃素對照品峰面積為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，計算得到回歸方程為，Y=7789.5X+11.738，相關系數(shù)r=0.9999.結果表明，姜黃素對照品進樣量在0.0274～0.1370 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系.

3.2 精密度實驗

按“2.1”項下色譜條件，每次精密吸取對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測定5次.結果顯示，姜黃素對照品峰面積RSD為0.58%，表明儀器精密度良好.

3.3 重復性實驗

取同一批黃絲郁金細粉(批號，20160409)5份，每份約2 g，精密稱定，分別按“2.3”項下供試品溶液制備方法處理后，按“2.1”項下色譜條件進行含量測定.結果顯示，姜黃素供試品峰面積RSD為0.52%，表明本方法重復性良好.

3.4 穩(wěn)定性實驗

取黃絲郁金細粉(批號，20160409)約2 g，精密稱定，按“2.3”項下供試品溶液制備方法處理后，按“2.1”項下色譜條件進行，精密吸取郁金供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，每隔1 h測定1次，考察8 h.結果顯示，姜黃素供試品峰面積RSD為1.94%，表明，郁金供試品在8 h穩(wěn)定.

3.5 加樣回收率實驗

稱取已測含量的黃絲郁金藥材細粉(批號，20160409)5份，每份約1 g，精密稱定，各精密加入姜黃素對照品適量，分別按“2.3”項下供試品溶液制備方法處理，進行測定并計算回收率，結果見表4.結果顯示，平均回收率為97.83%,RSD為3.85%.

表4 加樣回收率實驗

4 多批樣品含量測定

取不同批次黃絲郁金藥材制按“2.3”項下供試品溶液制備方法處理后，分別進樣測定姜黃素的含量，結果見表5.

表5 多批樣品含量測定

表5數(shù)據(jù)表明，不同產(chǎn)地或同一產(chǎn)地不同批次黃絲郁金中姜黃素含量存在明顯差異，說明黃絲郁金品種品質(zhì)良莠不齊，種質(zhì)資源不穩(wěn)定.據(jù)此，規(guī)定黃絲郁金中姜黃素含量應不低于0.10%.

5 最佳提取工藝考察

5.1 提取溶劑濃度考察

取黃絲郁金藥材(批號：20160409)3份，每份約100 g，分別置于圓底燒瓶中，并加入10倍量的60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇，然后在微沸狀態(tài)下回流提取90 min，相同條件提取2次[10].合并2次樣液并測定姜黃素含量，結果見表6.

表6數(shù)據(jù)表明，用60%乙醇作為提取溶劑提取效果最佳.

表6 提取溶劑濃度與結果

5.2 正交實驗

5.2.1 因素水平表.

取每份50 g黃絲郁金藥材(批號，20160409)，以姜黃素含量為指標做L9(34)正交實驗，選取溶劑倍量(A)、提取次數(shù)(B)和提取時間(C)作為影響提取效果的主要因素，每個因素各選3個水平，制定因素水平表如表7所示.

表7 實驗因素水平表

5.2.2 提取工藝正交安排及結果分析.

根據(jù)正交實驗設計表，按“2.1”項下色譜條件進行含量測定，以姜黃素含量為指標進行分析，正交實驗設計與結果見表8，方差分析見表9.

表8 正交實驗設計及結果

表9 方差分析表

由表8可知，溶劑倍量、提取次數(shù)與提取時間3個因素對姜黃素的提取影響程度不同,R值大小依次為RB>RA>RC,即提取次數(shù)對于含量的影響最大，且AK2>AK3>AK1、BK3>BK2>BK1、CK3>CK2>CK1.由表9可知，溶濟倍量(A)、提取次數(shù)(B)與提取時間(C)對實驗結果都無顯著性差異.根據(jù)此分析結果,本實驗的郁金姜黃素的最佳提取工藝為，A2B3C3，即采用10倍量60%乙醇提取3次,每次2 h.

5.3 提取工藝驗證實驗

取黃絲郁金藥材(批號，20160409)3份，每份約50 g，分別置圓底燒瓶中，加入500 mL的60%乙醇，每次提取2 h，每份提取3次，合并提取液并測定提取液體積與姜黃素的量，結果見表10.

表10 姜黃素提取工藝驗證

表10結果表明，所選擇的提取工藝穩(wěn)定、可行.

6 姜黃素“真實”含量及臨床利用量測定

6.1 不同產(chǎn)地郁金中姜黃素“真實”含量測定

取一定量郁金藥材，精密稱定，粉碎，過六號篩，收集過篩后的全部藥材細粉與未過篩的全部粉末，分別精密稱定其重量，再按“2.3”項下供試品溶液制備方法和按“2.1”項下色譜條件分別測定其姜黃素含量，然后計算出郁金整體藥材姜黃素含量，即為藥材真實含量，結果如表11所示.

表11 姜黃素“真實”含量測定結果

注：用過篩的含量與未過篩的含量根據(jù)其所占的比例計算的含量，即為藥材的真實含量.

6.2 不同產(chǎn)地郁金中姜黃素臨床利用量測定

按照實驗優(yōu)選的提取工藝，對不同產(chǎn)地郁金藥材進行提取，測定其姜黃素含量，計算提取轉移率，并根據(jù)表11中藥材真實含量計算姜黃素的臨床利用量，結果見表12.

表12 臨床利用量測定結果

注：姜黃素臨床利用量=100 g×郁金藥材真實含量×姜黃素提取轉移率

由表12可知，采自犍為縣的黃絲郁金真實含量最高，分別為0.9350、1.0823 mg/g，而采自樂山與雙流的黃絲郁金真實含量最低，分別為0.5403、0.5802 mg/g，藥材的真實含量均低于過篩粉末的含量.同時，由表12數(shù)據(jù)可知，除雙流舟渡村外，其他產(chǎn)地的黃絲郁金真實轉移率相近，但臨床利用量不同.相關研究發(fā)現(xiàn)，藥材真實含量越高其臨床利用量越高，本實驗也證明，姜黃素的臨床利用量與郁金藥材的姜黃素真實含量在一定程度上正相關.

7 結論與討論

郁金藥材在《中國藥典》2015版中有4個品種,相關研究表明，黃絲郁金姜黃素含量遠高于其他品種[11].本實驗為便于研究僅選擇了黃絲郁金為主要藥材，研究結果對于另外3種郁金的相關性有待于進一步研究.

本實驗在測定不同產(chǎn)地郁金中姜黃素臨床利用量時僅選用了5種不同產(chǎn)地黃絲郁金藥材，樣品量較少，且雙流舟渡村黃絲郁金數(shù)據(jù)異常，是否是藥材本身問題所導致的數(shù)據(jù)異常，有待進一步研究.

以化學成分臨床利用量的方式對郁金進行品質(zhì)評價，重視臨床效果，體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色，本方法可為郁金及其他中藥材品質(zhì)評價研究提供一種新的思路.

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2]李艷萍.中藥郁金的化學成分研究[J].西北大學學報,2000,30(5):411-414.

[3]張浩,謝成科,焦文旭.中藥郁金中姜黃素類成分及微量元素分析[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1997,9(4):37-40.

[4]蘭鳳英.郁金的藥理作用及臨床應用[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2009,25(1):27-28.

[5]徐國鈞,徐路珊.常用中藥材品種整理和質(zhì)圣研究(第一冊)[M].福州:福建科學技術出版社,1994.

[6]劉華鋼,劉俊英,賴茂祥,等.郁金化學成分及藥理作用的研究進展[J].

[7]劉濤,茍小軍,萬德光,等.基于“中藥成分臨床利用率"的中藥材藥用品質(zhì)評價模式的商建[J].中草藥,2015,46(13):1863-1866.

[8]雷云霞,孫立立,楊書斌,等.高效液相色譜法測定郁金飲片中姜黃素的含量[J].科技交流,2007,10(6):603-605.

[9]賈海英,杜守穎,李冬雪,等.高效液相色譜法測定黃絲郁金中姜黃素的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2005,16(4):318-319.

[10]潘承鋒,潘愛娟.郁金中姜黃素的提取工藝研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2013,28(6):1887-1889.

[11]李敏,唐遠,付福友,等.郁金的研究進展[J].中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2004,6(2):35-39.

Abstract:The paper evaluates the quality of curcuma aromatica through the clinical utilization quantity of curcumin.It also studies the content of curcumin in curcuma aromatica medicine by single factor experiment.Orthogonal experiment is used to optimize the extraction process of curcumin in curcuma aromatica.According to the best extraction process,the content of curcumin in curcuma aromatica of different batches is determined by HPLC.The quality of curcumin is evaluated by the quantity of its clinical use.The results show that the test preparation method for the curcumin content is as the following:fine powder 2 g,adding 20 mL of methanol,ultrasonic extraction 30 minutes.The best extraction process of curcumin in curcuma aromatica is the extraction of 60% ethanol with 10 times the amount of medicine,each time for 2 hours.The clinical use quantity of curcumin is positively correlated with the true content of herbs.The conclusion drawn from the study is that the method established in this paper attaches importance on clinical effects,which demonstrate the characteristics of Chinese medicine and provides a new idea for the quality evaluation of curcuma aromatica and some other Chinese herbal medicine.

Keywords:curcuma aromatica;clinical use;quality evaluation

StudyonQualityEvaluationofCurcumaAromaticaQualityBasedonAmountofClinicalUtilizationofChemicalComponents

LIUXiaofeng1,JIANGTianyu2，XUTengda2,KOUQiang2,LIUTao2

(1.Sichuan Tianyi University, Mianzhu 618200, China;2.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

R286.0

A

1004-5422(2017)03-0225-05

2017-06-30.

劉曉鳳(1987 — )， 女， 從事中成藥質(zhì)量評價研究.

劉 濤(1976 — )， 男， 博士， 研究員， 從事中成藥新藥開發(fā)與再評價研究.