樊 靜， 孫文霞

(成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所， 四川 成都 610052)

喹諾酮類先導(dǎo)化合物14a在大鼠體內(nèi)的組織分布

樊 靜， 孫文霞

(成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所， 四川 成都 610052)

采用RP-HPLC法測(cè)定喹諾酮類先導(dǎo)化合物14a在大鼠體內(nèi)各組織中的濃度及分布.將18只SD大鼠隨機(jī)分成3組，分別按劑量85 mg/kg灌胃給藥，在1 h、2 h和24 h時(shí)處死并迅速取出各組織，制成勻漿樣品，測(cè)定各組織中的藥物濃度.結(jié)果顯示，大鼠灌胃給藥14a后迅速分布在各組織中，且在肝、腎、肺中濃度高于其他組織.實(shí)驗(yàn)表明，14a吸收較快，在組織中分布廣且無蓄積.

喹諾酮類先導(dǎo)化合物14a；組織分布；反相高效液相法

0 引 言

喹諾酮類先導(dǎo)化合物14a(1-環(huán)丙基-6-氟-1,4-二氫-8-甲氧基-7-(3-氨基-4-烷氧亞胺基-1-哌啶基)-4-氧代-3-喹啉羧酸)為喹諾酮類化合物巴羅沙星C-7位的3-甲氨基哌啶基引入甲氧亞胺基結(jié)構(gòu)得到的一種新的先導(dǎo)化合物[1].相關(guān)的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)表明，14a與已上市的喹諾酮類藥物相比，表現(xiàn)出更優(yōu)的抗菌活性[2-4].對(duì)此，本研究采用RP-HPLC法測(cè)定大鼠灌胃14a后在不同時(shí)間點(diǎn)各組織中14a的濃度，分析了14a在大鼠各組織中的分布，擬為14a的藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試藥

1)實(shí)驗(yàn)所用儀器.LC-10AT型高效液相色譜儀(島津公司)，N-2000型雙通道數(shù)據(jù)工作站(浙江大學(xué)智能信息工程有限公司)，XW-80A型渦流混合儀、勻漿機(jī)(海門其林貝雨儀器制造有限公司)，80-2型離心沉淀器(上海儀器廠)，Sartorius BS 224S型電子天平、FE20型pH計(jì)(梅特勒—托利多儀器有限公司).

2)實(shí)驗(yàn)所用試藥.14a對(duì)照品(含量，99.94%)、內(nèi)標(biāo)莫西沙星對(duì)照品(含量，99.31%)，由四川抗菌素工業(yè)研究所提供；色譜級(jí)二氯甲烷(批號(hào)，20140213)，由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；乙腈為色譜純；水為雙蒸水，其他試劑為分析純.

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件.

實(shí)驗(yàn)色譜條件：色譜柱為Sinochrom C18ODS-AP(4.6 mm×200 mm，5 μm，大連依利特科學(xué)儀器有限公司)；流動(dòng)相為乙腈—水(21∶79，加0.2%三乙胺后用磷酸調(diào)pH至2.80)；檢測(cè)波長為307 nm；流速為1 mL/min；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為20 μL.

1.2.2 溶液的配制.

精密稱取14a對(duì)照品25.0 mg，置25 mL量瓶中，以蒸餾水配制成濃度為1 mg/mL溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密稱取莫西沙星對(duì)照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水配制成0.1 mg/mL溶液，作為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液.

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物.

健康SD大鼠18只，購自達(dá)碩生物科技有限公司(SCXK(川)70B-24)，雌雄各半，體重200～220 g，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性圈養(yǎng)一周.

1.2.4 生物樣品的采集.

18只SD大鼠，隨機(jī)均分成3組，每組6只，雌雄各半.實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，按85 mg/kg灌胃給藥，分別于1 h、2 h和24 h時(shí)斷頸處死，迅速取出心、肝、脾、肺、腎、腸、胃、骨骼肌、睪丸、子宮、大腦和脂肪等組織，用蒸餾水洗凈，濾紙吸干，稱重，加生理鹽水均漿制成勻漿樣品，于-20 ℃保存?zhèn)溆?

1.2.5 樣品前處理.

精密量取組織勻漿樣品200 μL，加入5 μL內(nèi)標(biāo)溶液，混勻， 加入二氯甲烷1 mL， 渦流提取1 min，3 000 r/min離心10 min，吸取下層有機(jī)相600 μL，37 ℃水浴氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶，過濾，取20 μL進(jìn)樣，以內(nèi)標(biāo)法按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算14a濃度.

1.2.6 方法的專屬性.

按“1.2.1”項(xiàng)條件下測(cè)得的色譜圖中(見圖1)，化合物14a和內(nèi)標(biāo)物的峰形良好，分離度為5.186，分離完全，內(nèi)源性雜質(zhì)峰無干擾，理論塔板數(shù)以14a計(jì)大于9 000.

圖1心空白組織勻漿(A)、心空白組織勻漿加入14a和莫西沙星內(nèi)標(biāo)(B)和心勻漿樣品加入莫西沙星內(nèi)標(biāo)(C)的色譜圖

1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限.

精密量取空白組織勻漿200 μL，分別加入14a對(duì)照品溶液10 μL和內(nèi)標(biāo)溶液5 μL，配制成14a濃度分別為0.25、0.50、2.50、5.00、7.50、15.00 μg/mL的組織勻漿樣品和血漿樣品，按“1.2.5"項(xiàng)下方法處理后測(cè)定，以14a峰面積(A14a)與內(nèi)標(biāo)峰面積(AIS)的比值對(duì)14a濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程及線性范圍，具體如表1所示.

結(jié)果表明，各組織樣品在0.25～10.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)14a與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的線性關(guān)系良好，定量限為0.25 μg/mL.

1.2.8 回收率及精密度.

取空白組織勻漿，按“1.2.7"項(xiàng)下方法，配制成含14a濃度為0.50、5.00、7.50 μg/mL的QC樣品各5份，按“1.2.5"項(xiàng)下方法處理后測(cè)定，測(cè)得14a峰面積為A1；另取14a對(duì)照品溶液適量，以流動(dòng)相配制成14a濃度為0.50、5.00、7.50 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，取20 μL進(jìn)樣分析，測(cè)得14a峰面積為A2.

表1 14a在大鼠各組織樣品的線性

計(jì)算14a在各組織中的提取回收率(%)(A1/A2×100%).將QC樣品測(cè)得的峰面積比(A14a/AIS)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求出各組織的14a藥物濃度C1，并與QC樣品的已知濃度C2相比，從而求得各種組織中14a的方法回收率，計(jì)算結(jié)果見表2.

表2 14a在各組織中的精密度和回收率(n=5)

1.2.9 14a的組織分布.

將采集的組織樣品勻漿，按“1.2.5”項(xiàng)下方法測(cè)定，得到不同時(shí)間點(diǎn)各組織的藥物濃度，結(jié)果見表3和圖2.結(jié)果表明，14a在各組織中均有分布，其中在肝、肺、腎中濃度較高.

表3 大鼠各組織中14a的分布

注：“nd”為未檢出.

圖2 14a在大鼠各組織中的分布(n=6)

2 討 論

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用Sinochrom C18ODS-AP色譜柱分離測(cè)定時(shí)，內(nèi)標(biāo)和14a分離較好，但內(nèi)標(biāo)和14a均有一定程度的拖尾，尤其是14a拖尾明顯.經(jīng)實(shí)驗(yàn)，加入一定量的掃尾劑三乙胺可以改善峰形，三乙胺的加入量以0.2%為佳.14a的最大吸收峰在波長273 nm處，在波長307 nm和362 nm處有次要吸收峰.由于在波長273 nm處溶劑與組織勻漿中引入的雜質(zhì)干擾了測(cè)定，很難達(dá)到基線分離.經(jīng)實(shí)驗(yàn)，將測(cè)定波長定為307 nm.

前期，本研究對(duì)14a在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行了初步分析，發(fā)現(xiàn)14a在大鼠體內(nèi)的Tmax為1.5～2 h，因而組織分布的采集時(shí)間點(diǎn)確定為1 h，2 h和24 h：大鼠灌胃給藥后，1 h時(shí)各組織中14a的濃度最高，2 h次之，24 h時(shí)幾乎檢測(cè)不到，此說明14a在組織中無蓄積.此外，在大鼠各組織中，14a分布較廣但濃度有差異，其中在胃、腸、肺、肝、腎中濃度較高，心、脾、生殖腺、肌肉、脂肪、腦中濃度較低，給藥后1 h時(shí)，胃、腸分布較多，此與文獻(xiàn)報(bào)道的其他喹諾酮類藥物的組織分布相似[5-9].另外，給藥1 h后，大鼠腦組織中均能檢測(cè)出少量的14a，說明14a具有一定的脂溶性，可少量地通過血腦屏障進(jìn)入大腦.

[1]卞其龍,程強(qiáng),孫文霞，等.RP-HPLC測(cè)定犬血漿中的喹諾酮類先導(dǎo)化合物14a[J].中國抗生素雜志,2015,30(1):59-61.

[2]蔣曉磊,催玉彬,曹勝華，等.喹諾酮類抗菌藥物研究新進(jìn)展[J].中國抗生素雜志,2011,36(4):255-263.

[3]夏蕊蕊,國憲虎,張玉臻，等.喹諾酮類藥物及細(xì)菌對(duì)其耐藥性機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國抗生素雜志,2010,35(4):255-261.

[4]王秀云,郭強(qiáng),王玉成，等.7-(3-氨基-4-烷氧亞胺基-1-哌啶基)喹諾酮類化合物的合成與抗菌作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2008,43(8):819-827.

[5]Turnpenny P,Padfield A,Barton P，et al.BioanalysisofpseudomonasaeruginosaalkylquinolonesignallingmoleculesininfectedmousetissueusingLC-MS/MS;anditsapplicationtoapharmacodynamicevaluationofMvfRinhibition[J].J Pharm Biomed Anal,2017,139:44-53.

[6]Ren L P,Zhao H Y,Chen Z L.Studyonpharmacokineticandtissuedistributionoflycorineinmiceplasmaandtissuesbyliquidchromatography-massspectrometry[J].Talanta,2014,119:401-406.

[7]黃偉.加替沙星在大鼠體內(nèi)的組織分布[J].兒科醫(yī)學(xué)雜志,2006,12(2):3-5.

[8]Vishwanathan K,Bartlett M G,Stewart J T.Determinationofmoxifloxacininhumanplsmabyliquidchromatographyelectrosprayionizationtandemmassspectrometry[J].J Pharm Biomed Anal,2002,30(4):961-968.

[9]宋坤改,孫濤,林赴田，等.甲磺酸左氧氟沙星大鼠體內(nèi)分布和血清蛋白結(jié)合率[J].中國抗生素雜志,1999,24(3):208-210.

Abstract:The paper adopts the RP-HPLC method to detect the concentration and distribution of 14a in different tissues in rats.18 SD rats are randomly divided into 3 groups,intragastric administration of 85 mg/kg are done on these rats respectively.Take out tissues from the rats quickly and make the homogenate samples the minute the rats are dead in 1 h,2 h and 24 h.HPLC is used for the determination of drug concentration in various tissues.The results show that after the intragastric administration is done on rats,14a is rapidly distributed to all tissues,and the amount of 14a in liver,kidney,and lung is higher than that in other tissles.The conclusion drawn from the paper is that 14a is quickly absorbed and extensively distributed without accumulation.

Keywords:Quinolones leading compounds 14a;tissues distribution;RP-HPLC

TissuesDistributionofQuinolonesLeadingCompound14ainRats

FANJing,SUNWenxia

(Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052, China)

R969.1；TQ460.7+2

A

2017-05-17.

成都大學(xué)校青年基金(2015XJZ07)資助項(xiàng)目.

樊 靜(1983 — )， 女， 研究實(shí)習(xí)員， 從事藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.