趙越，熊亞兵，楊中華，李建洪

華中農(nóng)業(yè)大學，武漢 430070

超聲輔助乳化液相微萃取分析綠茶飲料和番茄汁中有機磷農(nóng)藥殘留

趙越，熊亞兵，楊中華*，李建洪

華中農(nóng)業(yè)大學，武漢 430070

農(nóng)藥施用于田間，必然會殘留于環(huán)境中。農(nóng)藥殘留的分析方法多種多樣。為探究靈敏度高、重現(xiàn)性好的樣品前處理方法，建立了超聲輔助乳化液相微萃取，結(jié)合氣相色譜和火焰光度檢測器測定綠茶飲料和番茄汁中5種有機磷農(nóng)藥的方法，對萃取條件進行了優(yōu)化，如萃取溶劑種類和體積、超聲頻率和時間、鹽效應(yīng)。在優(yōu)化后的萃取條件下，5種有機磷農(nóng)藥實現(xiàn)良好分離，空白添加實驗結(jié)果表明在0.1～10 μg·L-1之間，線性相關(guān)系數(shù)在0.9985～0.9994之間，檢測限在0.005～0.020 μg·L-1之間，相對標準偏差 (n=5)在4.3%～9.4%之間。在綠茶飲料和番茄汁實際樣本檢測中，目標分析物含量均低于檢出限。樣本添加回收試驗的回收率均大于88.5%，相對標準偏差(n=3)在2.2%～9.8%之間，結(jié)果表明該方法用于液體樣本中農(nóng)藥殘留檢測真實可靠。

有機磷農(nóng)藥; 綠茶飲料; 番茄汁; 超聲輔助乳化液相微萃取

Received12 January 2017accepted13 March 2017

Abstract: The pesticide residue will inevitably exist in the environment after the application of pesticides in the field. There are various pesticide residue analysis methods applied in different pesticides and conditions tests. In order to explore the method of sample pretreatment with high sensitivity and good reproducibility, Ultrasound-assisted Emulsification Microextraction (USAEME) were developed. The method of gas chromatography and the flame photometric detector was used to determine five kinds of organophosphorus pesticides in green tea beverage and tomato juice. The conditions including solvent type and volume, ultrasonic frequency and time, and salt effect of USAEME were optimized. Under the optimal conditions, the results showed that the linear range was 0.1-10 μg·L-1, the correlation coefficient (r2) ranged from 0.9985 to 0.9994, and the Limit of Detection (LOD) was between 0.005 and 0.020 μg·L-1. The results showed that the separation of the five organophosphorus pesticides in the chromatogram was good under the optimal extraction conditions. The relative standard deviation (RSD) ranged from 4.3% to 9.4% (n=5). In the practice samples, the concentrations of target analytes in green tea and tomato juice were below LOD. The recoveries were over 88.5%, and the RSD (n=3) ranged from 2.2% to 9.8%. The results showed that the method was accurate and reliable for the determination of pesticide residues in liquid samples.

Keywords: organophosphorus pesticide; green tea; tomato juice; USAEME

為了保證作物的安全和高產(chǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中化學農(nóng)藥的使用必不可少。有機磷農(nóng)藥(organophosphorus pesticides, OPPs)是用于防治植物病、蟲、草害的含有磷元素的有機化合物[1]。此類農(nóng)藥品種多樣，高效，廣譜，在農(nóng)藥中占有重要地位[2]。但是大量有機磷農(nóng)藥頻繁的使用必然會產(chǎn)生負面影響，農(nóng)藥殘留的問題日益凸顯。近些年，農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留問題引起社會的高度重視[3]。鑒于有機磷農(nóng)藥殘留對于環(huán)境和人體存在的威脅，有機磷農(nóng)藥的定性和定量分析具有重要意義。農(nóng)藥殘留分析過程主要包括樣品前處理和儀器檢測兩部分，由于樣品種類的多樣性、樣品基質(zhì)的復雜性、樣品成分的多樣性和含量的痕量性等原因[4]，要求方法靈敏度高和重現(xiàn)性好，同時還要簡單、快速和對環(huán)境友好[5]。

樣品前處理是分析過程的關(guān)鍵步驟，需要提取樣品中目標分析物，并且減少或消除其他雜質(zhì)的干擾，使得儀器對于待測組分實現(xiàn)痕量檢測[6]。有機磷農(nóng)藥常見前處理方法有液液萃取、固相萃取、液相微萃取和固相微萃取等。液液萃取和固相萃取屬于傳統(tǒng)的前處理方法。這些技術(shù)操作繁瑣，需要使用大量有毒有機溶劑，對于操作者和環(huán)境不安全[7]。液相微萃取和固相微萃取是經(jīng)過改進的低成本、操作簡單，少用或者不用有機溶劑的方法。近些年，前處理方法不斷向操作簡便、低消耗以及環(huán)境友好等方向發(fā)展[8-9]。超聲輔助乳化液相微萃取(Ultrasound - Assisted Emulsification Microextraction, USAEME)是利用超聲乳化的作用，將萃取溶劑均勻穩(wěn)定地分散到液體樣本中的一種液相微萃取技術(shù)，這種萃取方法可以避免液液分散微萃取中分散劑的使用，環(huán)保，萃取效率高，有機溶劑少，操作簡單。吳秋華[10]利用超聲輔助乳化液相微萃取(USAEME)與高效液相色譜聯(lián)用的方法測定土樣中5種三嗪類除草劑，考察了萃取劑的種類和體積、鹽的濃度、超聲乳化萃取的溫度和時間等參數(shù)對于萃取效率的影響。在土壤中加標5.0 ng·g-1和50.0 ng·g-1的水平范圍內(nèi)，平均回收率在82.6%～92.0%之間，說明此方法符合農(nóng)藥殘留分析的要求[10]。

本文選取綠茶飲料和番茄汁為樣本，以5種典型的有機磷農(nóng)藥為研究對象，研究了超聲輔助乳化液相微萃取在液體樣本中農(nóng)藥殘留提取的適用性。對于影響萃取效率的萃取溶劑種類和體積、超聲頻率和時間以及鹽效應(yīng)等參數(shù)進行優(yōu)化。隨后利用氣相色譜儀和對于有機磷農(nóng)藥具有高選擇性的火焰光度檢測器對樣本中有機磷農(nóng)藥進行檢測。最優(yōu)條件下實際樣本中的有機磷農(nóng)藥可以被準確檢測。此方法適合液體樣本中痕量有機物的萃取。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實驗試劑與實際樣品

農(nóng)藥標準儲存溶液：5種有機磷農(nóng)藥為丙線磷(ethoprophos)、馬拉硫磷(malathion)、毒死蜱(chlorpyrifos)、水胺硫磷(isocarbophos)和丙溴磷(profenofos)，標準品2 000 mg·L-1(丙酮配制)，均來自于中國農(nóng)業(yè)大學農(nóng)藥殘留分析室；農(nóng)藥混合標樣溶液：5種有機磷農(nóng)藥標準品用丙酮稀釋為1 mg·L-1的混合標樣，每日實驗前均需重新配制；工作樣本：混合標樣濃度為5 μg·L-1的超純水溶液，此工作樣本為參數(shù)優(yōu)化時所用的樣本；有機溶劑：氯苯、二氯苯、四氯化碳均為色譜純，購于北京化工試劑有限公司。丙酮為色譜純，購于國藥化學試劑有限公司；超純水：每日實驗中用到的超純水均出自超純水制備系統(tǒng)，Milli-Q純水儀。

番茄汁樣本：新鮮番茄來自當?shù)爻小７Q取50 g樣品用食品處理器將其粉碎，混勻。然后將粉碎后的樣品加入到100 mL的聚四氟乙烯(PTFE)離心管，在振蕩器上劇烈振蕩5 min后，在3 500 r·min-1下離心5 min，保留上層新鮮的番茄汁，過0.45 μm濾膜2次，以便除去固體顆粒的干擾。取出5 mL過膜后的番茄汁用純凈水稀釋10倍，制成最終的番茄汁樣本。

綠茶飲料樣本：綠茶飲料來自當?shù)爻?。取?0 mL加入到100 mL的PTFE離心管，在3 500 r·min-1下離心5 min，保留上層液體，過0.45 μm濾膜2次。取出5 mL過膜后的綠茶飲料用純凈水稀釋10倍，制成最終的綠茶飲料樣本。

1.2 儀器設(shè)備

Agilent 6890N-FPD帶有Agilent化學工作站(Agilent Teachnologies, Palo Alto, USA)；Sartorius BP211D型十萬分之一天平(德國)，Sartorius BS1100S型萬分之一天平(德國)，JY2002電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；10 μL、50 μL、100 μL微量進樣器(上海高鴿)；DragonMed Pipette 移液槍(5～50 μL、100～1 000 μL、1 000～5 000 μL，大龍醫(yī)療設(shè)備上海有限公司)；QL-901渦旋儀(江蘇海門其林貝爾儀器制造公司)；RJ-TDL-40B低速態(tài)勢大容量高速離心機(無錫市瑞江分析儀器有限公司)；KQ 300DB超聲儀(300 W, 0～40 KHz，昆山超聲儀器有限公司，昆山，中國)。

1.3 色譜條件

色譜柱：HP-5，5%Phenyl Methyl Siloxane Capillary (30 m×0.32 mm i.d.× 0.25 μm film thickness)；進樣口溫度：230 ℃，不分流進樣模式；程序升溫：爐溫從80 ℃開始，保持0 min，然后以20 ℃·min-1升到180 ℃，保持2 min，再以20 ℃·min-1升到240 ℃，保持2 min，程序升溫全程共11 min；檢測器：檢測器溫度為250 ℃，檢測器氣體空氣的流速為100 mL·min-1，氫氣的流速為75 mL·min-1；載氣為氮氣，流速為1.0 mL·min-1；補充氣為氮氣，流速為60 mL·min-1。

1.4 實驗方法

準確量取5 mL樣本溶液加入到10 mL具塞玻璃離心管中。然后向其中加入1%的氯化鈉 (w/v)以增加溶液中的離子強度。再用50 μL的微量進樣器吸取22.0 μL氯苯作為萃取溶劑快速地加入到上述離心管中，將整個離心管插入到超聲儀中開始超聲萃取。樣品溶液在40 kHz的超聲頻率下超聲8 min，在這個過程中，離心管內(nèi)部的混合溶液體系在超聲力的輔助下發(fā)生渾濁現(xiàn)象，此時萃取溶劑均勻穩(wěn)定地以小液滴的形式分散在液體溶液當中，而樣品溶液當中的目標分析物也被萃取到了萃取溶劑的小液滴當中。接下來為了使兩相分離，在3 500 r·min-1的轉(zhuǎn)速下離心5 min，萃取溶劑重新聚合在了玻璃離心管的底部。最后，用10 μL微量進樣器吸取1 μL的下層沉淀相并直接進入氣相色譜分析。

在參數(shù)優(yōu)化之前先確定一個參數(shù)優(yōu)化條件，以便進一步的考察各個參數(shù)對實驗的影響：22 μL氯苯作為萃取溶劑，在40 kHz的超聲頻率下超聲萃取8 min，加入1%的氯化鈉 (w/v)以改變樣本溶液中的離子強度。實驗采用單一變量法來確定最終的參數(shù)，即只改變其中一種參數(shù)，固定其他參數(shù)不變，經(jīng)過比較獲得最佳萃取效率時對應(yīng)的條件就是最終的參數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

方法萃取效率用方法的富集倍數(shù)(EF)、方法的回收率(R%)和峰面積來評價。富集倍數(shù)和方法回收率通過以下計算公式獲得：

(1)

(2)

其中EF指的是方法的富集倍數(shù)(Enrichment Factors)，Corg和Cwater分別是有機相和水相中目標分析物的濃度，R%是方法的回收率，Vorg和Vwater分別是有機相和水相中的體積。Corg的計算通過外標法定量的方式計算，其他參數(shù)都是已知的。

2 結(jié)果(Results)

2.1 USAEME萃取條件的優(yōu)化

對影響超聲輔助微萃取方法萃取效率的萃取溶劑種類及體積、超聲頻率的大小、超聲萃取時間、鹽效應(yīng)等參數(shù)進行優(yōu)化，結(jié)果如下。

2.1.1 萃取溶劑的種類

在各種影響超聲輔助微萃取方法萃取效率的參數(shù)中，萃取溶劑的種類是最為重要的，它的選取直接決定了萃取效率的高低。根據(jù)超聲輔助微萃取的特點被選擇的萃取溶劑需要滿足以下原則：首先，萃取溶劑在液體樣本中要有盡可能小的溶解度，并且對目標分析物要有足夠高的萃取效率；其次，萃取溶劑在超聲的作用下可以很容易分散到樣本中，并且可以形成均勻而穩(wěn)定的分散體系，這樣有利于提高萃取效率，減少萃取時間；另外，萃取溶劑的密度要大于水，以便在離心相分離之后，萃取溶劑可以沉淀在離心管的底部，便于收集，輕型的萃取溶劑不但難以回收而且存在于樣本溶液的上層容易揮發(fā)；最后，萃取溶劑要符合氣相色譜的進樣要求，各個目標分析物要有良好的色譜流出曲線，溶劑峰不能對其產(chǎn)生干擾，同時萃取溶劑不能污染色譜儀器。根據(jù)以上原則選取氯苯、四氯化碳和二氯苯作為備選的溶劑，實驗以5 mL工作樣本為基質(zhì)，在參數(shù)優(yōu)化條件下采用改變單一變量的方法分別對以上3種萃取溶劑做了評價，以色譜圖中的保留時間作為定性的依據(jù)，實驗結(jié)果見圖1。從圖1可以看出，氯苯對5種有機磷農(nóng)藥具有最高的萃取效率，而四氯化碳和二氯苯不能得到滿意的萃取效果。產(chǎn)生上述結(jié)果的原因可能是：與其他試劑相比較氯苯具有更合適的極性，可以與目標分析物之間可以產(chǎn)生更強的分子間作用力，因此在本實驗中選擇氯苯作為最終的萃取溶劑。

2.1.2 萃取溶劑體積的選擇

在超聲輔助微萃取方法中，萃取溶劑的體積大小對結(jié)果有兩方面的影響：首先，萃取溶劑的體積會影響分散效果，前人的研究[9]發(fā)現(xiàn)樣品溶液中有機溶劑含量的不同會對超聲乳化效果有直接的影響，隨著有機溶劑含量增加分散的小液滴數(shù)量會減少，而且每一個液滴體積會增大；其次，對于液相微萃取來說，萃取體積的增大一般意味著萃取效率的增大，但是同時也會降低方法的富集倍數(shù)。因此，本實驗中萃取溶劑體積的選取原則是：在能夠保證較高的萃取效率的前提下，盡可能減少萃取溶劑的使用量，以達到更高的富集倍數(shù)和更低的方法檢出限。為了評價不同萃取溶劑體積對超聲輔助微萃取方法的影響，以5 mL的工作樣本為研究對象，在參數(shù)優(yōu)化的條件下，實驗考察了不同體積的氯苯(22、27、32、和37 μL)對目標分析物的響應(yīng)值。萃取溶劑體積低于22 μL會使得相分離后的沉淀相體積難以滿足后續(xù)的氣相色譜的進樣要求；體積過大又會影響超聲的分散效果。隨著萃取溶劑體積的增加，離心相分離后沉淀相的體積從15 μL增加到30 μL。不同的萃取溶劑體積下，分析物的響應(yīng)值和富集倍數(shù)見圖2和圖3。通過圖中可以看出，隨著萃取溶劑體積的增加，響應(yīng)值和富集倍數(shù)(EF)都逐漸減少，響應(yīng)值減少是因為沉淀相體積的增加使得單位體積內(nèi)目標分析物的含量減少了的緣故；而富集倍數(shù)降低是因為萃取完畢后沉淀相中的目標分析物的濃度降低了的緣故。通過回收率的計算公式可以得出，當沉淀相體積在15～30 μL的范圍內(nèi)變化時，方法的回收率數(shù)值基本不變。經(jīng)過以上的分析，決定在本實驗中采用22 μL的萃取溶劑。

圖1 USAEME使用不同的萃取溶劑對有機磷農(nóng)藥(OPPs)的萃取效果Fig. 1 USAEME extraction efficiency of the organophosphorus pesticides (OPPs) with different organic solvents

圖2 不同的氯苯萃取溶劑體積下USAEME萃取OPPs的效率Fig. 2 Effects of volume of chlorobenzene on the extraction efficiency in USAEME extraction of OPPs from water

2.1.3 超聲頻率大小的選擇

對于以超聲力為輔助手段來分散萃取溶劑的方法來說，超聲頻率對液滴的分散的效果有關(guān)鍵的作用。在一個水和有機溶劑的混合體系中(水相為連續(xù)相)，在超聲的作用下有機溶劑會分散成大的液滴，隨著超聲時間的延長，大液滴逐漸分散成更小的液滴直至形成一種渾濁的分散體系。在本實驗中為了評價不同超聲頻率對方法的影響，以5 mL的工作樣本為研究對象，在參數(shù)優(yōu)化的條件下，考察了不同超聲輸出功率對分散效率的影響。將工作樣本和萃取溶劑的混合體系分別置于20 kHz、32 kHz和40 kHz的超聲頻率下，觀察分散效果以及方法的響應(yīng)值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著超聲輸出功率和超聲頻率的增加，超聲的分散效果也越好，因此在本實驗中選擇了儀器可達到的最高的超聲頻率40 kHz，此時超聲輸出功率為300 W。

2.1.4 超聲萃取時間的影響

本實驗涉及到的超聲時間其實就是方法的萃取時間，超聲時間對方法的萃取效率有著十分重要的影響。實驗現(xiàn)象表明，在相同超聲頻率的作用下，隨著超聲時間的延長分散的有機液滴數(shù)量會逐漸的增加，而液滴的體積會逐漸變小，萃取溶劑的分散效果也隨之變得更好。盡管如此，過長的超聲時間會增加實驗的總體時間，使方法變得更繁瑣。此外，在超聲過程中往往會伴隨著萃取體系溫度的升高，對于有些熱不穩(wěn)定的化合物來說，要盡量避免溫度變化帶來的影響。因此，超聲時間的選擇要在可以達到較好的分散效果和萃取效率的前提下盡可能的縮短萃取時間。在本實驗中研究了不同的超聲時間(3、5、8、10 min)對萃取效率的影響，以工作樣本為對象，在參數(shù)優(yōu)化的條件下各個目標分析物的色譜流出曲線見圖5。通過圖5可以看出，超聲時間從3 min

增加到8 min時，方法的響應(yīng)值逐漸地升高了，而超聲時間從8 min延長到10 min的過程中，方法響應(yīng)值增加的不是很明顯，這說明超聲8 min時就可以取得足夠好的分散效果，此時萃取達到了平衡。因此，為了節(jié)省操作的時間，最終超聲時間確定為8 min。

2.1.5 鹽的影響

通常來講樣本溶液中的離子強度即鹽效應(yīng)對方法的萃取效率具有正反兩方面的影響：一方面隨著樣本溶液中鹽濃度的增加，目標分析物在樣本中的溶解度會降低，這樣更有利于目標分析物的萃取，這屬于有利于萃取的鹽析效應(yīng)；另一方面隨著鹽濃度的增加，樣本溶液中自由離子也隨之增加，這樣由于存在阻礙作用可能導致目標分析物向萃取溶劑中的傳質(zhì)系數(shù)降低，使萃取效率降低。而對于超聲輔助萃取的方法來說，鹽的加入也會增加樣本溶液的黏度，樣本黏度的增加會影響超聲在水中的傳播，從而導致超聲乳化效果下降，進而降低了萃取效率，這屬于不利于萃取的破乳效應(yīng)。因此，鹽濃度對方法的效率有著重要的影響，在本實驗中鹽的影響要從2個角度去考慮。

圖3 不同的萃取溶劑體積下，USAEME 萃取OPPs的富集倍數(shù)Fig. 3 Effects of volume of chlorobenzene on the enrichment factors (EF) in USAEME extraction of OPPs from water

圖4 超聲頻率對USAEME萃取效率的影響Fig. 4 Effects of ultrasonic frequency on extraction efficiency of OPPs obtained from water in USAEME

圖5 超聲時間對USAEME萃取效率的影響Fig. 5 Effects of ultrasonic time on extraction efficiency of OPPs obtained from water in USAEME

圖6 鹽效應(yīng)對USAEME萃取OPPs效率的影響Fig. 6 Effect of salt addition on extraction efficiency of OPPs obtained from water in USAEME

為了研究鹽效應(yīng)對超聲輔助微萃取方法萃取效果的影響，通過向工作樣本中加入不同濃度的(0%～5%)NaCl來考察，結(jié)果見圖6。通過圖6可以看出，隨著鹽的加入，方法的響應(yīng)值隨之增加了，當樣本溶液中鹽濃度達到3%時響應(yīng)值又反而變低了，進一步增加鹽的濃度當達到5%時，發(fā)現(xiàn)很難在用超聲的方法將萃取溶劑分散到水相中了。以上現(xiàn)象表明，超聲輔助微萃取的操作過程中鹽的加入不但會影響目標分析物在水相中的溶解度，還會影響有萃取溶劑在水中的分散乳化效果，在鹽的濃度很低時鹽析作用占主導，而當鹽濃度達到很高的時候溶液中鹽的破乳作用會起到主要作用。鹽的加入會影響兩相體系的超聲乳化效果，隨著鹽的加入體系的黏度增加，削弱了超聲作用的效果，萃取溶劑分散在水中液滴的體積會增加，數(shù)量也會減少，進而降低了萃取溶劑在樣本溶液中的分散效果。因此，從乳化的角度來講鹽的加入會對分散效果有負面影響。此外，加入過多的鹽也會引入一些雜質(zhì)，影響了實驗結(jié)果。綜合以上各種因素考慮，本實驗對于鹽的加入的原則是：在保證具有較高萃取效率的前提下盡量降低鹽的加入。因此，在本實驗中采用加入1%的NaCl的方法來提高萃取效率，同時也可以使萃取溶劑更好地分散開來。

綜上所述，經(jīng)過對本實驗中涉及到的影響方法萃取效率的參數(shù)的優(yōu)化，最終確定方法的萃取條件為：22 μL氯苯作為萃取溶劑，在40 kHz的超聲頻率下超聲萃取8 min，加入1%(w/v)的氯化鈉，此條件為方法的優(yōu)化萃取條件。

2.2 萃取條件的方法評價

以上是對超聲輔助微萃取方法中萃取條件的優(yōu)化，接下來的實驗要在確定了的萃取條件下對方法進行評價，這部分實驗是通過評價方法的線性、重現(xiàn)性、最小檢測限等幾個指標來完成的，結(jié)果見表1。水樣的濃度在0.1～10 μg·L-1時，方法的線性相關(guān)系數(shù)在0.9985～0.9994之間；方法的最小檢出限(limit of detection，LOD)定義為獲得峰高為3倍信噪比(S/N)時樣本中對應(yīng)的目標分析物的濃度，通過計算添加濃度為0.01 μg·L-1的純凈水樣本來計算的，LOD在0.005～0.020 μg·L-1之間；方法的重現(xiàn)性用相對標準偏差(relative standard deviations，RSD)來表示，通過分析添加濃度在1 μg·L-1時的5次的回收率來獲得，RSD在4.3%～9.4%之間。圖7是一張水樣中添加濃度在0.10 μg·L-1使用超聲輔助微萃取方法的典型色譜圖。

2.3 實際樣本中的應(yīng)用

根據(jù)以上對超聲輔助微萃取方法的優(yōu)化和評價，說明該方法是可靠的。接下來為了考察方法的實用性，對超聲輔助微萃取方法在實際樣本上的應(yīng)用進行了驗證，運用新開發(fā)的方法來檢測番茄汁和綠茶飲料樣本中的有機磷農(nóng)藥殘留。經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)，2種樣本中均不含有目標分析物，更確切地說樣本中目標分析物的含量低于方法的檢出限。最后，通過向不含有目標分析物的樣本中添加3個不同濃度水平的有機磷農(nóng)藥來考察樣本對方法的基質(zhì)效應(yīng)影響。實驗結(jié)果見表2。表2表明，樣本中的濃度在0.10～2.0 μg·L-1之間時，不同添加濃度水平下的回收率均大于88.5%，而添加樣本的相對標準偏差在2.2%～9.8%之間。以上數(shù)據(jù)可以說明，該方法用于農(nóng)藥殘留檢測真實可靠。

2.4 方法比較

與其他萃取方法比較(表3)，本實驗的萃取方法使用的有機溶劑少，克服了液液萃取時有機溶劑大量使用的缺點，避免了分散液液微萃取中分散劑的使用，綠色環(huán)保。不同方法的分析參數(shù)差異不大，均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。

3 討論(Discussion)

本研究利用超聲乳化的作用，將萃取溶劑均勻穩(wěn)定的分散到液體樣本中，從而避免了分散劑的使用。在這種分散體系里，萃取溶劑和液體樣本之間的接觸面積被擴大了無數(shù)倍，從而使萃取可以很快達到平衡，極大地提高了微萃取的效率。該方法成功的克服了液-液分散微萃取中需要加入分散劑的缺點，這樣可以使取得更好的回收率。此外還利用了火焰光度檢測器對有機磷化合物的高度選擇性，使經(jīng)過超聲輔助微萃取操作后的有機溶劑可以直接進入色譜儀器分析，減少了雜質(zhì)對分析的干擾。在萃取條件下對實際樣本進行分析取得了較好的效果，可以準確的檢測食品樣本中的有機磷農(nóng)藥殘留。方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，對方法評價的各種分析參數(shù)均符合殘留限量的要求。以上研究證明，本方法非常適合萃取液體樣本中的痕量有機污染物，大多數(shù)情況下可以作為一種替代傳統(tǒng)液液萃取操作的方法。

圖7 使用USAEME方法分析綠茶中添加的5種OPPs的GC-FPD色譜圖注：從左至右 (1)丙線磷，(2)馬拉硫磷，(3)毒死蜱，(4)水胺硫磷，(5) 丙溴磷。Fig. 7 GC-FPD chromatogram of OPPs obtained from fortified green tea sample analytes by USAEMENote: From left to right, (1) Ethoprophos, (2) Malation, (3) Chlorpyrifos, (4) Isocarbophos, (5) Profenofos.

表1 USAEME-GC-FPD方法聯(lián)用分析5種有機磷農(nóng)藥的線性、相關(guān)系數(shù)、精密度和檢測限(n=5)Table 1 Analytical performance data for the OPPs by the USAEME-GC-FPD method (n=5)

注： RSD為相對標準偏差；Linear range為線性范圍；r2為相關(guān)系數(shù)；LOD為檢測限。

Note: RSD stands for relative standard deviation; r2stands for correlation coefficient; LOD stands for limit of detection.

表2 番茄汁和綠茶飲料中有機磷農(nóng)藥的添加回收率(n=3)Table 2 Recoveries obtained in the determination of organophosphorus pesticide in fortified green tea and tomato juice (n=3)

注： Spiked為添加濃度；R為回收率。

Note: Spiked stands for Spiked Concentration; R stands for Recovery.

表3 有機磷類農(nóng)藥提取方法的比較Table 3 The comparison of the extraction method of organophosphorus pesticides

注：USAEME為超聲輔助乳化液相微萃??；LLE為液液萃??；DLLME為分散液液微萃取；N為沒有使用分散劑；M為本實驗萃取方法。

Note: USAEME stands for ultrasound-assisted emulsification microextraction; LLE stands for liquid-liquid extraction; DLLME stands for dispersive liquid-liquid microextraction; N stands for no use of dispersant; M stands for the method of this experiment.

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AnalysisofOrganophosphorusPesticideResiduesinGreenTeaandTomatoJuicebyUltrasound-AssistedEmulsificationMicroextraction(USAEME)

Zhao Yue, Xiong Yabing, Yang Zhonghua*, Li Jianhong

Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

10.7524/AJE.1673-5897.20170112004

2017-01-12錄用日期2017-03-13

1673-5897(2017)3-658-09

X171.5

A

楊中華(1985—)，男，農(nóng)產(chǎn)品安全博士，副研究員，主要研究方向農(nóng)藥殘留與環(huán)境毒理學。

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金資助項目(2662015QD007)；國家自然科學基金資助項目(21507032)

趙越(1993-), 女, 在讀碩士, 研究方向為農(nóng)藥殘留與環(huán)境毒理, E-mail: ednazhaoyue@webmail.hzau.edu.cn

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: yangzhonghua@mail.hzau.edu.cn

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Zhao Y, Xiong Y B, Yang Z H, et al. Analysis of organophosphorus pesticide residues in green tea and tomato juice by ultrasound-assisted emulsification microextraction (USAEME) [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 658-666 (in Chinese)