鄧超干，羅欽泉，陸冰露，袁燕，鐘金花

(深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院輸血科，廣東 深圳518001)

5628例預(yù)輸血患者不規(guī)則抗體篩查結(jié)果分析

鄧超干，羅欽泉，陸冰露，袁燕，鐘金花

(深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院輸血科，廣東 深圳518001)

目的 通過對預(yù)輸血患者不規(guī)則抗體篩查結(jié)果的分析，探討不規(guī)則抗體產(chǎn)生的頻率、分布情況及其臨床意義。方法 采用微柱凝膠法對本院2015年1月至2016年12月共5628例輸血申請的患者血清進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，抗篩陽性者，使用譜細(xì)胞及相關(guān)試劑鑒別其不規(guī)則抗體特異性，部分患者血樣送至深圳市血液中心進(jìn)行不規(guī)則抗體特異性鑒定。結(jié)果5628例患者共檢出不規(guī)則抗體40例，陽性率為0.71%；特異性抗體系統(tǒng)R h、Lewis、MNS及混合抗體構(gòu)成比分別為72.5%、5.0%、5.0%、12.5%，特異性鑒定結(jié)果顯示以Rh血型系統(tǒng)居多，其中出現(xiàn)頻率最高的是抗E，共檢出26例占65.0%；混合抗體檢出5例占12.5%；無特異性抗體占7.5%，冷抗體占10.0%。不規(guī)則抗體陽性患者中，女性占77.50%，顯著高于男性患者的22.50%(χ2=17.352，P＜0.001)；有輸血史占57.50%、陽性率為1.62%，無輸血史患者占42.50%、陽性率為0.40%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=22.132，P＜0.000）；有妊娠史患者占67.50%、陽性率為1.38%，無妊娠史占32.50%、陽性率為0.35%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=19.075，P＜0.001），既有輸血史又有妊娠史者陽性率為2.08%，顯著高于其他患者的陽性率(0.45%)。結(jié)論 輸血前對患者尤其是有輸血史或妊娠史的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，對有效減少或避免輸血不良反應(yīng)，提高臨床用血安全性及有效性具有重要的臨床意義。

不規(guī)則抗體；抗體篩查；抗體分布；妊娠史；輸血史

血型不規(guī)則抗體是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體，這類抗體多為IgG抗體，主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生[1]，是引起免疫性溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病、血型鑒定正反不符、交叉配血不相容以及血液輸注無效的主要因素。因此，輸血前血清不規(guī)則抗體的篩查與鑒定對輸血安全性和有效性非常重要[2，3]。本研究通過對5628例輸血前患者血清不規(guī)則抗體篩查和鑒定結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，以探討不同性別、輸血史、妊娠史對患者不規(guī)則抗體檢測結(jié)果的種類分布影響及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象抽取2015年1月至2016年12月間深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院有輸血需求患者的血液樣本5628例，其中男性2247例，女性3381例，有輸血史的1423例，有妊娠史的1955例，既有輸血史又有妊娠史的914例。常規(guī)靜血3ml，所有標(biāo)本都采用EDTA-K2抗凝，篩查前保存于2～8℃。

1.2 儀器與試劑西班牙WADiana全自動血型配血系統(tǒng)，微柱凝膠檢測卡 (西班牙Diana公司，批號：15010.01、16025.01)，KA-2200 血庫專用離心機(jī)(日本久保田)、Diana孵育器和Diana離心機(jī)?？贵w篩選細(xì)胞(Diana 批號：15002.01、16023.01)，抗體特異性鑒定譜細(xì)胞 (上海血液生物批號：20154601、20163602)，IgG 抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-M、抗-N、抗-P、抗-H試劑血清(上海血液生物批號：20155704、20164702)。以上試劑均批檢合格并在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

1.3.1 不規(guī)則抗體篩查儀器方法按照西班牙WADiana全自動血型配血型儀說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3.2 不規(guī)則抗體篩查手工方法使用微柱凝膠卡方法。離心被檢者血液標(biāo)本分離血漿與紅細(xì)胞，吸取分別被檢者血清50μl和抗體篩選細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號25μl加入抗球蛋白檢測卡中，置 37℃孵育15min，1000r/min離心10min，肉眼觀察結(jié)果。紅細(xì)胞均勻沉于管底者為陰性，懸浮于凝膠表面或凝膠中段者為陽性。

1.3.3 吸收放散實(shí)驗(yàn)將患者血清加入與患者ABO及Rh血型同型且與患者主側(cè)配血凝集的細(xì)胞中，置于37℃水浴箱中吸收1h，將吸收后的血清做抗體鑒定，同時將吸收后的細(xì)胞在56℃水浴箱中振蕩10min進(jìn)行熱放散，并對放散液做抗體鑒定。

1.3.4 不規(guī)則抗體特異性鑒定分別吸取抗篩陽性者血漿 40μl， 譜細(xì)胞 1～10號 20μl及自身細(xì)胞20μl加入抗球蛋白檢測卡中，置37℃孵育15min，1000r/min離心10min，肉眼觀察結(jié)果。紅細(xì)胞均勻沉于管底者為陰性，懸浮于凝膠表面或凝膠中段者為陽性。在自身細(xì)胞對照陰性的情況下，根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)格局對應(yīng)細(xì)胞譜，鑒定不規(guī)則抗體。結(jié)合患者抗原表型后確定不規(guī)則抗體特異性。部分譜細(xì)胞反應(yīng)格局無特異性，或科室內(nèi)無對應(yīng)試劑血清可鑒定者，將患者血樣送至深圳市血液中心進(jìn)行不規(guī)則抗體特異性鑒定。所有操作在室內(nèi)質(zhì)控合格后，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3.5 交叉配血實(shí)驗(yàn)在鹽水介質(zhì)、聚凝胺介質(zhì)及LISS/Coombs凝膠卡中進(jìn)行交叉配血，觀察是否有凝集。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件分析，對計量資料采用均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行描述，計數(shù)資料采用率、構(gòu)成比等指標(biāo)進(jìn)行描述，對計數(shù)指標(biāo)采用卡方檢驗(yàn)等方法進(jìn)行統(tǒng)計分析，所有統(tǒng)計學(xué)的檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α值設(shè)為0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 性別、輸血及妊娠史對不規(guī)則抗體產(chǎn)生的影響5628例標(biāo)本中共檢出抗體陽性40例，陽性率為0.71%。其中，男性9例，女性31例，既往有輸血史的23例，有妊娠史的27例，有輸血及妊娠史的19例，結(jié)果見表1。

2.2 不規(guī)則抗體陽性的分布40例不規(guī)則抗體中同種特異性抗體33例，主要涉及3個血型系統(tǒng)，其中Rh系統(tǒng)29例(72.5%)，Lewis系統(tǒng)2例(5.0%)，MNS系統(tǒng)2例(5.0%)，混合抗體5例(12.5%)，結(jié)果見表2。

3 討論

血型不規(guī)則抗體一般不按規(guī)律出現(xiàn)，其存在是導(dǎo)致臨床發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的主要原因之一[4]。由于血型抗原的表現(xiàn)型在不同地區(qū)、不同種族和不同人群之間存在一定的差異，受到抗原免疫刺激的機(jī)會不相同，因此血型不規(guī)則抗體的檢出率及其特異性也不一致[5]。國內(nèi)文獻(xiàn)報道紅細(xì)胞不規(guī)則抗體在輸血患者中的檢出率為0.3%～2.0%[6-8]。本結(jié)果不規(guī)則抗體的檢出率為0.71%(40/5628)；與國內(nèi)戚超等報道的0.64%[9]及王謙等報道的0.68%[10]結(jié)果相近，低于日本一項(xiàng)為期3年的調(diào)查結(jié)果1.43%[11]。從不規(guī)則抗體的分布來看，40例不規(guī)則抗體中同種特異性抗體33例，主要涉及3個血型系統(tǒng)，其中Rh系統(tǒng)占72.5%、Lewis系統(tǒng)占5.0%、MNS系統(tǒng)占5.0%、混合抗體占12.5%；Rh血型系統(tǒng)中出現(xiàn)頻率最高的是抗E占65.0%（26/40），而未檢出抗D。究其原因可能是近年來我國采供血機(jī)構(gòu)及輸血科普遍進(jìn)行RhD定型試驗(yàn)，并針對RhD陰性患者同型輸注，從而預(yù)防和降低了抗D的產(chǎn)生；而抗E檢出率增高的原因可能是采供血機(jī)構(gòu)及輸血科未進(jìn)行RhE定型試驗(yàn)而被忽視，而Rh血型系統(tǒng)中RhE是除RhD之外最強(qiáng)的抗原[12]，當(dāng)RhE抗原陰性的患者輸入RhE抗原陽性的血液時，因同種免疫較易產(chǎn)生抗-E。魏亞明等研究表明RhE抗原的陽性率為47.88%，臨床因RhE血型不合的比率是RhD血型的2.5倍[13]。這表明抗E是臨床最常見且最有臨床意義的不規(guī)則抗體，當(dāng)產(chǎn)生抗E的患者再次輸入RhE抗原陽性的血液或再次懷孕時，可引起遲發(fā)性溶血輸血反應(yīng)或母嬰血型不合新生兒溶血病。因此，采供血機(jī)構(gòu)及輸血科在常規(guī)血型鑒定的基礎(chǔ)上有必要增加RhE定型試驗(yàn)，并針對RhE陰性患者同型輸注。另外，本檢測中發(fā)現(xiàn)4例冷抗體，對于高效價冷抗體的患者需輸血治療時，輸血科應(yīng)告知臨床醫(yī)生使用專業(yè)的血液加溫儀將血液加溫至37℃時方可輸注。

表1 性別、輸血及妊娠史對不規(guī)則抗體產(chǎn)生的影響

表2 40名抗篩陽性患者的不規(guī)則抗體分布

表1結(jié)果顯示女性患者檢出率顯著高于男性患者，有妊娠史患者檢出率顯著高于無妊娠史患者，有輸血史患者的陽性率顯著高于無輸血史患者，既有輸血史又有妊娠史患者的陽性率顯著高于其他患者(P＜0.001)；國內(nèi)劉仁強(qiáng)等研究結(jié)果也表明臨床輸血產(chǎn)生療效的同時也增加患者接觸異型抗原的機(jī)會，多次輸血產(chǎn)生不規(guī)則抗體的幾率可達(dá)到15%～20%[14，15]。以上結(jié)果表明不規(guī)則抗體的產(chǎn)生與患者的性別、妊娠及輸血史有顯著相關(guān)性；不規(guī)則抗體的出現(xiàn)頻率可能隨調(diào)查人群的不同而表現(xiàn)出一定差異性。這可能與女性由于懷孕、流產(chǎn)及分娩等因素使機(jī)體受到的免疫刺激多于男性，且女性同時存在著輸血和妊娠雙重免疫機(jī)會有關(guān)。

綜上所述，不規(guī)則抗體是導(dǎo)致臨床配血困難及發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的主要原因，而妊娠和輸血是誘導(dǎo)不規(guī)則抗體產(chǎn)生的主因。輸血前對患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查和鑒定十分必要，尤其是對有輸血史、妊娠史及短期內(nèi)需要接受多次輸血者。可及早發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)有臨床意義的不規(guī)則抗體，及時為患者選擇配合的成分血進(jìn)行輸血治療，有效減少或避免溶血反應(yīng)的發(fā)生，提高臨床用血安全性及有效性。

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R457.1+1

A

1674-1129(2017)05-0814-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.065

2017-05-09；

2017-08-28)