涂國(guó)章， 張顯強(qiáng)

(貴州警官職業(yè)學(xué)院， 貴州貴陽(yáng) 550005； 貴州省道路交通事故鑒定工程技術(shù)研究中心， 貴州貴陽(yáng) 550005)

酒駕血液乙醇含量測(cè)試最佳血儲(chǔ)容器的選擇探究

涂國(guó)章， 張顯強(qiáng)

(貴州警官職業(yè)學(xué)院， 貴州貴陽(yáng) 550005； 貴州省道路交通事故鑒定工程技術(shù)研究中心， 貴州貴陽(yáng) 550005)

目的 血儲(chǔ)容器的選擇對(duì)血液乙醇含量準(zhǔn)確測(cè)試有重要影響，為真實(shí)測(cè)定酒駕人員血液乙醇含量，減少因存儲(chǔ)容器不佳而造成測(cè)試結(jié)果的偏離，篩選最佳的血儲(chǔ)容器供基層交管部門(mén)推廣使用。方法 選取5種真空采血抗凝管,飲酒100 mL后30 min抽取人體靜脈鮮血，于4～8 ℃冰箱冷藏保存，按0、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d后用GC法測(cè)試血液乙醇含量，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行初篩。之后，選取其中含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性較好的抗凝管，采取酒后人體靜脈鮮血后，于-20 ℃下冰柜保存，按0、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d后GC法測(cè)試，并對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及比較。結(jié)果 初篩EDTA-K2采血管、枸櫞酸鈉(1∶9)采血管、肝素鈉采血管等3種采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性比氟化鈉- 草酸鉀采血管和枸櫞酸鈉(1∶4)采血管要好。-20 ℃下冰柜保存結(jié)果顯示EDTA-K2采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性比枸櫞酸鈉(1∶9)采血管、肝素鈉采血管均要好。其中，枸櫞酸鈉(1∶9)采血管、肝素鈉采血管在35 d后結(jié)果有明顯變化(P<0.05)，而EDTA-K2采血管在49 d后結(jié)果與初測(cè)含量幾乎不變(P>0.05)。結(jié)論 本研究認(rèn)為EDTA-K2采血管為酒駕最佳血儲(chǔ)容器，氟化鈉- 草酸鉀采血管和枸櫞酸鈉(1∶4)采血管不宜作為血儲(chǔ)容器。

血儲(chǔ)容器； 真空采血抗凝管； 氣相色譜； 探究

0 引言

酒后駕車(chē)極易導(dǎo)致交通事故[1-2]。新《道路交通安全法》對(duì)飲酒后駕車(chē)有著不同的處罰標(biāo)準(zhǔn)，血液乙醇含量的高低直接影響交管部門(mén)對(duì)酒駕人員的判罰。而血儲(chǔ)容器合理的選擇對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性有直接的影響, 篩選最佳的血儲(chǔ)容器具有重要的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)行的血儲(chǔ)容器即真空采血管有9種，基層交管部門(mén)用于采取疑似酒駕人員血樣送檢至鑒定機(jī)構(gòu)的9種采血管都較常見(jiàn)，缺乏統(tǒng)一規(guī)范且相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中也沒(méi)有明確規(guī)定[3]。

眾所周知，不同采血管因是否具有真空條件及儲(chǔ)存不同血樣時(shí)，對(duì)血液乙醇穩(wěn)定性有影響[4-5]，這樣勢(shì)必會(huì)影響血液乙醇含量測(cè)試結(jié)果，對(duì)疑似酒駕人員的認(rèn)定會(huì)造成偏差。因此，血儲(chǔ)容器的選擇統(tǒng)一規(guī)范迫在眉睫。據(jù)實(shí)踐和資料顯示，真空采血普通管、促凝管、惰性分離膠促凝管及含肝素鋰的惰性分離膠管等作為血儲(chǔ)容器，短時(shí)間內(nèi)很容易使血液凝固，同時(shí)分離膠管在制作過(guò)程中本身殘留有乙醇成分，從而影響血液乙醇含量測(cè)試結(jié)果，故實(shí)踐中在血儲(chǔ)容器的選擇上傾向于選擇真空采血抗凝管[6]。然而真空采血抗凝管有多種，分別有EDTA采血管、枸櫞酸鈉1∶9采血管(檸檬酸鈉1∶9)、肝素采血管、枸櫞酸鈉1∶4采血管(檸檬酸鈉1∶4)、氟化鈉- 草酸鉀采血管等，究竟哪種是最佳的血儲(chǔ)容器目前沒(méi)有資料記載，相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也沒(méi)有規(guī)定。因而本實(shí)驗(yàn)對(duì)多種真空采血抗凝管儲(chǔ)血乙醇含量變化進(jìn)行選擇性研究，篩選最佳的血儲(chǔ)容器，盡可能減小血儲(chǔ)容器對(duì)血液乙醇含量測(cè)試的影響，對(duì)獲取真實(shí)的酒駕血液乙醇檢測(cè)結(jié)果具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

選擇健康成年男性30人，在酒后30 min后至實(shí)驗(yàn)室抽取靜脈鮮血[7]，血樣分別儲(chǔ)存于5種真空采血抗凝管中，即枸櫞酸鈉1∶9采血管(檸檬酸鈉1∶9)、EDTA-K2采血管、肝素鈉采血管、枸櫞酸鈉1∶4采血管(檸檬酸鈉1∶4)、氟化鈉- 草酸鉀采血管，立即測(cè)量各管的初始乙醇含量，選取其中乙醇濃度≥20 mg/100 mL且數(shù)值接近的血樣為研究樣本，每種管選取10份，共50份，然后在冰箱(4～8 ℃)中冷藏保存。5種抗凝管分別依次編為A、B、C、D、E，每種抗凝管各取10只，分別標(biāo)記為1～10號(hào)。在此基礎(chǔ)上，選擇血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性較好的3種采血管：枸櫞酸鈉1∶9采血管(檸檬酸鈉1∶9)、EDTA-K2采血管、肝素鈉采血管，編號(hào)依次為S、Z、R，并各選取10份乙醇濃度≥20 mg/100 mL且數(shù)值接近的血樣在-20 ℃下冰柜保存，每種管的10只管同樣分別標(biāo)記為1～10號(hào)。

1.2 儀器和色譜條件[8]

島津GC-2010 plus型氣相色譜儀、頂空自動(dòng)進(jìn)樣器(島津HS-20)。色譜條件：色譜柱1和2：均為Rtx-BAC1，30 m×0.32 mm毛細(xì)柱；柱溫為40 ℃，進(jìn)樣口溫度150 ℃；柱流量5 mL/min，吹掃流量3 mL/min；分流比6.4。檢測(cè)器FID1和FID2：溫度為250 ℃。頂空進(jìn)樣：恒溫爐溫度為65 ℃；樣品流路溫度為105 ℃；傳輸線(xiàn)溫度為110 ℃；樣品瓶恒溫時(shí)間為10 min；樣品瓶加壓時(shí)間為0.3 min；加壓平衡時(shí)間0.3 min；導(dǎo)入時(shí)間0.8 min；導(dǎo)入平衡時(shí)間0.4 min；進(jìn)樣時(shí)間為0.5 min；進(jìn)樣針沖洗時(shí)間0.4 min。

1.3 樣本的測(cè)定

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析。檢測(cè)水準(zhǔn)α≈0.05[9]。

2 結(jié)果

2.1 4～8 ℃冰箱冷藏下5種采血管中血液乙醇含量在各測(cè)試時(shí)間段的比較

2.1.1 5種采血管間血液乙醇含量比較

5種采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=392.811,P<0.01)。5種采血管中，A、B、C 3種采血管之間無(wú)顯著性差異(p>0.05)，D、E采血管與A、B、C 3種采血管之間有顯著性差異(p<0.05)。具體見(jiàn)表1，表2。

表1 5種采血管中血液乙醇濃度 mg/100 mL

2.1.2 5種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)趨勢(shì)

從趨勢(shì)圖1、圖2顯示；A、B、C即枸櫞酸鈉1∶9管(檸檬酸鈉1∶9)、EDTA-K2管、肝素鈉管這3種采血管的血液乙醇含量在0～14 d內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性比D、E即枸櫞酸鈉1∶4管(檸檬酸鈉1∶4)和氟化鈉- 草酸鉀管這2種采血管要好。但14 d后含量都顯著下降(P<0.05)，其中D管即枸櫞酸鈉1∶4采血管(檸檬酸鈉1∶4)7 d后顯著下降(P<0.05)，E試管即氟化鈉- 草酸鉀采血管3 d后顯著下降(P<0.05)，因此，D、E 2種管不宜作為血儲(chǔ)容器。

2.2 -20 ℃冰柜保存下3種采血管中血液乙醇含量在各測(cè)試時(shí)間段的比較

2.2.1 3種采血管間血液乙醇含量比較

3種采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=221.051，P<0.01)。S、R、Z這3種采血管之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)(見(jiàn)表3，表4)。

2.2.2 3種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)趨勢(shì)

從趨勢(shì)圖3可知，EDTA-K2采血管(Z)的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性比枸櫞酸鈉(1∶9)采血管(S)和肝素鈉采血管(R)均要好。

表2 5種采血管間血液乙醇含量比較

(注；4～8 ℃溫度冰箱冷藏保存下各管的標(biāo)記，A：檸檬酸鈉(1∶9)采血管、B：EDTA-K2采血管、C：肝素鈉采血管、D：檸檬酸鈉(1∶4)采血管、E：氟化鈉- 草酸鉀采血管)

圖1 5種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間變化趨勢(shì)圖

圖2 3種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間的變化趨勢(shì)圖

因此，綜合2.1和2.2結(jié)果顯示：雖然4～8 ℃冰箱冷藏下5種血儲(chǔ)容器中EDTA-K2采血管、枸櫞酸鈉1∶9采血管(檸檬酸鈉1∶9)、肝素鈉采血管在14 d內(nèi)血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性較好?？梢虮淙莘e本身的限制以及4～8 ℃冰箱冷藏下，隨時(shí)間的延長(zhǎng)各采血管中血液乙醇含量都會(huì)變化。實(shí)踐中血樣宜長(zhǎng)時(shí)間保存在-20 ℃冰柜中。再?gòu)?20 ℃溫度冰柜保存下EDTA-K2管、枸櫞酸鈉1∶9管(檸檬酸鈉1∶9)、肝素管3種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間的變化來(lái)看，EDTA-K2采血管血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性最好。因此本研究認(rèn)為EDTA-K2采血管為酒駕血液乙醇含量測(cè)試最佳的血儲(chǔ)容器。

表3 3種采血管中血液乙醇濃度 mg/100 mL

表4 3種采血管間血液乙醇含量比較

注：-20 ℃冰柜保存下各管的標(biāo)記；S：枸櫞酸鈉(1∶9)采血管、R：肝素采血管、Z：EDTA-K2采血管)

圖3 3種采血管血液乙醇含量隨時(shí)間變化趨勢(shì)圖(注t1-0d,t2-3d,t3-7d,t4-14d,t5-21d,t6-28d,t7-35d,t8-42d,t9-49d)

3 討論

酒后駕車(chē)可增加發(fā)生交通事故的比例[10]。血液乙醇含量的檢測(cè)結(jié)果是各國(guó)以法律判定酒后或醉酒駕駛行為的重要依據(jù)[11]。以往研究發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)方法、血儲(chǔ)容器等因素均有可能對(duì)血液乙醇檢測(cè)結(jié)果造成影響[12-15]。就檢測(cè)方法而言，隨著儀器分析的發(fā)展，氣相色譜法中頂空氣相色譜法因操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，定量結(jié)果更為準(zhǔn)確，被普遍使用。然而，血儲(chǔ)容器在相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有嚴(yán)格規(guī)定，國(guó)內(nèi)外資料中也少有涉及[3]，因而基層交管部門(mén)在使用采集容器時(shí)五花八門(mén)，勢(shì)必會(huì)影響血液乙醇含量的準(zhǔn)確測(cè)定，進(jìn)而影響司法公正評(píng)判。為避免血儲(chǔ)容器對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響，雖然以往研究中傾向于推薦使用真空采血抗凝管為血儲(chǔ)容器，但抗凝管中哪種為最佳并未涉及[6]。本研究通過(guò)對(duì)常見(jiàn)的5種真空采血抗凝管進(jìn)行篩選， 4～8 ℃溫度冰箱冷藏保存下EDTA-K2管、枸櫞酸鈉1∶9管(檸檬酸鈉1∶9)、肝素鈉管這3種采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性比枸櫞酸鈉1∶4 管(檸檬酸鈉1∶4)和氟化鈉(草酸鉀)管均要好。但14 d后血液乙醇含量都明顯下降，其中枸櫞酸鈉1∶4 管(檸檬酸鈉1∶4)7 d后顯著下降，氟化鈉(草酸鉀)管3 d后顯著下降，這兩種采血管因短時(shí)間內(nèi)會(huì)導(dǎo)致血液乙醇含量發(fā)生較大變化，血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性較差，均不宜作為血儲(chǔ)容器?？捎捎?～8 ℃冰箱冷藏只能短時(shí)間保存血樣，一方面是冰箱冷藏容積有限不能儲(chǔ)存更多血樣，另一方面該溫度下保存血樣，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)所有管中的血液乙醇濃度均會(huì)呈現(xiàn)明顯變化，因而在4～8 ℃冰箱冷藏室內(nèi)不宜長(zhǎng)時(shí)間保存血樣。據(jù)資料顯示，針對(duì)含有乙醇的血液樣品，保存以冰凍最好，冷藏次之[5]，鑒于此，本研究將4～8 ℃在冰箱冷藏室內(nèi)保存的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性較好的EDTA-K2管、枸櫞酸鈉1∶9管(檸檬酸鈉1∶9)、肝素鈉管這3種采血管于-20 ℃冰柜保存并測(cè)試，結(jié)果顯示：在-20 ℃冰柜保存條件下，這3種采血管都能較長(zhǎng)時(shí)間保持血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,其中枸櫞酸鈉(1∶9)采血管和肝素鈉采血管在42 d后結(jié)果有明顯變化，而EDTA-K2采血管在49 d后結(jié)果與初測(cè)含量幾乎不變。不過(guò)相比較而言,枸櫞酸鈉(1∶9)采血管和肝素鈉采血管的血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性均不如EDTA-K2采血管。由此可見(jiàn),血樣宜在-20 ℃冰柜中長(zhǎng)時(shí)間保存，同時(shí)可知不同抗凝劑對(duì)血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果有影響，以上5種真空采血抗凝管以EDTA-K2采血管做血儲(chǔ)容器最優(yōu)，其次為枸櫞酸鈉(1∶9)采血管和肝素鈉采血管，而枸櫞酸鈉1∶4采血管(檸檬酸鈉1∶4)和氟化鈉(草酸鉀)采血管不宜作為血儲(chǔ)容器。另外，有關(guān)檢測(cè)中血液乙醇含量變化，可能因保存過(guò)程中微生物分解、自身?yè)]發(fā)等而減少，或因血液腐敗導(dǎo)致自身產(chǎn)生乙醇成分而升高[16]。由于本研究采集的是鮮血，加之血儲(chǔ)容器處于真空密閉和低溫狀態(tài)，能有效防止外部微生物的進(jìn)入，從而被微生物污染造成乙醇含量增加的可能性小，同時(shí)有效防止乙醇因揮發(fā)造成乙醇含量降低的可能性。因此可不考慮血液腐敗、微生物分解和揮發(fā)產(chǎn)生的影響，至于檢測(cè)中血液乙醇濃度下降的原因雖有報(bào)道與稀釋比例等因素有關(guān)[17]，但下降機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，血儲(chǔ)容器對(duì)于血液樣本乙醇濃度檢測(cè)結(jié)果有影響，所研究的5種真空采血抗凝管中EDTA-K2采血管作為血儲(chǔ)容器時(shí)其血液乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性最好，因而本研究認(rèn)為EDTA-K2采血管為酒駕血液乙醇測(cè)試最佳的血儲(chǔ)容器。建議交警部門(mén)在按照規(guī)定抽取涉嫌酒駕人員血樣后保存于EDTA-K2采血管中送檢，確保血液乙醇測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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(責(zé)任編輯于瑞華)

D918.93

貴州省道路交通事故鑒定工程技術(shù)研究中心研究項(xiàng)目([2015]10022)。

涂國(guó)章(1970—)，男，貴州德江人，副教授。研究方向?yàn)槲⒘课镒C、毒物毒品的分析與研究。