申識(shí)川++宋果++王冠杰

摘要：副豬嗜血桿菌（HPS）主要危害保育豬群，引發(fā)以腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性漿膜炎等為主要特征的傳染病，豬群一旦發(fā)病，病死率較高，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。從疑似發(fā)生副豬嗜血桿菌病的河南濮陽(yáng)某豬場(chǎng)無(wú)菌采集病料，并進(jìn)行觸片鏡檢、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)。結(jié)果成功分離到了副豬嗜血桿菌，藥敏試驗(yàn)顯示，分離菌株對(duì)氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、頭孢噻肟高敏，對(duì)紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素低敏。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行治療，取得了良好的治療效果。

關(guān)鍵詞：豬；副豬嗜血桿菌；分離培養(yǎng)；藥敏試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2017）010-0013-02

副豬嗜血桿菌（HPS）是一種多形態(tài)、非溶血性、不運(yùn)動(dòng)、NAD依賴(lài)型、革蘭氏陰性細(xì)小桿菌，屬于巴斯德桿菌科嗜血桿菌屬。副豬嗜血桿菌只感染豬，有很強(qiáng)的宿主特異性，可以影響2周齡到4月齡的青年豬，主要在斷奶后保育舍階段發(fā)病，感染高峰通常見(jiàn)于保育期的4～6周，發(fā)病率一般在10%～15%，嚴(yán)重時(shí)病死率可達(dá) 50%[1]。該菌在特定的條件下，可以侵入豬機(jī)體，引發(fā)一種以腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性漿膜炎等為主要特征的傳染病，又稱(chēng)為豬革拉斯氏病（Glasser′s disease）[2]，主要臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行和被毛粗亂；主要剖檢病變表現(xiàn)為纖維素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等[3]。目前，根據(jù)免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，確定該菌有15個(gè)血清型，全國(guó)各地流行的血清型不完全相同。由于副豬嗜血桿菌血清型多、產(chǎn)生耐藥性快，致使臨床疫苗免疫和用藥效果不理想，給該病的預(yù)防和治療帶來(lái)很大的困難[4]。相對(duì)于傳統(tǒng)用藥，分離鑒定該菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)分析是比較有效的治療方法。

2016年4月11日，濮陽(yáng)地區(qū)某中小規(guī)模豬場(chǎng)出現(xiàn)25頭47日齡的豬發(fā)病，根據(jù)患病豬流行病學(xué)調(diào)查情況、臨床癥狀和剖檢變化，疑似副豬嗜血桿菌病。通過(guò)無(wú)菌采集病豬典型病變組織進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、鏡檢和生化鑒定等實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，最終確認(rèn)分離到的細(xì)菌為副豬嗜血桿菌，確診該豬場(chǎng)所患豬病為副豬嗜血桿菌病。對(duì)分離到的細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了治療，取得了良好的治療效果，現(xiàn)將其報(bào)告如下。

1 材料

1.1 病料

在無(wú)菌操作條件下取疑似病豬的肺臟、胸膜、胸腹腔積水、心包積液、心血、關(guān)節(jié)液。

1.2 培養(yǎng)基

胰蛋白大豆瓊脂（TSA）、胰蛋白大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基購(gòu)自英國(guó)OXOID公司。

1.3 試劑

新生牛血清、輔酶I（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD+）購(gòu)自長(zhǎng)沙虹宇生物科技有限公司。

1.4 細(xì)菌染色液

革蘭氏染色液購(gòu)自北京陸橋生物技術(shù)有限公司。

1.5 生化試驗(yàn)試劑

氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯膠糖等均購(gòu)自長(zhǎng)沙金標(biāo)生物有限公司。

1.6 藥敏紙片

氟苯尼考、泰妙菌素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素、頭孢噻肟、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素均購(gòu)自長(zhǎng)沙虹宇生物科技有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 病理變化

剖檢病死豬，發(fā)現(xiàn)胸腔內(nèi)有大量淡紅色液體、纖維素性滲出物。肺臟呈纖維素性胸膜肺炎， 肺腫大呈暗紫紅色，表面覆有纖維素性滲出物。支氣管內(nèi)有淡紅色泡沫樣滲出物。心包積液。腹腔內(nèi)有大量透明黃褐色滲出液， 有的呈膠胨狀凝塊。全身淋巴結(jié)腫大，暗紅色。關(guān)節(jié)腫大，有漿液纖維素性化膿性炎癥。

2.2 觸片鏡檢

取發(fā)病豬的肺組織、心血、胸水和腹膜面涂片，革蘭氏染色，鏡檢可見(jiàn)革蘭氏陰性的細(xì)小桿菌，個(gè)別兩極球桿狀革蘭氏陰性菌。

2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌取發(fā)病豬的肺臟、腹膜、胸水和心血?jiǎng)澗€(xiàn)接種于含NAD+和5%小牛血清的TSA平板，置37 ℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48 h[5]，出現(xiàn)無(wú)色、透明、濕潤(rùn)、光滑、邊緣整齊的針頭大小菌落，鏡檢可見(jiàn)大小不一、形態(tài)細(xì)長(zhǎng)、絲狀的革蘭氏陰性桿菌。接種無(wú)NAD的TSA平板上不生長(zhǎng)。而后挑取單個(gè)菌落，接種到含有NAD+的TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng)。

2.4 生化試驗(yàn)

挑取純化菌落接種于氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯膠糖等生化鑒定管中，同時(shí)加入0.01%的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）5 μL，置于37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，觀(guān)察結(jié)果見(jiàn)表1。生化試驗(yàn)結(jié)果表明，疑似純培養(yǎng)菌符合副豬嗜血桿菌的生化特性。

2.5 藥敏試驗(yàn)

將細(xì)菌TSB純培養(yǎng)物吸取200 μL均勻涂布于TSA平板上，采用紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，置37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，測(cè)量抑菌環(huán)直徑并判定結(jié)果。結(jié)果表明該菌對(duì)氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、頭孢噻肟高敏，對(duì)紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素低敏。

3 防治

加強(qiáng)日常管理，將發(fā)病豬與健康豬隔離飼養(yǎng)；對(duì)發(fā)病豬舍進(jìn)行全面消毒，每天早晚各一次，連續(xù)5 d；在飲水中添加電解多維減少豬群應(yīng)激；根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)發(fā)病豬只用氟苯尼考注射液肌注2 mg/kg，1次/d，連續(xù)注射5 d。

4 小結(jié)與討論

根據(jù)發(fā)病豬只的流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化，初步懷疑該病是由副豬嗜血桿菌引起的。通過(guò)對(duì)采集病料進(jìn)行顯微鏡鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果顯示，分離到的細(xì)菌與副豬嗜血桿菌的生理生化特性相符合，最終判定分離到的細(xì)菌為副豬嗜血桿菌，即確定該場(chǎng)豬群所發(fā)病為副豬嗜血桿菌病。

隨著規(guī)?；?、集約化養(yǎng)豬的發(fā)展，副豬嗜血桿菌病在我國(guó)各大豬場(chǎng)的帶菌率、發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[6]。在實(shí)際生產(chǎn)中常用大量抗菌藥來(lái)治療細(xì)菌性疾病，誤用、濫用抗菌藥對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生較強(qiáng)的藥物選擇壓力，從而使得細(xì)菌耐藥情況愈加突出[5]。因此，建議在實(shí)際生產(chǎn)中，采用細(xì)菌體外分離培養(yǎng)與鑒定確診病原后，結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果有針對(duì)性地用藥，可以取得較好的治療效果，同時(shí)要避免長(zhǎng)期使用一種抗菌藥物。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].第五版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[2] 蔡旭旺.副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

[3] [美]斯特勞.豬病學(xué)[M].第八版.趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003.

[4] 高 豐，羅 毅，成 軍，等.副豬嗜血桿菌感染的診斷與防治[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，23（6）：101-103.

[5] 張 悅，李蓓蓓，魏建超，等.上海副豬嗜血桿菌分離鑒定及其耐藥性分析[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2015，23（4）：25-30.

[6] 李志勇.海南省規(guī)?；i場(chǎng)副豬嗜血桿菌病的分子流行病學(xué)調(diào)查和綜合防治措施[D].南寧：廣西大學(xué)，2010.endprint