陳 潔，劉一然

(1. 武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430074；2. 湖北省中醫(yī)院針灸科，湖北 武漢 430061)

姜黃素通過減少CREB轉(zhuǎn)錄活性抑制前脂肪細(xì)胞分化

陳 潔1，劉一然2

(1. 武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430074；2. 湖北省中醫(yī)院針灸科，湖北 武漢 430061)

目的探討姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制。方法選取3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，姜黃素(10、20、40 μmol·L-1)處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞并同步誘導(dǎo)細(xì)胞分化，采用MTT法檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖情況，油紅O染色方法檢測(cè)胞質(zhì)脂質(zhì)堆積情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及蛋白印跡法檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)、過氧化物體增殖劑活化受體γ(PPARγ)的mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果MTT結(jié)果顯示，姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)一定劑量、時(shí)間依賴性；油紅O染色顯示，姜黃素可抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，且呈現(xiàn)一定劑量依賴性；0、20、40 μmol·L-1姜黃素處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞，p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA水平及蛋白水平隨姜黃素劑量升高均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)(P<0.05)。結(jié)論姜黃素可有效抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化，其機(jī)制可能為姜黃素抑制CREB轉(zhuǎn)錄活性，從而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表達(dá)。

姜黃素；環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白；前脂肪細(xì)胞；細(xì)胞分化；CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β；CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α；過氧化物體增殖劑活化受體γ糖尿病是由于胰島素作用障礙或者分泌缺陷所致的，臨床以高血糖為特征的一種代謝性疾病[1]。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)[2]，世界范圍內(nèi)糖尿病發(fā)病率呈現(xiàn)明顯逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類身體健康及生命安全。目前，西醫(yī)對(duì)于糖尿病發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，臨床上仍缺乏特效的治療藥物。中藥因其安全性高，治療多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點(diǎn)成為了目前治療糖尿病研究的重要熱點(diǎn)[3]。研究表明[4]，姜黃素對(duì)于糖尿病具有良好的防治作用，但其具體作用機(jī)制尚未完全清楚。眾所周知，脂肪細(xì)胞過度增生會(huì)導(dǎo)致肥胖發(fā)生，增加糖尿病發(fā)生率，脂肪細(xì)胞分化不良同樣會(huì)導(dǎo)致機(jī)體能量代謝障礙，導(dǎo)致糖尿病發(fā)生，由此可見，脂肪細(xì)胞分化與糖尿病的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。本研究旨在探討姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制，試圖為姜黃素應(yīng)用于臨床治療糖尿病提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞系 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞株，購(gòu)自美國(guó)ATCC公司。

1.1.2試劑與儀器 新生小牛血清、DMEM培養(yǎng)基，購(gòu)自杭州四季青生物公司；姜黃素(純度為99%)、二甲基亞砜(DMSO)、MTT試劑盒、油紅O染料，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；TRIzol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、dNTPs、Taq DNA聚合酶，均購(gòu)自大連寶生物有限公司；SYBR PrimeScript RT-PCR Kit，購(gòu)自日本TaKaRa公司；PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成；CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta, C/EBPβ)抗體、抗磷酸環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(p-cAMP-response element binding protein, p-CREB)抗體、抗過氧化物體增殖活化受體γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)抗體，購(gòu)自瑞士Adipogen公司。CO2培養(yǎng)箱，購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；移液器、低溫離心機(jī)，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；光學(xué)顯微鏡，購(gòu)自日本Olympus公司；電泳槽、電泳儀、化學(xué)發(fā)光熒光成像系統(tǒng)，購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2方法

1.2.13T3-L1前脂肪細(xì)胞培養(yǎng) 將3T3-L1前脂肪細(xì)胞接種于高糖DMEM培養(yǎng)基中(含10%小牛血清、100 kU·L-1青霉素、100 mg·L-1鏈霉素)，5% CO2培養(yǎng)箱37℃中恒溫培養(yǎng)，每隔24～48 h更換培養(yǎng)液，待細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.23T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及處理 觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板上，培養(yǎng)2 d，待3T3-L1前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后，將3T3-L1前脂肪細(xì)胞分為4組，分別給予0、10、20、40 μmol·L-1濃度姜黃素處理細(xì)胞，每組分別添加含有0.5 mmol·L-1異丁基-3-甲基黃嘌呤、10 mg·L-1胰島素、10%小牛血清、0.25 μmol·L-1地塞米松的高糖DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化。培養(yǎng)48 h后更換培養(yǎng)基，換成含10 mg·L-1胰島素、10%小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化，再培養(yǎng)48 h后更換培養(yǎng)基，換成含10%小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2 d更換1次上述培養(yǎng)液，誘導(dǎo)分化8～12 d，全程同步加藥和分化液，且同步更換培養(yǎng)液與藥物，待3T3-L1前脂肪細(xì)胞約85%以上呈脂肪細(xì)胞表型時(shí)，留待備用，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.3MTT實(shí)驗(yàn) 采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖情況，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行。細(xì)胞增殖抑制率/%=(1-處理組吸光度/對(duì)照組吸光度)×100%。

1.2.4油紅O染色實(shí)驗(yàn) 收集各組細(xì)胞，加入100 μL 10%的甲醛溶液固定5 min，采用油紅O染色方法室溫染色2 h，隨后選用異丙醇處理細(xì)胞后，在波長(zhǎng)570 nm處檢測(cè)細(xì)胞分化OD值，檢測(cè)脂肪細(xì)胞胞質(zhì)脂質(zhì)堆積情況。

1.2.5實(shí)時(shí)熒光定量PCR TRIzol法提取3T3-L1脂肪細(xì)胞中總RNA，電泳及紫外分光光度計(jì)檢測(cè)所提RNA完整無降解，A260/A280值為1.8～2.0。利用SYBR PrimeScript RT-PCR Kit試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA水平，反應(yīng)總體積10 μL ：cDNA 1 μL，SYBR Primix Ex Taq TM 5 μL，引物0.4 μL，RNase H2O 3.2 μL。qRT-PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5 min，95℃ 15 s，60℃ 20 s，72℃ 30 s進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，每個(gè)樣品均設(shè)置3個(gè)平行孔，結(jié)果采用2-ΔΔCT方法處理，其中ΔΔCT=(CT目的基因-CTβ-actin)觀察組-(CT目的基因-CTβ-actin)對(duì)照組。引物序列見Tab 1。

Tab 1 Sequence of qRT-PCR amplified primers

1.2.6Western blot 提取3T3-L1脂肪細(xì)胞總蛋白并進(jìn)行蛋白定量，以β-actin作為內(nèi)參基因，采用Western blot法檢測(cè)p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ蛋白水平，具體操作嚴(yán)格參照試劑盒使用說明進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響MTT結(jié)果顯示，姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)一定劑量、時(shí)間依賴性(Tab 2)。

Tab 2 Effect of curcumin on proliferation of 3T3-L1 preadipocytes

*P<0.05vs0 μmol·L-1;#P<0.05vs10 μmol·L-1;△P<0.05vs20 μmol·L-1

2.2姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響Fig 1油紅O染色結(jié)果顯示，0 μmol·L-1姜黃素組細(xì)胞分化OD值為(0.627±0.051)，明顯高于10 μmol·L-1姜黃素組細(xì)胞分化OD值(0.506±0.048)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；10 μmol·L-1姜黃素組細(xì)胞分化OD值明顯高于20 μmol·L-1

Fig 1 Effect of different concentrations of curcumin onadipocyte differentiation in diabetic rats

*P<0.05vs0 μmol·L-1curcumin;#P<0.05vs10 μmol·L-1curcumin;△P<0.05vs20 μmol·L-1curcumin

姜黃素組細(xì)胞分化OD值(0.314±0.037) (P<0.05)；20 μmol·L-1姜黃素組細(xì)胞分化OD值明顯高于40 μmol·L-1姜黃素組細(xì)胞分化OD值(0.136±0.031) (P<0.05)。即姜黃素可抑制糖尿病大鼠脂肪細(xì)胞脂質(zhì)積聚，抑制脂肪細(xì)胞分化，且呈現(xiàn)一定劑量依賴性。

2.3姜黃素對(duì)CREB活化及C/EBPβ表達(dá)的影響如Fig 2所示，0、10、20、40 μmol·L-1姜黃素處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞，p-CREB、C/EBPβ mRNA及蛋白水平隨姜黃素劑量升高均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)(P<0.05)。

Fig 2 Effect of different concentrations of curcumin on CREBactivation and C/EBPβ mRNA(A) and protein(B) expression

1: 0 μmol·L-1curcumin; 2: 10 μmol·L-1curcumin; 3: 20 μmol·L-1curcumin; 4: 40 μmol·L-1curcumin.*P<0.05vs0 μmol·L-1curcumin;#P<0.05vs10 μmol·L-1curcumin;△P<0.05vs20 μmol·L-1curcumin

2.4姜黃素對(duì)C/EBPα、PPARγ表達(dá)的影響如Fig 3所示，0、10、20、40 μmol·L-1姜黃素處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞，C/EBPα、PPARγ mRNA及蛋白水平隨姜黃素劑量升高均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)(P<0.05)。

Fig 3 Effect of curcumin on C/EBPα andPPARγ mRNA(A) and protein(B) expression

1: 0 μmol·L-1curcumin; 2: 10 μmol·L-1curcumin; 3: 20 μmol·L-1curcumin; 4: 40 μmol·L-1curcumin.*P<0.05vs0 μmol·L-1curcumin;#P<0.05vs10 μmol·L-1curcumin;△P<0.05vs20 μmol·L-1curcumin

3 討論

目前，我國(guó)糖尿病發(fā)病年齡日漸低齡化，發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，糖尿病已成為中國(guó)乃至世界范圍內(nèi)公共衛(wèi)生重大問題之一[5]。臨床上用于糖尿病治療的西藥雖多，但大多不能根治，且長(zhǎng)期服用西藥所造成的的毒副作用不可忽視，中藥因其安全性高，治療多層次、多靶點(diǎn)成為了目前糖尿病治療研究的重要熱點(diǎn)[6]。姜黃素是來源于姜黃的干燥根莖，因其具有抗炎、抗腫瘤、降血脂、防治糖尿病、抗氧化等多種藥理作用，在臨床廣泛應(yīng)用[7-8]。研究表明[9-10]，姜黃素可通過抗氧化作用，降低糖尿病大鼠模型血糖水平。姜黃素還可通過作用于脂肪及肝臟內(nèi)調(diào)節(jié)糖脂代謝酶，來改善肥胖糖尿病模型機(jī)體胰島素抵抗，增加葡萄糖穩(wěn)態(tài)。脂肪細(xì)胞過度增生會(huì)導(dǎo)致肥胖發(fā)生，增加糖尿病發(fā)生率，脂肪細(xì)胞分化不良同樣會(huì)導(dǎo)致機(jī)體能量代謝障礙，導(dǎo)致糖尿病發(fā)生，脂肪細(xì)胞分化與糖尿病的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。本研究旨在探討姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制，試圖為姜黃素應(yīng)用于臨床治療糖尿病提供一定理論依據(jù)。

脂肪組織是機(jī)體的一個(gè)巨大內(nèi)分泌系統(tǒng)，分泌多種活性因子，在機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中扮演重要角色。機(jī)體脂肪細(xì)胞分化異?？蓪?dǎo)致脂肪堆積過多，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪細(xì)胞內(nèi)分泌功能失調(diào)，從而引發(fā)糖尿病的發(fā)生[11]。因此，研究藥物對(duì)于機(jī)體脂肪細(xì)胞分化的作用，對(duì)于早期防止肥胖、糖尿病、血脂紊亂、高血壓等疾病發(fā)生及治療具有十分重要的意義。脂肪細(xì)胞分化是由分化轉(zhuǎn)錄因子激活調(diào)控的一個(gè)復(fù)雜過程[12]。cAMP/PKA信號(hào)通路在脂肪細(xì)胞分化早期程序中起關(guān)鍵性作用，cAMP/PKA信號(hào)通路通過激活CREB磷酸化，發(fā)揮調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化等重要生理學(xué)過程[13]。CREB是cAMP反應(yīng)性元件結(jié)合蛋白，是一種真核生物細(xì)胞核內(nèi)重要的調(diào)控因子，在調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞發(fā)育及生存、生理節(jié)奏等方面具有重要調(diào)控作用[14]。CREB磷酸化是其實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄作用的重要途徑。磷酸化的CREB在脂肪分化過程中可誘導(dǎo)C/EBPβ表達(dá)，觸發(fā)級(jí)聯(lián)轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，從而促進(jìn)C/EBPα、PPARγ等重要轉(zhuǎn)錄因子的激活[15]。PPARγ是激素核受體超家族成員中最具有脂肪組織特異性的轉(zhuǎn)錄因子，在脂肪細(xì)胞分化過程中扮演著十分重要的角色[16]。C/EBPα是C/EBP家族中對(duì)脂肪細(xì)胞分化最具影響的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)于促進(jìn)PPARγ的高表達(dá)，保持分化細(xì)胞的表型有著極為重要的作用[17]。眾所周知，C/EBPα、PPARγ在其啟動(dòng)子近端具有C/EBP順式調(diào)控元件，其中C/EBPβ是結(jié)合并協(xié)調(diào)激活轉(zhuǎn)錄的重要因子。目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)姜黃素對(duì)于3T3-L1前脂肪細(xì)胞CREB轉(zhuǎn)錄活性研究尚未見報(bào)道，大多研究?jī)H停留于姜黃素對(duì)于3T3-L1前脂肪細(xì)胞脂肪內(nèi)脂素、脂聯(lián)素等基因影響研究[18]，對(duì)于姜黃素影響3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化具體作用機(jī)制研究?jī)?nèi)容單一，且不夠深入。本研究以cAMP/PKA信號(hào)通路為研究出發(fā)點(diǎn)，探討姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響機(jī)制，目前國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。

本研究結(jié)果表明，姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)一定劑量、時(shí)間依賴性，油紅O染色結(jié)果顯示，姜黃素可抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，且呈現(xiàn)一定劑量依賴性。脂肪細(xì)胞增殖、分化在糖尿病發(fā)病機(jī)制中具有十分重要的作用，姜黃素對(duì)于3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化均具有明顯抑制作用，推測(cè)姜黃素之所以發(fā)揮防治糖尿病的作用機(jī)制，可能是通過抑制了脂肪細(xì)胞的增殖、分化來實(shí)現(xiàn)的。隨后，本研究提取3T3-L1前脂肪細(xì)胞RNA及蛋白，探討姜黃素對(duì)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表達(dá)的影響。結(jié)果可見，不同濃度姜黃素處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞，p-CREB、C/EBPβ mRNA及蛋白水平明顯下調(diào)，且隨姜黃素劑量升高均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。CREB對(duì)于啟動(dòng)脂肪細(xì)胞分化過程至關(guān)重要，C/EBPβ是CREB調(diào)控的重要靶基因之一，是脂肪細(xì)胞分化的早期調(diào)節(jié)劑。C/EBPβ基因近端具有雙順式調(diào)節(jié)元件，二者均具有CREB核心結(jié)合位點(diǎn)。磷酸化CREB可與C/EBPβ啟動(dòng)子結(jié)合，觸發(fā)一系列級(jí)聯(lián)轉(zhuǎn)錄事件，促進(jìn)C/EBPα、PPARγ基因激活。后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，姜黃素還可明顯下調(diào)C/EBPα、PPARγ mRNA及蛋白表達(dá)，且隨姜黃素劑量升高均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。因此，本研究推測(cè)姜黃素可能通過抑制CREB活性，導(dǎo)致C/EBPβ引發(fā)的轉(zhuǎn)錄級(jí)聯(lián)降低，C/EBPα和PPARγ成脂基因表達(dá)降低，發(fā)揮抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的作用。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，姜黃素可有效抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化，其機(jī)制可能與姜黃素抑制CREB轉(zhuǎn)錄活性，從而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表達(dá)有關(guān)。姜黃素抑制p-CREB與C/EBPβ結(jié)合的具體機(jī)制，有待進(jìn)一步深入研究。

(致謝：本研究所有實(shí)驗(yàn)均在武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室及湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝實(shí)驗(yàn)室全體老師的支持及同事們無私的幫助。)

[1] 紀(jì)立農(nóng), 陳莉明, 郭曉蕙,等. 中國(guó)慢性疾病防治基層醫(yī)生診療手冊(cè)(糖尿病分冊(cè))2015年版[J]. 中國(guó)糖尿病雜志, 2015,23(8):673-701.

[1] Ji L N, Chen L M, Guo X H, et al. China handbook for diagnosis and treatment of chronic disease prevention physicians (diabetes section) 2015 edition[J].ChinJDiabetes,2015,23(8):673-701.

[2] 廖 涌. 中國(guó)糖尿病的流行病學(xué)現(xiàn)狀及展望[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2015,40(7):1042-5.

[2] Liao Y. Epidemiological status and prospect of diabetes in China[J].JChongqingMedUniv,2015,40(7):1042-5.

[3] 董世芬, 洪 纓, 汪瑞祺,等. 小檗堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病心肌病大鼠模型心臟保護(hù)作用研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2013,29(9):1216-21.

[3] Dong S F, Hong Y, Wang R Q, et al.Cardioprotective effects of berberine on experimental type 2 diabetic cardiomyopathy in rats[J].ChinPharmacolBull,2013,29(9):1216-21.

[4] 藍(lán)宇濤, 曠焱平, 陳 墾. 姜黃素抗糖尿病血管內(nèi)皮氧化損傷的研究進(jìn)展[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào), 2015,31(4):551-3.

[4] Lan Y T, Kuang D P, Chen K. Progress of curcumin on attenuating oxidative damages of vascular endothelia in diabetes[J].JGuangdongPharmUniv,2015,31(4):551-3.

[5] Zimmet P Z, Alberti K G. Epidemiology of diabetes-status of a pandemic and issues around metabolic surgery[J].DiabetesCare,2016,39(6):878-83.

[6] 吳亞楠, 梁曉春. 中藥對(duì)糖尿病免疫功能紊亂的干預(yù)作用[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2015,10(9):1322-5.

[6] Wu Y N, Liang X C. Intervention effect of Chinese herbal medicine on diabetic immune dysfunction[J].WorldJIntegrTraditWestMed,2015,10(9):1322-5.

[7] 王菊香, 朱新波. 姜黃素對(duì)缺血缺氧性腦損傷新生鼠腦組織SOD和MDA含量的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2013,29(9):1327-8.

[7] Wang J X, Zhu X B. Effects of curcumin on contents of SOD and MDA in brain of neonatal rats with hypoxic-ischemic encephalopathy [J].ChinPharmacolBull,2013,29(9):1327-8.

[8] 朱道琦. 姜黃素抗腫瘤及放射增敏作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2015,31(b11):244-5.

[8] Zhu D Q. Research progress of anti-tumor and radiosensitization of curcumin and its mechanism[J].ChinPharmacolBull,2015,31(b11):244-5.

[9] 付海爾, 李建民, 劉玉紅. 姜黃素對(duì)STZ誘導(dǎo)C57BL/6小鼠血糖、血脂影響[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2016,18(5):56-8.

[9] Fu H E, Li J M, Liu Y H. Effects of curcumin on blood glucose and blood lipids in C57BL/6 mice induced by STZ[J].JLiaoningUnivTraditChinMed,2016,18(5):56-8.

[10] Nabavi S F, Thiagarajan R, Rastrelli L, et al. Curcumin: a natural product for diabetes and its complications[J].CurrTopMedChem,2015,15(23):2445-9.

[11] 施亞雄. 脂肪組織的多面性：糖尿病及其他疾病的治療靶點(diǎn)[J]. 中華糖尿病雜志, 2015,7(8):470-3.

[11] Shi Y X. The multifaceted nature of adipose tissue: targets for the treatment of diabetes and other diseases[J].ChinJDiabetes,2015,7(8):470-3.

[12] 裴 舟, 羅飛宏. 脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控通路研究[J]. 國(guó)際內(nèi)分泌代謝雜志, 2011,31(1):25-7.

[12] Pei Z, Luo F H. Research on regulating pathways of adipocyte differentiation[J].IntJEndocrinolMetab,2011,31(1):25-7.

[13] Zhang J W, Klemm D J, Vinson C, et al. Role of CREB in transcriptional regulation of CCAAT/enhancer-binding protein beta gene during adipogenesis.[J].JBiolChem,2004,279(6):4471-8.

[14] 張 澄, 王 萍. 轉(zhuǎn)錄因子CREB對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào), 2011,33(5):577-83.

[14] Zhang C, Wang P. Research progress on regulation mechanism of transcription factor CREB on cell cycle[J].ChinJCellBiol,2011,33(5):577-83.

[15] Reusch J E, Colton L A, Klemm D J. CREB activation induces adipogenesis in 3T3-L1 cells[J].MolCellBiol,2000,20(3):1008-20.

[16] 蔣金航, 馬 云, 王新莊. PPARγ基因調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)畜牧雜志, 2014,50(9):91-5.

[16] Jiang J H, Ma Y, Wang X Z. Recent advance in regulation of adipogenesis by PPARγ gene[J].ChinJAnimSci,2014,50(9):91-5.

[17] Bauer R C, Sasaki M, Cohen D M, et al. Tribbles-1 regulates hepatic lipogenesis through posttranscriptional regulation of C/EBPα[J].JClinInvest,2015,125(10):3809-18.

[18] 秦培潔, 張東偉, 莫芳芳,等. 姜黃素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響及機(jī)制研究[J]. 山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2014,38(3):154-7.

[18] Qin P J, Zhang D W, Mo F F, et al. Effect and mechanism of curcumin on proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes[J].JShandongUnivTraditChinMed,2014,38(3):154-7.

CurcumininhibitspreadipocytedifferentiationbyreducingCREBtranscriptionalactivity

CHEN Jie1, LIU Yi-ran2

(1.SchoolofBiologicalEngineering,WuhanPolytechnic,Wuhan430074,China; 2.DeptofAcupuncture,HospitalofTraditionalChineseMedicineinHubei,Wuhan430061,China)

AimTo investigate the effect of curcumin on differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and its mechanism.Methods3T3-L1 preadipocytes were treated with curcumin at different concentrations(10, 20, 40 μmol·L-1) and cell differentiation was synergistically induced. The proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was detected by MTT assay. The lipid accumulation was detected by oil red O staining method, and the levels of CREB, C/EBPβ, C/EBPα, PPARγ mRNA and protein in 3T3-L1 preadipocytes were detected by qRT-PCR and Western blot.ResultsMTT results showed that curcumin had a significant inhibitory effect on proliferation of 3T3-L1 preadipocytes in a dose- and time-dependent manner. Oil red O staining showed that curcumin inhibited the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes in a dose-dependent manner. When 0, 20, 40 μmol·L-1curcumin treatment of 3T3-L1 preadipocytes were performed, the levels of p-CREB, C/EBPβ, C/EBPα, PPARγ mRNA and protein significantly decreased with the increasing dose of curcumin (P<0.05).ConclusionsCurcumin can effectively inhibit the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes. The mechanism may be that curcumin inhibits CREB transcriptional activity and inhibits the expression of C/EBPβ, C/EBPα and PPARγ.

curcumin; cAMP-response element binding protein; preadipocytes; cell differentiation; CCAAT/enhancer binding protein β; CCAAT/enhancer binding protein α; peroxisome proliferator activated receptor γ

A

1001-1978(2017)11-1564-06

R-332；R282.71；R329.24；R392.11；R587.1；R977.6

時(shí)間：2017-10-10 10:05 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20171010.1005.034.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.11.017

2017-06-24,

2017-07-27

湖北省教育廳科研計(jì)劃指導(dǎo)性項(xiàng)目(No B2015423)

陳 潔(1980-)，女，碩士，副教授，研究方向：生化藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：3069391330@qq.com