任慶平， 吳世政

高原地區(qū)藏族ACE基因I/D多態(tài)性與腦出血的關(guān)系研究

任慶平， 吳世政

目的探討血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多態(tài)性與高原地區(qū)世居藏族腦出血的相關(guān)性。方法收集青海地區(qū)高原世居藏族腦出血患者52例(男27例，女25例)為病例組，與之年齡、性別、居住地相匹配的同期體檢的世居健康藏族51例(男28例，女23例)為對(duì)照組，收集一般資料。利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)所有樣本的ACE基因I/D多態(tài)性。結(jié)果病例組ACE基因型：DD型9例(17.31%)，II型21例(40.38%)，ID型22例(42.31%)；等位基因頻率：D等位基因38.46%，I等位基因61.54%；對(duì)照組ACE基因型：DD型10例(19.61%)，II型19例(37.26%)，ID型22例(43.13%)；等位基因頻率：D等位基因41.18%，I等位基因58.82%。兩組間基因型、等位基因比較無顯著性差異(基因型χ2為0.14，等位基因χ2為0.16，P>0.05)。結(jié)論ACE基因I/D多態(tài)性與青海高原地區(qū)藏族腦出血無相關(guān)性，ACE基因I/D多態(tài)性可能不是高原世居藏族人群腦出血的遺傳易感因素。

高原； 藏族； 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶； 基因多態(tài)性； 腦出血

腦出血是由于環(huán)境因素與遺傳因素相互作用、影響而引起的復(fù)雜疾病，近年來，遺傳因素受到越來越多的關(guān)注，其中，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin angiotensin system,RAS)中的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyeme,ACE)基因與腦出血的相關(guān)性，成為研究熱點(diǎn)之一。有研究認(rèn)為[1，2]，ACE基因的D等位基因和DD基因型可增加急性腦血管病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，DD基因型是自發(fā)性腦出血獨(dú)立的發(fā)病危險(xiǎn)因素，也有研究認(rèn)為，腦卒中的發(fā)病與ACE基因多態(tài)性無相關(guān)性[3]。然而不同種族、同種族內(nèi)人群所具有的遺傳標(biāo)記的差異性對(duì)腦出血發(fā)病的影響可能不同[4]，國(guó)內(nèi)的研究多數(shù)以漢族人群為研究對(duì)象，目前對(duì)我國(guó)高原地區(qū)藏族人群相關(guān)的研究鮮有報(bào)道。

本研究對(duì)青海省高海拔地區(qū)世居藏族腦出血患者ACE基因I/D多態(tài)性進(jìn)行分析，探討ACE基因多態(tài)性與高原地區(qū)藏族腦出血的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 均為高原同一地區(qū)世居藏族。

1.1.1 病例組 收集青海省玉樹地區(qū)(平均海拔3800米)世居藏族腦出血患者52例為病例組(男27例，女25例)，平均年齡(58.6±7.6)歲。腦出血診斷根據(jù)2014版中國(guó)腦出血診治指南[5]，嚴(yán)格的神經(jīng)系統(tǒng)檢查，頭部CT或MRI檢查共同確診。排除繼發(fā)性腦出血(蛛網(wǎng)膜下腔出血、梗死后、腦血管畸形、外傷性、腫瘤性、血液病、藥物性等所致腦出血)，并排除心血管疾病、肝腎呼吸系統(tǒng)疾病。近1 m未接受過ACE抑制劑治療。

1.1.2 對(duì)照組 在同一醫(yī)院同期健康體檢的與病例組年齡相差不超過±5 歲，性別、居住地相匹配的世居藏族51例為對(duì)照組(男28例，女23例)，平均年齡(57.2±7.9)歲。排除各類心血管疾病、肝腎呼吸系統(tǒng)疾病，無血液病、腫瘤，既往無神經(jīng)系統(tǒng)及腦血管疾病史，頭部影像學(xué)檢查均正常。近1 m未接受過ACE抑制劑治療。

所有受試者間無血緣關(guān)系，家族婚姻史世代均無族外通婚。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書，并抽取外周靜脈血液5 ml。

1.2 方法 本研究所用試劑購買自德國(guó)Qiagen公司，ACE引物設(shè)計(jì)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，由上海生工生物公司合成，序列為：5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’；5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。嚴(yán)格按照試劑盒要求提取外周血白細(xì)胞DNA；采用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增DNA，擴(kuò)增體系為：反應(yīng)體系總體積50 μl，含反應(yīng)液25 μl，上下游引物各0.5 μl，模板DNA2 μl，滅菌水加至總體積50 μl。反應(yīng)條件為：先預(yù)變性95 ℃ 3 min，然后以下30次循環(huán)：95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃復(fù)性1 min；最后72 ℃延伸15 min。將PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖膠行電泳，將電泳后的瓊脂糖凝膠片放入凝膠成像分析系統(tǒng)，可有3種條帶，即ACE基因型，僅有490 bp條帶的為II基因型，190 bp條帶的為DD基因型，480 bp、190 bp兩種條帶都有為ID型。

2 結(jié) 果

2.1 病例組、對(duì)照組間基本臨床資料的比較 病例組共52例(男/女，27/25)，年齡51～68歲，平均年齡(58.60±7.60)歲，體重指數(shù)為(22.21±1.61)kg/m2。對(duì)照組51例(男/女，28/23)，年齡49～66歲，平均年齡為(57.20±7.90)歲，體重指數(shù)(22.13±1.41)kg/m2。兩組間性別、年齡、體重指數(shù)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說明兩組樣本具有可比性。

病例組高血壓49例(94.23%)，對(duì)照組高血壓4例(7.84%)，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，病例組吸煙14例(26.92%)，對(duì)照組6例(11.76%)，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其他指標(biāo)兩組間比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表1)。

2.2 病例組、對(duì)照組間血液學(xué)指標(biāo)的比較 兩組間血紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、總膽固醇及甘油三酯、載脂蛋白A、載脂蛋白B的比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；空腹血糖、高密度脂蛋白的比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(病例組高血糖23例，低HDL-C 27例;對(duì)照組高血糖3例，低HDL-C 12例,P<0.05)(見表2)。

2.3 病例組與對(duì)照組ACE基因I/D多態(tài)性的基因型及等位基因分布頻率比較 兩組樣本基因型分布符合(Harydy-Weinberg)遺傳平衡檢驗(yàn)(病例組：χ2=0.27P=0.88;對(duì)照組：χ2=0.51，P=0.78,兩組P>0.05)。病例組與對(duì)照組基因型、等位基因頻率的比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(基因型χ2=0.14，P=0.93;等位基因χ2=0.16，P=0.69)(見表3)。

2.4 腦出血危險(xiǎn)因素的多因素非條件Logistic回歸分析 為調(diào)整腦出血環(huán)境因素的影響，將是否有腦出血做為因變量，吸煙(吸=1，不吸=0)、血壓(SBP≥140 mmHg,或DBP≥90 mmHg=1，SBP≤140 mmHg或DBP≤90 mmHg=0)、HDL-C(>1.42 mmol/L=0，<1.2 mmol/L=1)、FBG(>6.1 mmol/L=1，<6.1 mmol/L=0)、ACE(ID、DD=1，II=0)為自變量。Logistic回歸分析顯示，本研究人群中吸煙、高血壓、低HDL-C是腦出血的危險(xiǎn)因素(OR值分別為2.15、4.70、3.87)，空腹血糖雖進(jìn)入方程，但此次入院未診斷為糖尿病，故可能不是此腦出血的危險(xiǎn)因素。而ACE基因型并不是腦出血發(fā)生的危險(xiǎn)因素(見表4)。

表1 病例組、對(duì)照組基本臨床資料比較[n(%)]

與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義*P<0.05

表2 病例組、對(duì)照組血液學(xué)指標(biāo)比較

與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義*P<0.05

表3 病例組、對(duì)照組ACE基因型及等位基因頻率分布[n(%)]

表4 腦出血危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

3 討 論

腦出血的發(fā)生是遺傳和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，對(duì)腦出血遺傳因素的研究必須重視環(huán)境因素對(duì)遺傳因素的影響，還應(yīng)考慮到民族差異的影響，因?yàn)椴煌褡迦巳罕旧硭哂械倪z傳標(biāo)記的差異性對(duì)腦出血發(fā)病的影響可能不同。

有研究報(bào)道，高原地區(qū)各類腦血管疾病中，腦出血占37.2%，且病死率極高，高達(dá)63.6%[7]；但目前針對(duì)高海拔地區(qū)腦出血的相關(guān)研究較少，青海玉樹地區(qū)平均海拔3800 米，人口以世居藏族為主，本研究在該地區(qū)世居藏族中進(jìn)行腦出血與ACE基因I/D多態(tài)性相關(guān)性研究，具有一定的可靠性。

腦出血發(fā)病的環(huán)境因素中，高血壓是最主要的危險(xiǎn)因素，長(zhǎng)期吸煙以及血高密度脂蛋白膽固醇降低也增加了腦出血的危險(xiǎn)性，本文的研究結(jié)果與上述結(jié)論相一致。而本研究病例組與對(duì)照組的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇無明顯差異，可能與本次樣本量以及藏族人群飲食、遺傳有關(guān)。此外，腦出血組空腹血糖較對(duì)照組高，但患者既往無糖耐量異常及糖尿病史，此次入院亦未診斷為糖尿病，可能為腦出血應(yīng)激刺激交感-腎上腺素系統(tǒng)興奮，引起血糖增高。

長(zhǎng)期的低溫、缺氧環(huán)境可導(dǎo)致部分高原人群的紅細(xì)胞及血紅蛋白數(shù)增高，紅細(xì)胞及血紅蛋白數(shù)的長(zhǎng)期增高，可引起血管壁的損傷，容易引起腦出血[8]。但本次研究未發(fā)現(xiàn)病例組與對(duì)照組間紅細(xì)胞及血紅蛋白數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示在藏族人群腦出血的危險(xiǎn)因素中紅細(xì)胞及血紅蛋白的增高并非其危險(xiǎn)因素，其機(jī)制可能與藏族對(duì)高原環(huán)境獲得較好的適應(yīng)有關(guān)[9]。

在分子遺傳學(xué)研究中，尚未發(fā)現(xiàn)在各人群中普遍證實(shí)的腦出血易感基因，目前研究較多的是ACE I/D多態(tài)性與腦出血的相關(guān)性。

RAS廣泛存在于人體的腦、心以及腎血管中，在關(guān)鍵酶ACE的作用下可使血管緊張素(AngⅠ)轉(zhuǎn)換為血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)，其中，AngⅡ是強(qiáng)縮血管物質(zhì)之一；而且ACE可降解緩激肽使其失活，影響機(jī)體內(nèi)水鈉的平衡、醛固酮的分泌、血管舒縮及血管平滑肌增殖。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)存在獨(dú)立的RAS，與循環(huán)系統(tǒng)RAS共同參與了大腦結(jié)構(gòu)及功能的調(diào)節(jié)，而腦內(nèi)自身局部的RAS起更重要更直接的作用[10]。

有關(guān)ACE基因多態(tài)性與疾病的關(guān)聯(lián)研究，不同民族、地域的研究結(jié)果不一致[11,12]，國(guó)內(nèi)多數(shù)研究認(rèn)為ACE基因I/D多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)，D等位基因增加了原發(fā)性高血壓的危險(xiǎn)性，雖然高血壓是腦出血最主要的危險(xiǎn)因素，但本研究未發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D多態(tài)性與腦出血的相關(guān)性，此結(jié)果與國(guó)內(nèi)、外一些研究結(jié)果一致[13,14]。

各研究存在差異，可能的原因?yàn)椋?1)關(guān)聯(lián)分析是根據(jù)目前已知的遺傳學(xué)及分子生物學(xué)知識(shí)，選取與某疾病相關(guān)的基因進(jìn)行研究，因此在排除該基因與其他疾病的關(guān)系時(shí)存在一定困難，可能導(dǎo)致假陽性的結(jié)果;(2)在研究基因多態(tài)性時(shí)，須考慮到民族、地區(qū)的差異，民族、地區(qū)不同可導(dǎo)致研究結(jié)果的差異。

本研究對(duì)象限于原發(fā)性腦出血，排除了繼發(fā)性腦出血，病例對(duì)照的選擇采取性別、年齡、居住地相匹配，使樣本具有代表性，應(yīng)用多因素分析，降低了常見危險(xiǎn)因素對(duì)分析的干擾。本研究正常對(duì)照組ACE基因I/D多態(tài)性基因型及等位基因頻率分布與文獻(xiàn)報(bào)道的漢族正常人群相近[15]，而腦出血與ACE基因I/D多態(tài)性無相關(guān)性，可能與本研究的樣本量、民族的差異、遺傳背景等原因有關(guān)。

總之，本研究沒有發(fā)現(xiàn)高原地區(qū)藏族腦出血與ACE基因I/D多態(tài)性間有相關(guān)性。在以后的研究中，考慮進(jìn)一步增加樣本量以及缺血性腦卒中病例，以期對(duì)腦卒中與ACE基因的關(guān)系有更全面的認(rèn)識(shí)，對(duì)高原地區(qū)腦血管病的研究及防治提供幫助。

[1]Wang G,Mikami E,Chiu LL,et al.Association analysis of ACE and ACTN3 in elite aucasian and East Asian swimmers[J].Med Sci Sports Exerc,2013,45(5):892-900.

[2]Slowik,Turaj W,Dziedzic T.DD genotype of ACE gene is a risk factor for intracerebral hemo Rrhage[J].Neurology,2004,63(2):359-361.

[3]Dardiotis E,Jaqiella J,Xiromerisiou G,et al.Angiotensin-converting enzyme tag single nucleotide polymorphisms in patients with intracerebral hemorrhage[J].Pharmacogenet Genomics,2011,21(3):136-141.

[4]Hsu WC,Chen ST,Wu YR,et al.The association of stroke and family history of stroke depends on its subtypes and gender:a family history study in Taiwan[J].Acta Neurol Taiwan,2009,18(3):161.

[5]中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì).中國(guó)腦出血診治指南2014[J].中華神經(jīng)科雜志,2015,48(6):435-442.

[6]李 峰,竇會(huì)東,肖占森,等.血管緊張素轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與腦卒中的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2010,39(1):37-39.

[7]董紅讓,李在全,葉東平,等.高原地區(qū)高血壓腦出血危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析[J].西南國(guó)防醫(yī)藥,2013,23(11):1218-1219.

[8]唐笛嬌,葉元馨,栗 軍,等.高原藏族紅細(xì)胞增多癥患者臨床特點(diǎn)及基因突變分析[J].中華血液學(xué)雜志,2012,33(11):960-962.

[9]Bigham AW,Wilson MJ,Julian CG,et al.Andean and Tibetan patterns of adaptation to high Altitude[J].Am J Hum Bio,2013,25(2):197.

[10]Fouda AY,Artham S,EI-Remessy AB,et al. Renin-angiotensin system as a potential Therapeutic target in stroke and retinopathy:experimental and clinical evidence[J].Clin Sci,2016,130(4):221-238.

[11]郎曉峰.高血壓腦出血與ACE基因多態(tài)性的研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2011,6(27):80-82.

[12]尚 蔚,竇相峰,張紅葉,等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與腦出血的關(guān)系[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2004,21(5):388-390.

[13]吳壽嶺,張 琦.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因插入/缺失多態(tài)性在人群中的分布[J].中國(guó)循環(huán)雜志,2003,18(3):215-217.

[14]Dardiotis E,Jaqiella J,Xiromerisiou G,et al.Angiotensin-converting enzyme tag single nuclotide polymorphisms in patients with intracerebral hemorrhage[J].Pharmacogenet Genomics,2011,21(3):136-141.

[15]Li Y.Angiotensin-converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism and essential hypertension in the Chinese population: a meta-analysis including 21,058 Participants[J].Intern Med J,2012,42(4):439-444.

AssociationofACEgeneI/DpolymorphismwithintracerebralhemorrhageinTibetanpatientsofplateauarea

RENQingping,WUShizheng.

(DepartmentofNeurology,People’sHospitalofQinghaiProvince,Xining810007,China)

ObjectiveTo investigate the association of angiotensin converting enzyme (ACE) gene insertion/deletion (I/D) polymorphism with intracerebral hemorrhage in Tibetan patients of plateau area.MethodsWe collected 52 Tibetan patients (27 males,25 females) with cerebral hemorrhage in Qinghai province as case group,andthe control group was the 51 cases of healthy subjects (28 males,23 females),who did physical examination in the same period,and their age,gender and place of residence were the same as case group.And collected detailed information of all subjects,inclu-ding laboratory data.PCR-RFLP method was used to detect genotype of ACE in all samples.ResultsThe distribution of ACE genotypes in the case group was as follow:DD was 9 cases (17.31%),II was 21 cases (40.38%),ID was 22 cases (42.31%);the alleles frequency were:D38.46%,I 61.54%.And the control group:DD was 10 cases (19.61%),II was 19 cases (37.26%),ID was 22 cases (43.13%);the alleles frequency were:D41.18%,I 58.82%.The frequencies of ACE genotypes and the allels revealed no significant difference between the two groups (genotype:20.14,allel:20.16，P>0.05).ConclusionThe ACE gene I/D polymorphism is not related to the cerebral hemorrhage in Tibetan patients of plateau area,and it may not be a genetic predisposing factor for cerebral hemorrhage in Tibetan population.

Plateau; Tibetan; Angiotensin converting enzyme; Gene poly-morphism; Intracerebral hemorrhage

R743.34

A

1003-2754(2017)10-0884-04

2017-08-16；

2017-10-03

(青海省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，青海 西寧 810007)

吳世政，E-mail：wushizheng2005@hotmail.com