張艷，楊穎

（江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇連云港222006）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

高效液相色譜法測(cè)定諾氟沙星滴眼液中羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯含量

張艷，楊穎

（江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇連云港222006）

目的建立同時(shí)測(cè)定諾氟沙星滴眼液中羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法色譜柱采用Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為1%冰醋酸溶液－甲醇（50∶50），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長為255 nm，進(jìn)樣量為20 L，柱溫為20℃。結(jié)果羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯的質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.99～44.50 g/mL，5.02～52.70 g/mL，1.05～41.64 g/mL，加樣回收率分別為98.37%，97.19%，99.34%，RSD分別為1.34%，1.43%，0.80%(n＝9)。結(jié)論該方法準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定，無干擾，可用于諾氟沙星滴眼液中抑菌劑的含量分析。

諾氟沙星滴眼液；高效液相色譜法；羥苯甲酯；羥苯乙酯；羥苯丙酯

諾氟沙星為第2代氟喹諾酮類抗菌藥物，對(duì)體外多重耐藥菌具有較好的抗菌活性。諾氟沙星滴眼液主要用于治療細(xì)菌性結(jié)膜炎、角膜炎、眼瞼炎及傳染性出血性結(jié)膜炎等，效果良好，價(jià)格低廉[1]。根據(jù)2015年版《中國藥典(二部)》規(guī)定，可加入適宜濃度的抑菌劑，且明確規(guī)定了如使用羥苯甲酯、羥苯丙酯為抑菌劑時(shí)，需測(cè)定2種抑菌劑含量[2]。但并非所有生產(chǎn)企業(yè)均使用相同的抑菌劑，部分生產(chǎn)企業(yè)也未在說明書明確標(biāo)示抑菌劑的含量。為了更好地控制滴眼液的質(zhì)量，在文獻(xiàn)[3－6]基礎(chǔ)上，本研究中建立了同時(shí)測(cè)定諾氟沙星滴眼液中常用抑菌劑羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯含量的高效液相色譜（HPLC）法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient1260型高效液相色譜儀；Sartorius BP211D型電子天平；Milli－Q型超純水儀（美國密理博公司）。

1.2 試藥

羥苯甲酯（批號(hào)為100278－201404，純度100%），羥苯乙酯（批號(hào)為100847－201203，純度100%），羥苯丙酯（批號(hào)為100444－204103，純度99.6%），均為對(duì)照品，由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇為色譜純，冰醋酸為化學(xué)純，水為超純水；樣品為6個(gè)批次市售諾氟沙星滴眼液（規(guī)格為每支8 L∶24 mg），分別來自4家藥品生產(chǎn)企業(yè)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

對(duì)照品溶液：分別稱取羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解，并制成每1 mL各約含1 mg的對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品貯備液。分別取對(duì)照品貯備液適量，加流動(dòng)相制成每1 mL約含羥苯甲酯30 mg、羥苯乙酯30 μg、羥苯丙酯30 μg的混合溶液，作為混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：精密量取樣品3 mL，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：1%冰醋酸溶液－甲醇（50∶50）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：255 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：20℃。諾氟沙星峰與羥苯甲酯峰間的分離度為3.7，其余各組分峰間的分離度均大于1.5。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系與檢測(cè)限考察：分別精密量取2.1項(xiàng)下3種對(duì)照品貯備液各0.1，0.2，1.0，2.0，3.0，5.0 mL，分別置同一100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制得系列濃度的對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取線性溶液繼續(xù)稀釋，取信噪比(S/N)約為3∶1的溶液濃度作為各成分的最低檢測(cè)限。結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品混合溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯峰面積的RSD分別為0.73%，0.55%，0.70%（n＝6），表明儀器精密度良好。

表1 線性關(guān)系及檢測(cè)限考察結(jié)果(n＝6)

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取抑菌劑為羥苯甲酯、羥苯丙酯的供試品溶液Ⅰ（批號(hào)為16091401）、抑菌劑為羥苯乙酯供試品溶液Ⅱ（批號(hào)為1610153101），分別于0，2，4，6，8，12 h時(shí)進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。結(jié)果羥苯甲酯、羥苯丙酯、羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.9%，0.9%，1.0%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：分別取諾氟沙星滴眼液供試品Ⅰ（批號(hào)為16091401）、供試品Ⅱ（批號(hào)為16091401），平行制備供試品溶液并測(cè)定含量6次，供試品Ⅰ中羥苯甲酯、羥苯丙酯平均含量的RSD分別為1.5%，1.2%（n＝6），供試品Ⅱ中羥苯乙酯平均含量的RSD為1.2%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：在空白樣品（企業(yè)4的無抑菌劑添加樣品）中，定量加入3個(gè)濃度水平的對(duì)照品溶液，按擬定色譜條件測(cè)定，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算防腐劑含量，計(jì)算回收率和RSD，考察方法的平均回收率。詳見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.4 樣品含量測(cè)定

按擬訂色譜條件，對(duì)6批諾氟沙星滴眼液樣品進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 6批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

眼用制劑在使用過程中要求保持無菌，抑菌劑的加入是必要且重要的。諾氟沙星滴眼液可加入適宜濃度的抑菌劑，2010年版《中國藥典·第二增補(bǔ)本》中標(biāo)明，如使用羥苯甲酯、羥苯丙酯或硫柳汞的一種或多種為防腐劑，需測(cè)定其含量，而2015年版《中國藥典(二部)》對(duì)羥苯甲酯、羥苯丙酯的含量有限定，均規(guī)定其含量為標(biāo)示量的±20%。

查閱市售樣品的藥品說明書，發(fā)現(xiàn)其處方中的抑菌劑為羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、硫柳汞鈉中的一種或多種，或并未添加抑菌劑。收集的市售6批樣品中，并未發(fā)現(xiàn)使用硫柳汞為抑菌劑的樣品，使用上述3種防腐劑的含量為標(biāo)示量的92%～114%，另有1家生產(chǎn)企業(yè)并未添加防腐劑，均在《中國藥典》規(guī)定的限度范圍內(nèi)。

該方法可在20 min內(nèi)快速檢測(cè)諾氟沙星滴眼液添加的抑菌劑成分及其含量，可有效控制抑菌劑的加入量，方法靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為其含量分析提供了相應(yīng)的方法。

[1] 孫加偉，張雷，張存舉，等.諾氟沙星滴眼液用于急性細(xì)菌性結(jié)膜炎治療的療效觀察[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2014，9(8):175－176.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1199－1200.

[3] 趙敬丹，秦峰，楊燕，等.滴眼液中抑菌劑的快速高通量測(cè)定及抑菌效力的研究初探[J].中國藥學(xué)雜志，2017，52(4):308－313.

[4] 許夢(mèng)佳，楊偉峰，石云峰.HPLC測(cè)定芐達(dá)賴氨酸滴眼液中3種抑菌劑含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2015，32(11):1370－1373.

[5] 吳春敏，朱精英，池文杰，等.HPLC法快速檢測(cè)苦參素注射液中8個(gè)抑菌劑及苯甲醛[J].藥物分析雜志，2012，32(7):1200－1204.

[6] 易大為，馬琳，張亞杰.高效液相色譜法測(cè)定氯霉素滴眼液中硫柳汞和苯基汞的含量[J].中國藥學(xué)雜志，2014，49(11):1004－1008.

Content Determination of Methylparaben,Ethylparaben,Propylparaben in Norfloxacin Eye Drops by HPLC

Zhang Yan,Yang Ying
(Lianyungang Institute for Drug Control,Lianyungang,Jiangsu,China222006)

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of methylparaben,ethylparaben and propylparaben in Norfloxacin Eye Drops.MethodsThe Phenomenex Gemini C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was adopted,the mobile phase was 1%acetic acid－methanol(50∶50),the flow rate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 255 nm,the injection volume was 20 μL and the column temperature was 20℃.ResultsMethylparaben,ethylparaben and propylparaben showed good linear relationship in the range of 0.99－44.50 μg/mL,5.02－52.70 μg/mL,1.05－41.64 μg/mL.The average recovery rates were 98.37%,97.19%,99.34%,respectively，the RSDs were 1.34%,1.43%,0.80%(n＝9).ConclusionThe method is accurate,reproducible and stable without interference,which can be used for the determination of bacteriostatic agent in Norfloxacin Eye Drops.

Norfloxacin Eye Drops;HPLC;methylparaben;ethylparaben;propylparaben

R927.2；R917

R927.2；R917

1006－4931(2017)21－0020－03

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.21.008

張艷，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觯?電子信箱)306377461＠qq.com。

2017－06－02)