史立川，蒲旭峰，余永秀，羅春穎（.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都6007；.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司，四川都江堰6830）

氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥溶出曲線的相似性評(píng)價(jià)

史立川1，2＊，蒲旭峰1#，余永秀2，羅春穎1（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都610072；2.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司，四川都江堰611830）

目的：考察氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥溶出曲線的相似性，為完善該制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。方法：采用槳法，以鹽酸溶液（pH 3.0）、磷酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）、水為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，進(jìn)行溶出試驗(yàn)，采用紫外-可見分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為256 nm，分別測(cè)定氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥的累積溶出度，并通過計(jì)算相似因子（f2）來評(píng)價(jià)其溶出曲線的相似性。結(jié)果：氯沙坦鉀檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為12.11～35.96 μg/mL（r≥0.999 7）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜5.0%；4種溶出介質(zhì)中的回收率分別為98.66%～100.84%（RSD＝0.77%，n＝9）、98.91%～100.59%（RSD＝0.49%，n＝9）、98.33%～101.39%（RSD＝0.85%，n＝9）、99.46%～101.32%（RSD＝0.55%，n＝9）。在4種溶出介質(zhì)中，3批氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥溶出曲線的f2均＞70。結(jié)論：氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥的體外溶出曲線相似性較好。

氯沙坦鉀片；仿制藥；原研藥；溶出曲線；紫外-可見分光光度法；相似因子；評(píng)價(jià)

氯沙坦鉀片原研廠家為美國(guó)默沙東公司（商品名：COZAAR，科素亞），該藥是全球第一個(gè)治療高血壓的血管緊張素Ⅱ受體拮抗藥。該藥在臨床上廣泛適用于原發(fā)性高血壓的治療[1-3]，效果好，不良反應(yīng)發(fā)生率低，安全性高[4]。

溶出度系指藥物從片劑或膠囊劑等固體制劑在規(guī)定溶劑中溶出的速度和程度[5]，是影響口服固體制劑生物吸收性能的重要參數(shù)[6]；而體外溶出試驗(yàn)通常選擇在3～4種溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出曲線考察以評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量[7]。本研究中，筆者按照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）溶出度測(cè)定方法[5]進(jìn)行氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥溶出試驗(yàn)，采用紫外-可見分光光度法測(cè)定累積溶出度，并采用FDA推薦使用的相似因子（f2）法進(jìn)行二者溶出曲線的相似性評(píng)價(jià)，以期為完善該制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

UV-2550型紫外-可見分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）；708-DS型溶出試驗(yàn)儀（美國(guó)Agilent公司）；850-DS型自動(dòng)取樣器（美國(guó)Agilent公司）；MS1003S型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

氯沙坦鉀片仿制藥（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司，批號(hào)：161123、161206、161209，規(guī)格：100 mg）；氯沙坦鉀片原研藥（美國(guó)Merck Sharp&Dohme Limited公司，批號(hào)：L021856，規(guī)格：100 mg）；氯沙坦鉀原料藥（浙江天宇藥業(yè)有限公司，批號(hào)：10100-160418）；氯沙坦鉀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100597-201102，純度：100%）；所用試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的選擇

參考2015年版《中國(guó)藥典》（四部）溶出度測(cè)定方法[5]，擬采用槳法、溶出介質(zhì)體積為900 mL和轉(zhuǎn)速為50 r/min進(jìn)行溶出試驗(yàn)。氯沙坦鉀為低溶解、高滲透藥物，屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）中的Ⅱ類，其解離常數(shù)（pKa）為5～6，由于分子中四氮唑結(jié)構(gòu)呈酸性，為pH依賴性藥物，其在水或0.1 mol/L氫氧化鈉溶液中易溶，在0.1 mol/L鹽酸溶液中微溶。故需考察氯沙坦鉀原料藥在酸性溶液中的溶解行為：分別配制pH為1.0、1.2、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0的鹽酸溶液，在（37.0±0.5）℃條件下，用上述溶液制備氯沙坦鉀飽和溶液，采用紫外-可見分光光度法，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度（若吸光度＞0.8應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再測(cè)定）并計(jì)算溶解度，考察是否達(dá)到漏槽條件，結(jié)果見表1。

表1 氯沙坦鉀在不同pH鹽酸溶液中的溶解度Tab 1 Solubility of losartan potassium in hydrochloric acid solution with different pH values

由表1可知，氯沙坦鉀在pH 1.0～3.0鹽酸溶液中溶解較差，僅在pH 2.2、2.8及3.0的鹽酸溶液中達(dá)到漏槽條件。進(jìn)一步采用該3種溶液為溶出介質(zhì)，取氯沙坦鉀片原研藥適量，按溶出度測(cè)定法[2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0931”第二法（槳法）]進(jìn)行溶出度測(cè)定[5]，結(jié)果，氯沙坦鉀片的溶出度分別為58.76%、66.69%、86.98%，僅pH 3.0的溶出度達(dá)到85%。結(jié)合上述結(jié)果，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則》及文獻(xiàn)[8-10]，最終確定本試驗(yàn)的溶出介質(zhì)為：鹽酸溶液（pH 3.0）、磷酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和水。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液取氯沙坦鉀對(duì)照品約13.5 mg，精密稱定，置于10 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密量取對(duì)照品貯備液1 mL，置于50 mL量瓶中，分別用鹽酸溶液（pH 3.0）、磷酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和水4種溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中約含氯沙坦鉀27 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液取原研藥樣品適量，按溶出度測(cè)定法[2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0931”第二法（槳法）][5]，分別以鹽酸溶液（pH 3.0）、磷酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和水為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溫度為37.0℃，依法操作，分別于10、20、30、45、60 min時(shí)取樣10 mL，并自動(dòng)補(bǔ)加10.5 mL（自動(dòng)溶出儀取液會(huì)棄去0.5 mL）溶出介質(zhì)，用0.45 μm水系濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用同種介質(zhì)定量稀釋，制成每1 mL中約含氯沙坦鉀27 μg的溶液，作為供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液按樣品的處方比例和制備工藝，取空白輔料200 mg，分別投入4種溶出介質(zhì)中，按“2.2.2”項(xiàng)下步驟操作，于45 min時(shí)單點(diǎn)取樣10 mL，用0.45 μm水系濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，用同種介質(zhì)稀釋至10mL，作為空白輔料溶液。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白輔料溶液各適量，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描，結(jié)果顯示，氯沙坦鉀在256 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且空白輔料無干擾。故選擇256 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[11]。

2.4 濾膜吸附試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下4種溶出介質(zhì)制備的對(duì)照品溶液各適量，不濾過直接測(cè)定；并經(jīng)0.45 μm水系濾膜濾過，棄去3 mL濾液，取續(xù)濾液，在256 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度并計(jì)算對(duì)照品溶液回收率。同時(shí)，取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液各適量，在256 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，并計(jì)算濾膜對(duì)供試品溶液中氯少坦鉀的吸附量。結(jié)果，對(duì)照品溶液經(jīng)濾膜濾過后，氯沙坦鉀回收率＞97%，濾膜對(duì)4種供試品溶液中氯沙坦鉀的吸附量＜2%，說明0.45 μm水系濾膜對(duì)氯沙坦鉀沒有吸附。

2.5 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，共4份，分別用鹽酸溶液（pH 3.0）、磷酸鹽緩沖液（pH 4.5）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和水定容于100 mL量瓶中，制成每1 mL中約含氯沙坦鉀80 μg的溶液，精密量取上述溶液1.5、2、2.5、3、3.5、4.5 mL，分別置于10 mL量瓶中，并用相應(yīng)介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中約含氯沙坦鉀12、16、20、24、28、36 μg的溶液，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以氯沙坦鉀質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表2。

表2 回歸方程與線性范圍Tab 2 Regression equations and linear ranges

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下4種對(duì)照品溶液各適量，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果，氯沙坦鉀吸光度的RSD分別為0.69%、0.52%、0.06%、0.07%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下45 min時(shí)取樣的4種供試品溶液（批號(hào)：161123）各適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、24、28 h時(shí)在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果，氯沙坦鉀吸光度的RSD分別為4.87%、3.82%、0.41%、0.49%（n＝6），表明4種溶出介質(zhì)制備的供試品溶液于室溫下放置28 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下45 min時(shí)取樣的4種供試品溶液（批號(hào)：161123）各適量，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果，氯沙坦鉀吸光度的RSD分別為0.46%、0.39%、0.63%、0.28%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品原料藥80、100、120 mg，各3份，加入相應(yīng)量的按處方比例配制的混合輔料，分別置于50 mL量瓶中，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，于45 min時(shí)單點(diǎn)取樣制備供試品溶液，取適量，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

2.10 溶出時(shí)間的選擇

FDA溶出度數(shù)據(jù)庫可查詢到氯沙坦鉀片的溶出試驗(yàn)的推薦取樣時(shí)間為10、20、30、45 min。由于氯沙坦鉀片在酸性介質(zhì)中溶出較緩慢，故本試驗(yàn)將取樣時(shí)間延長(zhǎng)至60 min，選擇溶出取樣時(shí)間為10、20、30、45、60 min。

2.11 溶出曲線的繪制及相似度評(píng)價(jià)

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 3 Results of recovery tests（n＝9）

取4批樣品各12片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在256 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)累積溶出度，繪制溶出曲線，結(jié)果見圖1。

采用FDA推薦使用的f2法比較仿制藥與原研藥樣品溶出曲線的相似性[12-13]。根據(jù)《普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則》，對(duì)于普通口服固體制劑，當(dāng)受試樣品與參比樣品在15 min的平均溶出度均≥85%時(shí)，可認(rèn)為溶出曲線相似；否則，需選取3～4個(gè)取樣點(diǎn)（溶出度≥85%的時(shí)間點(diǎn)不超過1個(gè)）計(jì)算f2，當(dāng)f2≥50時(shí)，可認(rèn)為溶出曲線相似。f2計(jì)算公式如下：

其中，Rt為t時(shí)間點(diǎn)參比樣品平均累積溶出度；Tt為t時(shí)間點(diǎn)受試樣品平均累積溶出度；n為取樣時(shí)間點(diǎn)的個(gè)數(shù)。仿制藥樣品與原研藥樣品在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線f2測(cè)定結(jié)果見表4。由表4可知，仿制藥樣品與原研藥樣品在4種溶出介質(zhì)中的溶出行為相似。

圖1 氯沙坦鉀片仿制藥與原研藥在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線Fig 1 Dissolution curves of generic and original preparation of Losartan potassium tablets in 4 dissolution media

表4 4種溶出介質(zhì)中的f2Tab 4 f2factors in 4 dissolution media

3 討論

槳法的轉(zhuǎn)速通常選用50和70 r/min[13]。本試驗(yàn)通過對(duì)比氯沙坦鉀片在該兩種轉(zhuǎn)速條件下的溶出曲線發(fā)現(xiàn)，在75 r/min條件下樣品溶出速率高于50 r/min，但為了有利于考察不同制劑處方工藝的差別，溶出度試驗(yàn)應(yīng)選擇較低轉(zhuǎn)速。故本試驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)速為50 r/min。

本試驗(yàn)在不同pH溶出介質(zhì)條件下對(duì)3批仿制藥樣品與原研藥樣品進(jìn)行溶出試驗(yàn)，繪制溶出曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種制劑在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線f2均達(dá)70以上，說明自研氯沙坦鉀片與原研制劑的體外溶出曲線相似性較好。

[1] 曲輝，趙冰.氯沙坦鉀治療原發(fā)性高血壓療效觀察[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013，7（20）：85-86.

[2] 胡益蓉.氯沙坦鉀治療原發(fā)性高血壓75例療效分析[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17（13）：32-34.

[3] 胡嵐.氯沙坦鉀片對(duì)糖尿病伴原發(fā)性高血壓78例患者的療效觀察[J].海峽藥學(xué)，2012，24（11）：190-191.

[4] 耿榮凱.氯沙坦鉀片治療原發(fā)性高血壓的臨床分析[J].現(xiàn)代養(yǎng)生，2016（11）：147-148.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：121-124.

[6] 呂亞軍，蚩曉娜，谷志勇.鹽酸馬尼地平片仿制藥與原研藥的溶出度一致性評(píng)價(jià)[J].中國(guó)藥房，2015，26（30）：4291-4294.

[7] 謝沐風(fēng).改善溶出度評(píng)價(jià)方法，提高固體藥物制劑水平[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36（7）：447-451.

[8] 張啟明，謝沐風(fēng)，寧保明，等.采用多條溶出曲線評(píng)價(jià)口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40（12）：946-955.

[9] 夏錦輝，劉昌孝.固體藥物制劑的體外溶出度的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)分析[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2000，35（2）：130-131.

[10] 謝沐風(fēng).如何科學(xué)、客觀地制訂溶出度試驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43（3）：243-245.

[11] 賀玲，溫海成，賈微.紫外分光光度法測(cè)定氯沙坦鉀片溶出度的研究[J].中醫(yī)臨床研究，2014（32）：14-16.

[12] 謝沐風(fēng).溶出曲線相似性的評(píng)價(jià)方法[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40（4）：308-310.

[13] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則[EB/OL].（2015-02-05）[2017-01-03].http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0087/114 286.html.

Similarity Evaluation of the Dissolution Curves of Generic and Original Preparation of Losartan Potassium Tablets

SHI Lichuan1，2，PU Xufeng1，YU Yongxiu2，LUO Chunying1（1.School of Pharmacy，Chengdu University of TCM，Chengdu 610072，China；2.Sichuan Heron Pharmaceutical Co.，Ltd.，Yangtze River Pharmaceutical Group，Sichuan Dujiangyan 611830，China）

OBJECTIVE：To evaluate the dissolution curves similarity of generic and original preparation of Losartan potassium tablets，and to provide reference for improving quality evaluation of the preparation.METHODS：Using hydrochloric acid solution（pH 3.0），phosphate buffer solution（pH 4.5），phosphate buffer solution（pH 6.8）and water as medium，paddle method was adopted for dissolution test with dissolution medium volume of 900 mL and rotation speed of 50 r/min.UV-visible spectrophotometry was adopted to determine accumulative dissolution of generic and original preparation of Losartan potassium tablets with the detection wavelength of 256 nm.The similarity of dissolution curves were evaluated by calculating similarity factor（f2）.RESULTS：The linear range of losartan potassium was 12.11-35.96 μg/mL（r≥0.999 7）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 5.0%.The recoveries of 4 dissolution media were 98.66%-100.84%（RSD＝0.77%，n＝9），98.91%-100.59%（RSD＝0.49%，n＝9），98.33%-101.39%（RSD＝0.85%，n＝9），99.46%-101.32%（RSD＝0.55%，n＝9）.In 4 dissolution media，f2of the dissolution curves of 3 batches of generic and original preparation of Losartan potassium tablets were all higher than 70.CONCLUSIONS：The dissolution curves of self-made and original preparation of Losartan potassium tablets show good similarity.

Losartan potassium tablet；Generic preparation；Original preparation；Dissolution curve；UV-visible spectrophotometry；Similarity factor；Evaluation

R927

A

1001-0408（2017）30-4298-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.30.33

＊碩士研究生。研究方向：中藥新制劑、新劑型、新技術(shù)。E-mail：lychuans@live.com

#通信作者：主任中藥師，博士。研究方向：中藥新制劑、新劑型、新技術(shù)。E-mail：pxf68@263.net

2017-04-03

2017-07-25）