董鳳

【摘要】目的 探討中藥有效成分對幽門螺桿菌多重耐藥菌株的體外抑菌效果。方法 以2015年2月至2016年2月挑選出32株幽門螺桿菌樣本，分別采用阿莫西林、左氧氟沙星等5種常用的抗生素對其進行測試，分別鑒別存在多重耐藥性菌株。然后選擇從各類中藥中提取的4種有效成分（黃連素、大黃素、五味子以及黃芩苷），利用中藥成分檢測具有多重耐藥性的幽門螺桿菌的最低抑菌濃度。結(jié)果 共篩選出5株具有多重耐藥性的幽門螺桿菌，4種中藥成分當(dāng)中以黃連素的最低抑菌濃度最低，為12.5 mg/ml，其余3種有效成分對不同菌株的最低抑菌濃度也不同。結(jié)論 黃連素、大黃素等4種中藥成分對具有多重耐藥性的幽門螺桿菌具有明顯的體外抑菌作用，其中以黃連素的抑菌效果最好。

【關(guān)鍵詞】幽門螺桿菌；多重耐藥性；中藥；體外；抑菌

【中圖分類號】R285.5 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2017.15..01

幽門螺桿菌是革蘭氏陰性菌的一種，人類最早發(fā)現(xiàn)這類病菌是在一位患有慢性胃炎患者的消化系統(tǒng)中，目前國際醫(yī)學(xué)界已經(jīng)公認該病菌是導(dǎo)致慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等消化系統(tǒng)疾病的最主要誘因，主要感染位置是胃部黏膜。臨床治療時多采用抗生素，但隨著這類藥物使用頻率的增加，導(dǎo)致幽門螺桿菌發(fā)生了不同程度的耐藥性，使得抗生素治療效果大幅度下降。本文即是研究中藥成分對多重耐藥性幽門螺桿菌的體外抑菌作用，如下為具體研究方法和內(nèi)容。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選擇2015年2月至2016年2月我院患者49例，共分離幽門螺桿菌菌株32株。其中男20例，女12例，年齡中最大者69歲，最小者21歲，平均年齡為（32.87±3.51）歲。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離方法

根據(jù)患者消化道慢性炎癥病灶的具體位置選擇胃鏡或腸鏡進行活檢樣本提取，將樣本研磨后接種于兔血瓊脂培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵化，溫度設(shè)定為37℃，同時培養(yǎng)箱內(nèi)氣體濃度中氧氣為50 ml/L、二氧化碳為100 ml/L，相對濕度應(yīng)高于90%，連續(xù)培養(yǎng)5 d左右進行觀察[1]。通過生化反應(yīng)和革蘭氏染色確定細胞形態(tài)，并挑選出幽門螺桿菌菌株。

1.2.2 多重耐藥性菌株篩選方法

采用瓊脂二倍稀釋方法進行檢測，將經(jīng)過培養(yǎng)后得到的幽門螺桿菌進行標(biāo)號，并使用環(huán)形接種棒刮取部分菌株，在刮取前應(yīng)使用顯微鏡對菌株是否處于對數(shù)生長期進行確定，包括測量的樣本正處于生長旺盛階段。將樣本接種在無菌生理鹽水當(dāng)中，并以比濁管作為參照調(diào)整到0.5麥?zhǔn)宵c，樣本濃度則調(diào)整到108 mL。使用移液器提取劑量約2 μl的懸濁菌液，分別將其接種在含有左氧氟沙星、阿莫西林、克拉霉素、四環(huán)素以及甲硝唑的瓊脂培養(yǎng)基表面，在與培養(yǎng)幽門螺桿菌條件完全相同的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行孵化，連續(xù)培養(yǎng)3 d后對結(jié)果進行觀察。如菌株能夠在含有3種及以上抗生素的培養(yǎng)基上生長，則認為其具有多重耐藥性，其中培養(yǎng)基抗生素含量：左氧氟沙星超過8 μg/ml、阿莫西林超過4 μg/ml、克拉霉素超過1 μg/ml、四環(huán)素超過

4 μg/ml、甲硝唑超過8 μg/ml[2]。

1.2.3 中藥成分的體外抑菌作用檢測

同樣采用二倍稀釋法對4種中藥成分對多重耐藥性幽門螺桿菌菌株的體外最低抑菌值進行檢測，分別是黃連素、大黃素、五味子以及黃芩苷。選擇經(jīng)滅菌處理的試管12支，并在試管內(nèi)加入劑量為2 ml的腦心浸液培養(yǎng)基，標(biāo)號后在1號管中加入一種中藥有效成分約2 ml，搖勻后使1號管內(nèi)藥物濃度為200 mg/ml，使用倍比稀釋方法，為2號到10號管內(nèi)注入同樣的藥物有效成分。隨后選擇劑量為0.1 ml的多重耐藥性幽門螺桿菌菌液，第11號管內(nèi)單純加入菌液，第12號管內(nèi)為空白對照。將菌液與藥液搖勻后同時放入恒溫培養(yǎng)環(huán)境當(dāng)中，采用震蕩培養(yǎng)的方式連續(xù)孵化3 d，每種中藥有效成分的測試均進行3次取平均值。觀察抑菌作用時，提取培養(yǎng)液0.5 ml進行革蘭氏染色確認是否為幽門螺桿菌，并將菌株轉(zhuǎn)移至瓊脂培養(yǎng)基上，再連續(xù)培養(yǎng)3 d后觀察菌落生長情況，并記錄最低抑菌濃度數(shù)據(jù)[3]。

2 結(jié) 果

共篩選出5株具有多重耐藥性的幽門螺桿菌，4種中藥成分當(dāng)中以黃連素的最低抑菌濃度最低，為12.5 mg/ml，其余3種有效成分對不同菌株的最低抑菌濃度也不同。

3 討 論

中藥當(dāng)中也有很多藥物對幽門螺桿菌具有較強的抑制作用，而這類藥物大多屬于清熱解毒性，其中主要包括黃連、黃芩、大黃、板藍根、五味子、烏梅等，其古今對幽門螺桿菌具有較強的抑制作用[4]。根據(jù)本次研究中可以看出，4種中藥成分對篩選出的5種多重耐藥菌株均具有較強的體外抑制作用，其中以黃連素的最低抑菌濃度最低。黃連素又被稱為鹽酸小檗堿，是目前臨床較為常用的中成藥物，黃連當(dāng)中含有大量的黃連素，其可以有效地抑制幽門螺桿菌細胞內(nèi)對葡萄糖的氧化反應(yīng)，從而使病菌無法得到充足的營養(yǎng)而凋亡，而其它3種中藥成分主要是以抑制病菌核算類物質(zhì)的合成，從而使其無法合成必要蛋白質(zhì)，起到殺滅病菌的目的。

參考文獻

[1] 黃衍強，黃干榮，李曉華，等.中藥提取物對耐藥幽門螺桿菌生物膜形成的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，32（11）：1407-1409.

[2] 黃干榮，李曉華，黃衍強，等.大黃素等提取物對耐藥性大腸桿菌生物膜形成的影響[J].中成藥，2013，35（12）：2602-2605.

[3] 余曉丹.黃芩苷與野黃芩苷抑制幽門螺桿菌脲酶作用及其機理研究[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

本文編輯：吳宏艷endprint