辛素芳+李力敏+邊莉

[摘要] 目的 通過分析肺炎支原體肺炎（MPP）患兒血清中可溶性B7-H3（sB7-H3）及相關(guān)細胞因子的表達水平，探討血清sB7-H3與相關(guān)細胞因子的相關(guān)性，并評價其在MPP發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用。 方法 選取2016年1月～2017年1月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院兒科住院治療的110例MPP患兒（MPP組），根據(jù)患兒病情分為重癥MPP組（54例），輕癥MPP組（56例）。另外選擇同期健康體檢兒童作為正常對照組（38例）。通過全自動酶標(biāo)儀檢測MPP患兒血清中sB7-H3及干擾素-γ（IFN-γ）、粒細胞巨噬細胞刺激因子（GM-CSF）、白介素-4（IL-4）、白介素-17（IL-17）的表達水平。 結(jié)果 MPP組急性期患兒血清sB7-H3、IFN-γ、GM-CSF、IL-17水平明顯高于本組恢復(fù)期及對照組，MPP組急性期IL-4的表達水平低于本組恢復(fù)期及對照組（P < 0.05）。MPP組恢復(fù)期血清中各因子水平明顯高于對照組，IL-4水平低于對照組（P < 0.05）。MPP組重癥期患兒血清sB7-H3、IFN-γ、GM-CSF、IL-17水平明顯高于輕癥MPP組（P < 0.05），兩組之間IL-4水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。MPP患兒急性期血清中sB7-H3分別與IFN-γ、GM-CSF呈正相關(guān)（r = 0.573、0.682，均P < 0.01），而與IL-4、IL-17水平無顯著相關(guān)性（P > 0.05）。 結(jié)論 sB7-H3及細胞因子IFN-γ、GM-CSF、IL-4、IL-17在MPP患兒感染中起著重要的作用，參與了MPP的發(fā)病過程，其水平高低與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 肺炎支原體；肺炎；可溶性B7-H3；細胞因子

[中圖分類號] R725.6 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（c）-0108-04

The clinical significance and changes of serum sB7-H3 and related cytokines in children with Mycoplasma Pneumoniae pneumonia

XIN Sufang1 LI Limin1 BIAN Li2

1.Department of Paediatrics，the Fourth Hospital of Hebei Medical University，Hebei Province，Shijiazhuang 050000，China；2.Department of Paediatrics，Shijiazhuang Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hebei Province，Shijiazhuang 050000，China

[Abstract] Objective To explore the relationship between serum sB7-H3 and related cytokines， and to evaluate its process in the development of Mycoplasma Pneumoniae pneumonia （MPP） through the analysis of the expression of serum soluble B7-H3 （sB7-H3） and related cytokines in MPP. Methods 110 cases children with MPP in the Fourth Hospital of Hebei Medical University from January 2016 to January 2017 were selected as the MPP group and divided into severe MPP group （54 cases）， mild MPP group （56 cases） according to the condition of children. In addition， healthy children were selected as the normal control group （38 cases）. The levels of sB7-H3， IFN-γ， GM-CSF， IL-4 and IL-17 in serum of MPP were detected by automatic microplate reader. Results The levels of sB7-H3， IFN-γ， GM-CSF and IL-17 in the serum of MPP children was significantly higher than those in the recovery phase and the control group （P < 0.05）. The expression level of IL-4 in acute phase was lower than that in recovery phase and control group （P < 0.05）. The levels of serum in the recovery phase of the MMP group was significantly higher than those in the control group （P < 0.05）. IL-4 levels was lower than those in the control group. The levels of sB7-H3， IFN-γ， GM-CSF and IL-17 in the serum of MPP group were significantly higher than those of mild MPP （P < 0.05）. There was no statistical difference in IL-4 levels between the two groups （P > 0.05）. Serum level of sB7-H3 was positively correlated with IFN- and GM-CSF in acute phase of MPP （r = 0.573， 0.682， all P < 0.01）， but not significantly related to the levels of IL-4 and IL-17 （P > 0.05）. Conclusion sB7-H3 and cytokines IFN-γ， GM-CSF， IL-4 and IL-17 play an important role in the infection of children with MPP and participate in the pathogenesis of MPP.The levels of them is related to the severity of the disease.endprint

[Key words] Mycoplasma Pneumoniae； Pneumonia； Soluble B7-H3； Cytokines

肺炎支原體（Mycoplasma Pneumonia，MP）是兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見病原體之一[1-2]，兒童肺炎支原體肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP）發(fā)病率占社區(qū)獲得性肺炎的10.0%～21.9%，高峰年可以達到40%，并且發(fā)病年齡有所提前[3]。由于MP與人體某些組織器官存在著部分共同抗原，感染后表現(xiàn)為持續(xù)高熱、全身炎癥反應(yīng)綜合征等多器官的免疫損害和多系統(tǒng)并發(fā)癥發(fā)生，嚴(yán)重損害兒童身體健康[4-5]。

目前MPP的發(fā)病機制主要集中在MP促進某些炎癥介質(zhì)和細胞因子的釋放，導(dǎo)致機體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，從而引起機體免疫損傷，進而引發(fā)疾病[3，6]。MPP病程密切相關(guān)的可溶性B7-H3（Soluble B7-H3，sB7-H3）可以對一些細胞因子起到增強作用[7]，而且MPP患者外周血中T細胞和輔助性T細胞（T helper cell，Th）的比例發(fā)生改變[2]，影響MPP病程的進展。因為MPP的發(fā)病中免疫反應(yīng)具體表現(xiàn)及相應(yīng)細胞因子變化的具體過程尚且不是十分清楚。通過分析MPP患兒血清中sB7-H3以及γ干擾素（Interferon-γ，IFN-γ）、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macro？鄄phage colony stimulating factor，GM-CSF）、白介素4（interleukin 4，IL-4）、IL-17的表達水平，探討sB7-H3和細胞因子與MPP病情發(fā)展的關(guān)系，為MPP的病情診斷、評估、干預(yù)及預(yù)后判斷提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年1月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院兒科住院治療的MPP患兒110例（MPP組），根據(jù)患兒病情將其分為輕癥MPP組、重癥MPP組。另外選擇同期健康體檢兒童作為正常對照組。輕型MPP的診斷標(biāo)準(zhǔn)：雙份血清MP特異性抗體檢測，IgM由陰性轉(zhuǎn)為陽性或IgG增高或降低4倍以上；咳嗽、發(fā)熱因急性肺炎入院，肺部實變體征，X線所見遠較體征顯著；頭孢類或者青霉素治療無效；不合并其他病原體感染。重癥MPP組54例，男26例，年齡（4.76±2.54）歲，除滿足輕癥診斷標(biāo)準(zhǔn)外，還需要滿足重型MPP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。輕癥MPP組56例，男32例，年齡（3.82±2.71）歲，所有患兒均符合MPP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組健康兒童38例，男18例，年齡（3.87±1.54）歲。本研究中MPP患兒與健康對照組兒童年齡及性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性，并且獲得家屬簽署知情同意書，并得到醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意。

1.2 標(biāo)本采集

MPP患兒入院后24 h急性期內(nèi)及出院前24 h恢復(fù)期內(nèi)，分別抽取靜脈血5 mL，包括對照組的38名健康兒童。4℃，2500 r/min離心5 min，分離獲得上層血清，-80℃冰箱保存，待用。

1.3 檢測方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測MPP患兒血清中sB7-H3及IFN-γ、GM-CSF、IL-4、IL-17的表達水平。sB7-H3試劑盒購買自蘇州旭光科星生物技術(shù)有限公司，IFN-γ、GM-CSF、IL-4、IL-17試劑盒購買自美國R&D公司。操作嚴(yán)格按說明書進行，經(jīng)過設(shè)置不同的標(biāo)準(zhǔn)孔、加樣、洗滌及溫浴、顯色、終止步驟后。于全自動酶標(biāo)儀分析系統(tǒng)（Thermo Scientific，美國）上測492 nm處的吸光度OD值后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔OD值計算樣本濃度（采用3個復(fù)孔檢測）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；采用Pearson直線相關(guān)分析，GraphPad Prism 5.0作圖，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MPP組患兒急性期與恢復(fù)期血清共刺激分子sB7-H3及相關(guān)細胞因子表達水平的比較

MPP組急性期患兒血清sB7-H3及相關(guān)細胞因子的水平明顯高于恢復(fù)期組以及對照組（P < 0.05）。急性期患兒血清IL-4的表達水平低于恢復(fù)期患兒及對照組（P < 0.05）?；謴?fù)期患兒血清中sB7-H3、IFN-γ、GM-CSF、IL-17水平明顯高于對照組，IL-4的水平低于對照組（P < 0.05）。

2.2 重癥MPP組和輕癥MPP組急性期血清sB7-H3與相關(guān)細胞因子表達水平的比較

重癥MPP組血清中sB7-H3、IFN-γ、GM-CSF、IL-17的水平明顯高于于輕癥MPP組（P < 0.05），重癥MPP組與輕癥MPP組之間IL-4表達水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

2.3 MPP組患兒急性期血清共刺激分子sB7-H3水平與IFN-γ、GM-CSF、IL-4、IL-17表達水平的相關(guān)性

110例MPP急性期患兒血清sB7-H3水平與IFN-γ、GM-CSF呈正相關(guān)（r=0.573、0.682，均P < 0.01），而與IL-4、IL-17表達水平無顯著相關(guān)性（r=0.124，P > 0.05）。

3 討論

MP的致病機制主要集中在免疫損害學(xué)說，此被認(rèn)為可能是MPP主要的病理學(xué)基礎(chǔ)[3]。細胞因子在MP感染后能夠使患兒體內(nèi)免疫反應(yīng)發(fā)生紊亂[9]。機體內(nèi)環(huán)境的平衡是由促炎因子和抑炎因子共同相互作用、相互促進完成的，無論哪一個炎性因子或抗炎因子表達的過度都會造成機體自身穩(wěn)態(tài)的失衡進而引起疾病的發(fā)生。endprint

sB7-H3對T細胞的正性調(diào)節(jié)作用主要表現(xiàn)為促進CD4+細胞的增殖分化，促進分泌IFN-γ等細胞因子；負性調(diào)節(jié)作用主要表現(xiàn)為抑制Th1和Th2細胞的增殖分化，同時下調(diào)分泌IFN-γ、IL-4等細胞因子，參與機體的免疫調(diào)控[10-11]。本次研究結(jié)果顯示sB7-H3參與MPP的發(fā)病機制，且與MPP病情的輕重有關(guān)，同Chen等[10]的研究一致，sB7-H3在MPP的免疫發(fā)病機制中起重要作用，可作為預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)志分子。

INF-γ活化巨噬細胞和單核細胞后可以清除MP，并且能夠促進了NK細胞以及T淋巴細胞的抗感染能力，表明在炎性損害的免疫應(yīng)答中IFN-γ發(fā)揮重要保護作用[12]。本次研究結(jié)果提示IFN-γ在MPP患兒發(fā)病機制中起到保護性作用，可能是因為它的高水平可以控制炎性損害時的適應(yīng)性及固有免疫應(yīng)答。孟戰(zhàn)備[13]研究發(fā)現(xiàn)INF-γ對機體有保護作用，MP感染的患兒急性期INF-γ水平升高，可見INF-γ在MP感染過程中發(fā)揮了重要作用，是具有保護性的細胞因子，同本次研究結(jié)果一致。GM-CSF是由損傷的內(nèi)皮細胞釋放的炎性反應(yīng)的敏感標(biāo)志物，可促進造血祖細胞分化成單核-巨噬細胞，并具有維持單核-巨噬細胞的生長、繁殖和分化的能力[14]。MPP患兒GM-CSF水平的升高，可能與患兒體內(nèi)的T、B淋巴細胞比例失衡有關(guān)，也可能與患兒體內(nèi)淋巴細胞處于活化狀態(tài)有關(guān)。IL-4可減輕MP所致的炎性反應(yīng)，有利于機體清除抗原[15]。根據(jù)本次結(jié)果筆者推測急性期IL-4水平降低，可能與MP感染后Th1細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)增強，對Th2細胞免疫反應(yīng)產(chǎn)生抑制有關(guān)，與孫立峰等[16]研究結(jié)果相似。IL-17是新發(fā)現(xiàn)的一種由Th17細胞亞群分泌的細胞因子，在感染性疾病中發(fā)揮重要作用，包括調(diào)節(jié)細胞因子的釋放，促進炎性反應(yīng)等作用[17-19]。本次結(jié)果提示IL-17與MPP的致病過程有關(guān)，與陸敏等[20]研究結(jié)果相似。IL-17水平與MPP病情輕重有關(guān)，病情越重，IL-17水平越高。

sB7-H3與IFN-γ、GM-CSF相關(guān)性結(jié)果提示sB7-H3一方面通過對Th1/Th2平衡起雙向調(diào)節(jié)作用，促進IFN-γ等細胞因子生成；另一方面通過過度表達來調(diào)控單核-巨噬細胞等炎癥細胞，促進GM-CSF等炎癥因子的分泌而損傷機體。共刺激分子sB7-H3及相關(guān)細胞因子IFN-γ、GM-CSF、IL-4、IL-17的表達水平與病情嚴(yán)重程度有關(guān)，在臨床中可以通過對MPP患兒全病程監(jiān)測sB7-H3及相關(guān)細胞因子水平變化，對于參與損傷機制的細胞因子，用特異性抑制劑或細胞因子抗體去中和有害的細胞因子，從而達到治療疾病且不破壞機體正常免疫功能的目的。

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（收稿日期：2017-08-30 本文編輯：任 念）endprint