□ 李雪 王琳 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司

鹽酸副玫瑰苯胺法測定亞硫酸鹽殘留量的改進(jìn)研究

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通過對二氧化硫吸收劑乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）、三乙醇胺和甲醛的對比及鹽酸副玫瑰苯胺法的影響因素研究，得到了一種無汞吸收鹽酸副玫瑰苯胺法的最優(yōu)檢測條件，為食品中亞硫酸鹽監(jiān)督管理和現(xiàn)場檢測提供參考和借鑒。

亞硫酸鹽 鹽酸副玫瑰苯胺法 吸光度

引言

濫用食品添加劑已成為食品安全的突出問題[1、2]，因亞硫酸鹽具有良好的漂白、防腐、抗氧化、抑制細(xì)菌生長、控制酶促褐變等作用[3、4]，被允許作為食品添加劑廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中。通常情況下該物質(zhì)以焦亞硫酸鉀、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉等形式添加于食品中，或采用硫磺熏蒸的方式用于食品處理。但亞硫酸鹽具有一定的毒性，過量攝入會造成紅細(xì)胞、血紅蛋白減少，損害胃腸和肝臟健康[5]。最新的研究發(fā)現(xiàn)，哮喘病患者食用含有亞硫酸鹽的食品或飲料時，可能會像吸入了二氧化硫氣體一樣會誘發(fā)過敏性疾病[6]，這就迫切需要研究食品中亞硫酸鹽殘留量的快速檢測技術(shù)。

目前，食品檢測中亞硫酸鹽的快速檢測多依據(jù)現(xiàn)有的GB/T 5009.34-2003《食品中亞硫酸鹽的測定》中鹽酸副玫瑰苯胺法。該方法操作簡單、靈敏度高，但因使用了劇毒的四氯汞鈉作為二氧化硫吸收液，易對環(huán)境造成汞污染且檢測時間較長，不太符合食品快速檢測的要求。本文通過對二氧化硫具有吸收作用的EDTA-2Na、三乙醇胺、甲醛的對比研究[7-9]及其應(yīng)用于鹽酸副玫瑰苯胺法中影響因素的研究，得到一種無汞吸收鹽酸副玫瑰苯胺法的最優(yōu)檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液100mg/L；去離子水；甲醛：質(zhì)量分?jǐn)?shù)37%~40%；濃鹽酸：質(zhì)量分?jǐn)?shù)36%~38%；氫氧化鈉、鹽酸副玫瑰苯胺、EDTA-2Na、三乙醇胺等，均為分析純；分光光度計(jì)：U-5100 HITACHI。

1.2 試劑配制

100g/L甲醛溶液：取10mL甲醛溶液（37%~40%）用去離子水定容到100mL，臨用時用水將甲醛吸收液稀釋成所需濃度；配制50g/L的EDTA-2Na和三乙醇胺溶液；氫氧化鈉配制成濃度分別為0.5mol/L、1mol/L、1.5mol/L、2mol/L、3mol/L、4mol/L、5mol/L的溶液備用；按照GB/T 5009.34-2003中的方法配制鹽酸副玫瑰苯胺溶液備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

取待測溶液2mL于離心管中，加入80μ二氧化硫吸收溶液搖勻，后加入0.1mL氫氧化鈉溶液搖勻，最后加入0.1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，反應(yīng)后用分光光度計(jì)測量溶液吸光度。

3 二氧化硫吸收液的選擇

將100g/L甲醛溶液用去離子水稀釋到50g/L，二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液100mg/L用去離子水稀釋成5mg/L的二氧化硫使用液。分別取5mg/L的二氧化硫使用液2mL于3個離心管中，分別加入80μ二氧化硫吸收液50g/L甲醛溶液、50g/L的EDTA-2Na和三乙醇胺溶液搖勻，然后加入0.1mL氫氧化鈉溶液搖勻，最后加入0.1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，反應(yīng)一定時間后用分光光度計(jì)測量溶液的吸光度。

表1 EDTA-2Na、三乙醇胺、甲醛吸收二氧化硫后吸光度隨時間的變化

從表1可以看出，用甲醛作為二氧化硫吸收液時，加入氫氧化鈉和顯色劑后溶液吸光度變化迅速，且5分鐘后吸光度比較穩(wěn)定、變化很小。因此，實(shí)驗(yàn)應(yīng)選取甲醛溶液作為二氧化硫吸收劑，反應(yīng)時間為5分鐘。

4 用甲醛做二氧化硫吸收液，鹽酸副玫瑰苯胺法測定二氧化硫濃度的實(shí)驗(yàn)中溶液吸光度影響因素研究。

4.1 氫氧化鈉濃度對溶液吸光度的影響

分別取5mg/L的二氧化硫使用液2mL于7個離心管中，每管加入80μ 50g/L的甲醛溶液，搖勻后分別加入0.5mol/L、1mol/L、1.5mol/L、2mol/L、3mol/L、4mol/L、5mol/L 的 氫氧化鈉溶液0.1mL，搖勻，最后加入0.1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，反應(yīng)5分鐘后用分光光度計(jì)測量溶液吸光度。

從圖1可以看出，溶液吸光度在開始階段隨著氫氧化鈉濃度的增加而增加，當(dāng)氫氧化鈉濃度增加到2mol/L后繼續(xù)增加氫氧化鈉溶液吸光度變化很小，當(dāng)氫氧化鈉溶液濃度增加到3mol/L后溶液吸光度隨著氫氧化鈉濃度的增加急劇下降。因此，實(shí)驗(yàn)選擇氫氧化鈉濃度為2mol/L。

4.2 吸收液甲醛濃度對溶液吸光度的影響

將100g/L甲醛溶液用去離子水分別稀釋成5g/L、10g/L、25g/L、50g/L、80g/L、100g/L的甲醛使用液備用。分別取5mg/L的二氧化硫使用液2mL于6個離心管中，分別加入80μ上述甲醛使用液，搖勻后加入2mol/L的氫氧化鈉溶液0.1mL搖勻，最后加入0.1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，反應(yīng)5分鐘后用分光光度計(jì)測量溶液吸光度。

從圖2可以看出，溶液吸光度于開始階段隨著甲醛溶液濃度的增加而增加，甲醛溶液濃度增加到25g/L后溶液吸光度隨著甲醛濃度的增加而緩慢下降。因此，實(shí)驗(yàn)時選擇濃度為25g/L左右的甲醛溶液較好。

4.3 溶液吸光度與二氧化硫濃度的關(guān)系

將100mg/L的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液用去離子水分別稀釋成1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L 的二氧化硫使用液備用。分別取上述二氧化硫使用液2mL于6個離心管中，均加入25g/L的甲醛使用液80μ，搖勻后加入2mol/L的氫氧化鈉溶液0.1mL搖勻，最后加入0.1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，反應(yīng)5分鐘后用分光光度計(jì)測量溶液吸光度。

圖1 溶液吸光度隨氫氧化鈉濃度的變化

圖2 溶液吸光度隨甲醛溶液濃度的變化

圖3 吸光度隨溶液中二氧化硫濃度的變化

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從圖3可以看出，溶液吸光度隨溶液中二氧化硫濃度的增加而增加，且線性擬合度很好。

5 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，甲醛溶液作為二氧化硫吸收劑時加入氫氧化鈉和顯色劑后溶液吸光度升高較快，且反應(yīng)5分鐘后吸光度變化很小，比較穩(wěn)定。

甲醛吸收液濃度為25g/L、氫氧化鈉溶液濃度為2mol/L時，加入鹽酸副玫瑰苯胺溶液后溶液吸光度升高較快，反應(yīng)5分鐘后吸光度較穩(wěn)定，且溶液吸光度隨著二氧化硫濃度的增加線性擬合度很好。

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