李明遠+敖地秀

2017年6月25日，又見到小姜通過微信發(fā)來的菊花照片（圖1），詢問這是什么??？我看到病秧下部有些發(fā)黑，一些葉片萎蔫，就回復他這有可能是一種侵染性病害，具體是什么病害，還需要將病苗鑒定一下才知道。

6月27日我們就收到他快遞寄來的病秧。從包裝上看是來自廣州的一個育苗場。打開一看原來就是用微信發(fā)來的照片中那幾株病菊花。發(fā)病的植株有明顯的特點，即每株都是有1～2個枝子發(fā)病，病蔓發(fā)黑，多數(shù)病斑都集中在莖的一側，自下向上延伸。凡生在莖部病斑擴展處，葉片即枯死。這類病況有些像是我們此前鑒定過的瓜類枯萎病。

我在微信上將初步鑒定結果告訴他，并說還需要做些工作才能肯定，希望他能再給我們提供一些栽培和發(fā)病過程的信息。例如扦插、定植與發(fā)病的時間、發(fā)病菊花品種等。過了一會兒，他將和客戶對話的記錄發(fā)給我，但并不是我想知道的內容。于是我就向他要了客戶的電話，直接對話。通過溝通，我們了解到這個發(fā)病品種叫‘滿地黃，是一種地被菊。2017年3月育苗，5月定植。不過在定植的時候就有死的。我問他以前是否發(fā)現(xiàn)過，他說，以前也有，但是不多。

為了更好的交流，我們還互相加了微信。有了微信，他給我發(fā)來許多圖片。包括育苗棚的照片（圖2）、苗床上植株發(fā)病的照片（圖3）、用沖水法洗沙防病的照片以及使用過的農藥，包括百菌清、精甲·惡霉靈、精甲、醚菌酯、好迪施、吡唑醚菌酯等包裝的照片。他說這些農藥都用過，但效果不明顯。他提供的信息及照片對我們的鑒定起到一定地幫助。

但是更重要的是要分離到病原。于是我們便開始分離病原菌的工作。以前我們鑒定過黃瓜、冬瓜、辣椒的枯萎病，可以使用組織分離及直接挑取病菌的方法得到病原菌。我仔細看了寄來的標本，發(fā)現(xiàn)植物發(fā)病部位已經(jīng)長出了白霉——一種致病的病菌，我們直接用挑取病菌孢子的方法對病原進行了分離。分離時，我用了2種培養(yǎng)基?；A培養(yǎng)基都是PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基），不同的是其中1種加1滴25%的消毒乳酸，另1種不加。從病株獲取病菌孢子使用的是轉移細菌的接種環(huán)蘸取病菌孢子的方法，在2種培養(yǎng)基表面劃線。第2天去看，發(fā)現(xiàn)未使用乳酸的平板上長出了大量的細菌，分離失敗。而加了乳酸的培養(yǎng)皿，則在第3天見到長出真菌。挑取菌苔，見到的菌絲無色，初為棉絮狀，白色，后在平板的背面變?yōu)樽霞t色（圖6），同時有大量無隔的、長圓形的小孢子（圖4）出現(xiàn)，據(jù)我的經(jīng)驗，它有可能就是侵染菊花的枯萎病菌。接下來就需對病菌進行擴繁，再將其回接到菊花上，了解它的侵染性。7月1日我們將病原菌在PDA平板上進行擴繁，準備進行人工接種。

此時，我們想到，枯萎病菌對不同的菊花品種的侵染力差異很大，應當使用容易發(fā)病的菊花品種。最好請廣州那邊寄來這些‘滿地黃。通過微信，我將這個想法告訴了對方。他也很幫忙，很快就寄出了。但是快遞正趕上周末，5天才收到。此時正是全國最熱的7月中旬，打開一看，這些包在塑料袋里的植株在高溫高濕的條件下，許多葉片都已經(jīng)發(fā)黑腐爛。更糟糕的是，他沒有理解我們的意思，寄來的不是‘滿地黃的健苗，而是一些病株。這些病株的葉片已爛掉，在發(fā)病的莖上長滿了白霉，在顯微鏡下都是鐮刀菌（圖5）。雖然這次給我們補充了一些病害的標樣，但是我們更需要的是‘滿地黃的健康植株。為了避免再出問題，我們讓對方再寄苗子時注意以下幾點：①不用塑料膜包住。②僅需要剛生根的健苗。③寄到的時間不要趕上周末。再寄的苗子仍用了3天的時間，雖有個別植株（有可能是病株）死亡，但是寄來的數(shù)量較多，做回接完全夠用。還將剩余的苗子栽在一個方盤中，以備不測。

這次回接使用的菊花枯萎病菌接種物是使用玉米沙培養(yǎng)基擴繁的，即用在該培養(yǎng)基上培養(yǎng)1周的菊花枯萎病菌（培養(yǎng)期間每天將基物搖開）。栽苗時使用經(jīng)過滅菌的土壤（其中加有1/3的育苗基質）。每缽60 g滅菌土，用其1/2先與6 g接種物混勻，取其1/3鋪在缽底，放上廣州寄來的‘滿地黃后再將余下的2/3放入缽中，最后將余下的30 g消毒土蓋在上面。另取5株廣州寄來的‘滿地黃菊花，不加接種物，僅使用消毒土定植，作為對照。1周后進行了調查。但是無論接種還是對照都不發(fā)病。又過1周發(fā)現(xiàn)處理或對照都有些萎蔫，最后對照和處理以及剩下來備用的‘滿地黃菊花都死得一株不剩，試驗失敗。我們分析有可能這些菊花不耐熱，在快遞過程中根已受到傷害，從而導致死亡。另外，我們還懷疑直接從病部挑取病原菌的方法不可靠，獲得的是一些腐生的鐮刀菌。于是我們又找出了當初廣州寄來的病株，再次用組織分離法分離了一次病原菌。這次分離得到的病菌和上次的病菌在形態(tài)上相同（圖6）。

我們就用通過組織分離得到的新病原菌繼續(xù)試驗。考慮到當時的天氣仍比較熱，不易再請廣州寄來‘滿地黃菊花進行接種。于是使用了我們菊花基地現(xiàn)成的品種‘玉臺一號，并用蘸根法和插孔灌菌液法進行了接種。蘸根法的具體做法是接種前用無菌水從平板上洗下分離得到的枯萎病菌孢子，再將3株無病菊苗拔下洗凈，在菌液中蘸一下，定植到缽中。插孔灌菌液法是取3缽無病苗澆足水后在植株周圍均勻地用竹筆桿打3個孔，分別注入5 mL病菌懸液。以不處理的為對照，分別送回溫室培養(yǎng)，第26天進行調查。結果表明采用上述2種方法接種病原菌的植株均死亡，而對照正常生長（圖8～10）。證明了我們分離到的病菌確實是菊花枯萎病菌。

此外，我們還觀察了病菌的孢子形態(tài)。鑒于該類病菌在培養(yǎng)基上多為無隔的小型孢子。我們直接用了由病部挑下的霉層進行觀察（圖7）。即分別取不同隔數(shù)的孢子30個，在裝有計算軟件的顯微鏡下得出不同隔數(shù)孢子的大小與平均數(shù)。結果如下：

◆ 無隔孢子大小：（5.67～16.55）μm×（1.97～4.54）μm（平均8.45 μm×2.89 μm，占70.59%）；

◆ 1隔孢子大小：（8～22.84）μm×（2.13～4.39）μm（平均14.61 μm×3.38 μm，占19.41%）；

◆ 2隔孢子大小：（8.42～25.11）μm×（2.58～4.44）μm（平均15.59 μm×3.80 μm，占6.67%）；endprint

◆ 3隔孢子：（12.98～29.48） μm×（2.96～5.0） μm（平均21.83 μm×3.94 μm，占3.14%）；

◆ 4隔孢子：（8.82～24.89） μm×（3.32～5.39） μm（平均25.60 μm×41.33 μm，占0.20%）。

根據(jù)病菌的形態(tài)和大小對照有關的文獻，證明了廣州某育苗場寄來的菊花病樣的確為菊花枯萎?。‵usarium oxysporium Schl.f. chrysanthemi Snyd. & hans.）[1-3]。

我們將結果告訴小姜。他一面感謝我們，一面和我們探討了菊花枯萎病的防治方法。最后我建議的防治方法如下：

◆ 苗床消毒 目前有許多地方使用沙床進行育苗，應注意苗床的清潔。清潔的方法有多種，包括更新育苗床上的河沙?？筛鶕?jù)枯萎病的發(fā)生情況來決定更換的時間。此外，還可以利用太陽能進行苗床的消毒，消毒的時間可選在6～8月休閑的時候進行。即用塑料膜將沙床扣嚴，打開苗床上方的覆蓋物，在陽光下暴曬2周，利用高溫殺死病菌。建議不要使用沖水的方法企圖將病菌洗掉，實際上這樣只能起到幫它傳播的作用。

◆ 利用抗病品種 菊花不同品種間的抗病性差異較大，做地被菊使用的菊花可以選擇同一顏色的抗病品種替代。

◆ 從無病植株上采新枝條繁殖幼苗 發(fā)現(xiàn)病株及時拔除并在病穴處灌施農藥（所用農藥品種及劑量見“化學防治”）。

◆ 嫁接 遇到珍貴的品種可使用嫁接的方法，換根防病。使用抗病的菊花作為砧木，或野生的菊科植物，包括蒿屬的抗病材料，選取的接穗必須來自無病的植株。

◆ 重病田采用非菊科植物進行輪作 盆栽時使用無病土或基質，栽前對容器用藥消毒。消毒可用1000～1500倍高錳酸鉀浸泡20 min以上。

◆ 雨季前修好排灌系統(tǒng)，雨后及時排水 雨水不但利于傳病，而且菊花怕雨澇，泡水后會降低菊花植株的抗性[2]。

◆ 化學防治 扦插和定植時使用殺菌劑蘸芽、蘸根或潑澆。可用的農藥有：50%的多菌靈可濕性粉劑500倍液、50%甲基硫菌靈懸浮劑600倍液、45.5%噁霉·福可濕性粉劑700倍液、50%氯溴異氰尿酸可溶性粉劑1500倍液、30%苯噻氰乳油1500倍液、20%抗枯靈水劑500倍液等，每10天/次，連續(xù)防治3～5次[3-4]。

參考文獻

[1] 方中達.中國農業(yè)植物病害[D].北京：中國農業(yè)出版社，1996：594.

[2] 韓金聲.中國藥用植物病害[D].長春：吉林科學技術出版社，1999：309-340.

[3] 呂佩珂，段半鎖，蘇慧蘭，等.中國花卉病蟲原色圖鑒[D].北京：藍天出版社，2001：449.

[4] 雷增普.中國花卉病蟲害診治圖譜[D].北京：中國城市出版社，2005：90.endprint