鄒登峰+謝愛(ài)澤+趙理云+陳佳怡+朱華

摘要：利用色譜法和波譜法對(duì)金花茶（Camellia nitidissima Chi）的化學(xué)成分進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果從金花茶中分離出3種化合物，分別為蘆丁、Apigenin 6，8-di-C-β-glucopyranoside、肌醇。其中蘆丁和Apigenin 6，8-di-C-β-glucopyranoside為黃酮類(lèi)化合物。

關(guān)鍵詞：金花茶（Camellia nitidissima Chi）；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）21-4124-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.21.032

The Chemical Constituents of Camellia nitidissima

ZOU Deng-feng1，XIE Ai-ze2，ZHAO Li-yun1，CHEN Jia-yi1，ZHU Hua3

（1.Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China；2.The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021， China；3.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

Abstract： The chemical constituents of Camellia nitidissima were separated by chromatography and their structures were identified by spectral analysis. Three compounds obtained from Camellia nitidissima were rutin（1）， apigenin 6，8-di-C-β-glucopyranoside（2），lyoniside（3），in which，compound 1 and 2 were flavonoids.

Key words： Camellia nitidissima Chi； chemical constituents； structural identification

金花茶（Camellia nitidissima Chi）系山茶科山茶屬金花茶組植物，是廣西的特殊資源植物[1]。分布于廣西與越南邊境一帶，廣西被譽(yù)為金花茶的故鄉(xiāng)[1]。金茶花是中國(guó)特種名花，被譽(yù)為“茶族皇后”“植物界大熊貓”和“東方魔茶”[2]。金花茶有清熱解毒、利尿消腫，常用于咽喉炎、腎炎、高血壓等疾病的治療[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，金花茶具有明顯的降血糖[4]、抑制肝癌[5]、抗氧化[6]等多種功效，尤其對(duì)糖尿病有顯著療效。為了明確金花茶的有效物質(zhì)，研究對(duì)其提取物中的化學(xué)成分進(jìn)行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定，得到3種化合物，為進(jìn)一步對(duì)金花茶的研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ESIMS在Agilent 5973N氣相色譜/四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀上測(cè)定；1D和2D NMR在Bruker AM-400、DRX-500及AVANCE III-600MHz超導(dǎo)核磁共振儀上測(cè)定，TMS作為內(nèi)標(biāo)；Waters制備型高效液相色譜儀；LC-20A分析型高效液相色譜儀，色譜柱為Agilent公司的ZORBAX SB-C18反相柱；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；BS400S型電子天平；層析用硅膠（100～200目，200～300目）（青島海洋化工廠）；反相填充材料RP-18為40～60 μm，Merk公司生產(chǎn)；MCI填充材料為MCI-gel CHP-20P；凝膠為Sephadex LH-20；顯色劑為10% H2SO4乙醇溶液，噴灑后適當(dāng)加熱。

1.2 提取與分離

干燥的金花茶2.5 kg，適當(dāng)粉碎后，用適當(dāng)比例的乙醇水提取至提取液無(wú)色，合并提取液，減壓蒸餾除去溶劑，溶劑回收，粗提物懸浮于水中。分別用一定體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇多次萃取，減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯、正丁醇和水4個(gè)萃取部位。取乙酸乙酯部位用硅膠拌樣，采用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，依次用氯仿-甲醇（1∶0，9∶1，8∶2，2∶1，1∶1，0∶1）進(jìn)行洗脫，用TLC進(jìn)行檢測(cè)，合并相同餾分，得到6個(gè)部分，分別標(biāo)記組分1至組分6。組分4（30 g）進(jìn)一步用硅膠柱色譜和半制備液相色譜分離得到3種化合物[7]。

2 結(jié)果與分析

根據(jù)MS和NMR分析，從金花茶乙酸乙酯部分分離獲得的3種化合物，結(jié)構(gòu)鑒定如圖1所示。

化合物1：黃色粉末。在該化合物的1H-NMR （DMSO-d6，400 MHz）譜的低場(chǎng)氫信號(hào)區(qū)，顯示5組氫峰信號(hào)（圖2）。這些信號(hào)的積分比為1∶1∶1∶1∶1，它們分別是δ：7.52（1H，dd，J=8.3，2.2 Hz，H-6′）、7.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-2′）、6.82（1H，d，J=8.3 Hz，H-5′）、6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）。在化合物1的13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）圖譜中（圖3），除去溶劑峰外，可以明顯找到27根碳信號(hào)峰，其中低場(chǎng)區(qū)有17根信號(hào)。結(jié)合DEPT圖譜可知，在該化合物的27根碳信號(hào)峰中無(wú)甲氧基峰，但有1個(gè)甲基峰，1個(gè)亞甲基峰，15個(gè)次甲基峰和8個(gè)季碳峰。綜合氫譜和碳譜的峰特征，可以初步判定該化合物為一個(gè)黃酮苷。其中在1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中顯示的δ 6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）為該黃酮A環(huán)上的信號(hào)，根據(jù)這兩個(gè)信號(hào)的耦合常數(shù)2.0 Hz，可以初步判定該環(huán)為5，7-二取代芳環(huán)。同時(shí)該化合物的1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）譜中顯示的δ 7.52（1H，dd，J=8.3，2.2 Hz，H-6′）、7.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-2′）、6.82（1H，d，J=8.3 Hz，H-5′）3個(gè)信號(hào)峰為該化合物的B環(huán)信號(hào)峰，且這3個(gè)信號(hào)為經(jīng)典的ABX系統(tǒng)，所以B環(huán)應(yīng)為3，4-二取代。而C環(huán)質(zhì)子信號(hào)消失，結(jié)合13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）譜δ 133.2（C-3）可知3位被氧取代。以上信息表明該黃酮母核為槲皮素（Quercetin）。1H-NMR（DMSO-d6， 400 MHz）譜和13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）譜還顯示l個(gè)葡萄糖片段，其端基氫和碳的信號(hào)分別為 δ 5.31（1H，d，J=7.6 Hz，H-l″）、δ 101.1（C-l″）；還有l(wèi)分子鼠李糖片段4.36（1H，d，J=7.5 Hz，H-l？蓯），100.7（C-1？蓯），0.96（3H，d，J=6.2 Hz，6？蓯-CH3），17.7（C-6？蓯）。經(jīng)仔細(xì)比對(duì)，以上化合物1H-NMR譜和13C NMR譜數(shù)據(jù)與周應(yīng)軍等[8]的研究數(shù)據(jù)一致，故化合物1鑒定為蘆丁，即3-{[6-O-（6-deoxy-α-Z-mannopyranosyl）-β-Z）-glucopyranosyl]oxy}-2-（3，4-dihydroxyphenyl）-5，7H-1-Benzopyran-4-one。化合物1的具體NMR譜數(shù)據(jù)如下。endprint

1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.52（1H，dd，J=8.3，2.2 Hz，H-6′），7.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-2′），6.82（1H，d，J=8.3 Hz，H-5′），6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.31（1H，d，J=7.6 Hz，H-l″），4.36（1H，d，J=7.5 Hz，H-l？蓯），0.96（3H，d，J=6.2 Hz，6？蓯-CH3）。13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.3（C-4），164.2（C-7），161.1（C-5），156.6（C-2），156.4（C-9），148.4（C-4′），144.7（C-3′），133.2（C-3），121.6（C-1′），121.1（C-6′），116.2（C-5′），115.2（C-2′），103.9（C-10），101.1（C-1″），100.7（C-1？蓯），98.7（C-6），93.6（C-8），76.3（C-3″），75.8（C-5″），74.0（C-2″），71.8（C-4？蓯），70.5（C-3？蓯），70.3（C-2？蓯），69.9（C-4″），68.2（C-5？蓯），66.9（C-6″），17.7（C-6？蓯）。

化合物2：化合物1H-NMR（600 MHz，CD3OD） 圖譜的低場(chǎng)區(qū)（δ 9.0～14.0）氫信號(hào)（圖4），顯示3組單峰信號(hào)，其中δ 13.68（1H，s，5-OH）為尖峰，而δ 10.44（1H，br s，7-OH）、δ 9.31（1H，br s，4′-OH）兩組峰信號(hào)卻為寬單峰。而且1H-NMR圖譜的低場(chǎng)區(qū)（δ 6.7～8.1）的氫信號(hào)分別是δ 8.01（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），6.87（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′）和δ 6.79（1H，s，H-3），其中δ 8.01（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′）、6.87（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′）為鄰位耦合信號(hào)，表明化合物中具有一個(gè)AA′BB′苯環(huán)系統(tǒng)，結(jié)合13C NMR譜中有兩個(gè)信號(hào)（δ 116.0和δ 129.2）峰高約為其他C信號(hào)的兩倍，可以推斷化合物中具有1，4-二取代苯環(huán)片段。在化合物2的13C NMR（150 MHz，CD3OD）圖譜中（圖5），在高場(chǎng)區(qū)（δ 55.0～85.0）可以明顯找到12根碳信號(hào)峰，結(jié)合DEPT圖譜可知，其中有2個(gè)被氧化的亞甲基峰，分別是δ 61.4（C-6）、 δ 59.9（C-6″）。另外在該區(qū)還有10個(gè)被氧化的次甲基峰，初步推斷分子中可能存在兩個(gè)葡萄糖。而在化合物2的13C NMR譜的低場(chǎng)區(qū)（δ 100.0～190.0）卻只可以明顯找到11根碳信號(hào)峰，另外還有一些不明顯的矮信號(hào)峰。結(jié)合DEPT圖譜可知，明顯的信號(hào)峰中只有3個(gè)次甲基峰，分別是δ 102.7、δ 116.0和δ 129.2，由以上推斷可知，δ 116.0和δ 129.2為化合物中具有1，4-二取代苯環(huán)片段中的C-2′，6′和C-3′，5′上的重疊碳信號(hào)，化合物分子中可能存在兩個(gè)葡萄糖，但在低場(chǎng)區(qū)（δ 100.0～190.0）除了1，4-二取代苯環(huán)片段中的C-2′，6′和C-3′，5′上的重疊碳信號(hào)外，只剩1根次甲基峰，所以這兩個(gè)葡萄糖可能不是氧苷，而很有可能是碳苷。從而也可以初步推斷這根次甲基峰可能是另一個(gè)五取代的苯環(huán)上的峰或可能是一個(gè)三取代的雙鍵上的峰。根據(jù)該化合物質(zhì)譜，除去兩個(gè)葡萄糖單元和一個(gè)1，4-二取代苯環(huán)片段，推斷分子中還可能存在一個(gè)苯環(huán)片段，另外根據(jù)碳譜中存在δ 182.4（C-4）信號(hào)峰，推斷化合物2可能是一個(gè)黃酮碳苷。通過(guò)與朱慧等[9]對(duì)照判斷這個(gè)化合物為Apigenin 6，8-di-C-β-glucopyranoside，結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1?；衔?具體的核磁譜數(shù)如下。

1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：13.68（1H，s，5-OH），10.44（1H，br s，7-OH），9.31（1H，br s，4′-OH），8.01（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），6.87（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），6.79（1H，s，H-3），4.77（1H，d，J=9.8 Hz，glucose H-1），4.73（H，d，J=9.8 Hz，glucose H-1），3.86-3.22（m，糖上其他氫）。13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：182.4（C-4），164.2（C-2），161.3（C-7，4′），158.7（C-5′），155.2（C-9），129.2（C-2′，6′），121.6（C-1′），116.0（C-3′，5′），107.6（C-6），105.4（C-8），104.0（C-10），102.7（C-3），82.0（C-5″），81.0（C-5），78.9（C-3），77.9 （C-3″），74.2（C-1″），73.5（C-1），72.0（C-2″），71.0（C-2），70.6（C-4），69.2（C-4″），61.4（C-6），59.9（C-6″）。

化合物3：白色粉末狀結(jié)晶，分子式C6H12O6。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：4.35～4.32（6H，m），3.68（1H，d，J=2.4 Hz），3.30（2H，m），3.10（2H，m），2.88（1H，m）（圖6）。13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：75.3，72.8，72.7，71.9（圖7）。以上數(shù)據(jù)與劉凈等[10]報(bào)道的肌醇一致，故鑒定為肌醇。

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