周 參

(公安部第一研究所 北京 102200)

毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性和均一性性能測(cè)試方法及分析

周 參

(公安部第一研究所 北京 102200)

本文針對(duì)用于DNA檢測(cè)的毛細(xì)管電泳儀，設(shè)計(jì)了重復(fù)性及均一性測(cè)試方法，并對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%，均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%，滿足DNA電泳需求。

毛細(xì)管電泳儀；重復(fù)性；均一性

毛細(xì)管電泳儀是自20世紀(jì)70年代以來(lái)在生物領(lǐng)域廣泛使用的分析儀器，由于毛細(xì)管電泳所需樣品量少、可以施加高壓進(jìn)而縮短電泳時(shí)間、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、可以實(shí)現(xiàn)對(duì)批量樣品的分析等優(yōu)點(diǎn)，毛細(xì)管電泳在生物高分子特別是DNA檢測(cè)方面發(fā)揮了巨大作用。本文以課題組自主研制的毛細(xì)管電泳儀為研究對(duì)象，對(duì)其電泳重復(fù)性和均一性進(jìn)行了測(cè)試。

一、實(shí)驗(yàn)試劑

LIZ500、甲酰胺、POP4膠、緩沖液、16通道毛細(xì)管陣列(均由ABI公司提供)。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1. 取5ul LIZ500與195ul甲酰胺混合，分裝到96孔板A1-A2行，每孔加入10ul樣品。

2. 將毛細(xì)管安裝到毛細(xì)管電泳儀上，毛細(xì)管兩端分別浸入到緩沖液中，并向毛細(xì)管中灌注POP4膠。

3. 采用電進(jìn)樣方式將LIZ500引入毛細(xì)管通道中。

4. 毛細(xì)管電泳儀對(duì)LIZ500進(jìn)行20次重復(fù)檢測(cè)，采集LIZ500各片段出峰時(shí)間，選取部分位點(diǎn)的數(shù)據(jù)對(duì)毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性和均一性進(jìn)行分析。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析:

1. 重復(fù)性

選取毛細(xì)管陣列中的第1根毛細(xì)管作為研究對(duì)象，選取75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的20次電泳的出峰幀數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果如圖1及圖2所示，第1根毛細(xì)管在20次電泳中，選取的每個(gè)DNA片段的出峰位置相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.6%，表明毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性效果很好。

2. 均一性

對(duì)同一組電泳中16根毛細(xì)管中 75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的出峰幀數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果如圖3及圖4所示，同一組電泳中，每根毛細(xì)管中選取的每個(gè)DNA片段的出峰位置相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.65%，表示毛細(xì)管電泳儀均一性效果很好。

四、總結(jié)

本文采用ABI的LIZ500試劑對(duì)毛細(xì)管電泳儀的重復(fù)性和均一性進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%，均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%，低于儀器分析相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差應(yīng)在2.0%以下的要求，表明課題組自主研制的毛細(xì)管電泳儀能夠滿足重復(fù)性及均一性測(cè)試要求，可以對(duì)DNA片段進(jìn)行分析。

圖1 重復(fù)性測(cè)試結(jié)果

圖2 重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖3 均一性測(cè)試結(jié)果

圖4 均一性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

[1]郭懷忠，畢開順，孫毓慶． 影響毛細(xì)管電泳分析結(jié)果重現(xiàn)性的因素及其控制[J]． 分析儀器， 2005，2: 42-45.