李倩，艾青青，蘭志瓊，鄭立, 王亞云，孫雪梅，盧先明

·品種品質(zhì)·

大黃藥材貯藏期間質(zhì)量及藥理作用變化研究

李倩，艾青青，蘭志瓊，鄭立, 王亞云，孫雪梅，盧先明

目的：研究貯藏期間大黃藥材的質(zhì)量以及藥理作用變化情況，為臨床藥用提供一定的參考。方法：對貯藏兩年內(nèi)大黃藥材的外觀質(zhì)量、干燥失重、浸出物含量進行動態(tài)觀測，并采用炭末法、毛細玻管法及斷尾法對貯藏一年后的兩組大黃藥材瀉下、凝血、止血作用變化研究。結(jié)果：隨著貯藏時間的延長，大黃藥材發(fā)生變質(zhì)現(xiàn)象、干燥失重降低、浸出物含量不符合標準；貯藏一年后的兩組大黃藥材仍有明顯瀉下作用，但止血和凝血作用不明顯。結(jié)論：大黃藥材在貯藏過程中，質(zhì)量會不斷變化；一年貯藏時間雖對大黃藥材的瀉下作用無明顯影響，但對其止血和凝血作用影響較大。

大黃；貯藏養(yǎng)護；藥效

大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatumL.唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinaleBaill.的干燥根及根莖[1]。是一味常用大宗藥材，味苦，性寒。具有瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)之功效。多用于實熱便秘，血熱吐衄，腸癰腹痛等證。由于大黃所含化學成分不穩(wěn)定，在貯藏過程中極易受到環(huán)境影響而產(chǎn)生蟲蛀、發(fā)霉、變色等變質(zhì)現(xiàn)象，嚴重影響此類藥材品質(zhì)和臨床療效。本文依據(jù)課題組前期研究，對低溫貯藏養(yǎng)護組和常溫條件貯藏組大黃藥材進行外觀性狀、干燥失重、浸出物含量等動態(tài)觀測，并對貯藏一年前后兩組大黃藥材的瀉下、止血和凝血作用作對比研究，探究貯藏前后大黃藥材的質(zhì)量變化規(guī)律，初步探討貯藏時間對其相關(guān)藥理作用的影響，以期為臨床用藥提供一定參考。

1 材料

1.1 實驗藥材

大黃藥材：采集于四川省綿陽市平武縣平通鎮(zhèn)新遠村麻子嶺，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學盧先明教授鑒定為蓼科植物藥用大黃Rheum officinaleBaill的干燥根及根莖。

1.2 實驗動物

①貯藏前：昆明種小鼠(一級)，雌雄各半，體重18～22g，由成都中醫(yī)藥大學醫(yī)學動物實驗中心提供，動物合格證號∶ SCXK(川)2008-11。②貯藏一年后：昆明種小鼠(一級)，雌雄各半，體重18～22g，由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，動物合格證號：SCXK（川）2004-15。

1.3 受試藥物

①貯藏前：大黃藥材。②貯藏一年后：與貯藏前為同批藥材。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

真空干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司，DZG-6090型）；電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司，202-2型）；水浴恒溫振蕩器（金壇市醫(yī)療儀器廠，SHZ-88）；微型植物試樣粉碎機（北京中興偉業(yè)儀器有限公司，F(xiàn)Z102）；電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司，DZKW-4型）；電子天平（YP601N型，上海精密科學儀器有限公司）；灌胃針；秒表；玻璃毛細管(內(nèi)徑0.9mm，長100mm)等。

2.2 試劑與試藥

白酒（60°高粱酒重慶江津酒廠有限公司）；乙醇(分析純 成都科龍化工試劑廠，批號：20060201)；活性炭末(分析純 重慶北碚精細化工廠，批號：20040912)；生理鹽水(0.9%，四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號：20071208)；云南白藥粉（云南白藥集團股份有限公司，批號：Z53020798）。

3 實驗分組

根據(jù)課題組前期研究，將大黃藥材分成兩組進行貯藏，一組為貯藏養(yǎng)護組，即低溫組；另一組為大黃藥材倉儲常用方法，即常溫組。兩組具體貯藏條件見表1。

表1 大黃貯藏養(yǎng)護方法設(shè)計試驗分組表

4 質(zhì)量觀測

4.1 外觀質(zhì)量

觀察大黃藥材的色澤、氣味、蟲蛀、吸潮、霉變五項外觀質(zhì)量指標的變化程度，以分數(shù)評定，每項滿分2分。貯藏前均為滿分10分。色澤使用RALK7色標卡進行評分，色澤淺黃色系（色標卡編號：1003～1037）和深黃色系（色標卡編號：2000～2011）不扣分，棕黃色系（色標卡編號：3000～3016）扣0.5分，黃褐色系（色標卡編號：8001～8025）扣1分；氣味變淡或有異味者，扣1分；吸潮程度根據(jù)水分含量測定評分，超過2015版《中國藥典》相關(guān)項下規(guī)定者，扣2分；蟲蛀程度：少見蟲眼（蟲蛀藥材百分比：0～10%）扣0.5分，多見蟲眼（10%～20%）扣1分，多蟲眼和蛀粉（20%～30%）扣1.5分，多蛀空成粉（30%以上）扣2分；霉變藥材百分比為0～10%扣0.5分，10%～20%扣1分，20%～30%扣1.5分，30%以上扣2分。觀測結(jié)果具體見表2。

表2 大黃外觀質(zhì)量觀測結(jié)果

結(jié)果顯示：大黃貯藏后外觀質(zhì)量會變差。常溫組存放兩年后外觀性狀差異與貯藏前相比較大，提示大黃需要科學合理的養(yǎng)護方法來貯藏方能確保其外觀質(zhì)量；因低溫組與白酒同貯則有吸潮、色澤變深、白酒氣味重的現(xiàn)象，提示白酒不宜作為大黃貯藏的對抗劑。

4.2 干燥失重

照2015版《中國藥典》四部通則限量檢查法項下0831干燥失重測定法[2]。由減失的重量和取樣量計算大黃的干燥失重。結(jié)果見表3。

表3 大黃貯藏期間干燥失重含量

由表3可知：低溫組大黃貯藏期間干燥失重明顯增加，且超過了2015版《中國藥典》所規(guī)定的不得過15.0%[2]；常溫組貯藏8個月內(nèi)有吸潮現(xiàn)象，且干燥失重量超過了規(guī)定值，而貯藏12～24個月期間，其干燥失重量逐漸減少到規(guī)定范圍內(nèi)并保持一定水平，提示大黃藥材在貯藏期間有吸潮現(xiàn)象。

4.3 浸出物含量

照2015版《中國藥典》四部通則2201水溶性浸出物測定法項下的熱浸法[2]。測定結(jié)果見表4。

表4 大黃貯藏期間浸出物含量

數(shù)據(jù)顯示：在大黃的兩年貯藏期內(nèi)，兩組大黃浸出物含量均低于貯藏前，但均在2015版《中國藥典》規(guī)定值（不得少于25%）范圍內(nèi)，且常溫組低于低溫組，提示大黃在貯藏期間浸出物有逐漸減少的趨勢。

5 大黃貯藏期間藥理作用變化研究

根據(jù)大黃的功效，對貯藏前及貯藏一年后大黃藥材的瀉下、凝血、止血作用進行對比研究。

5.1 瀉下作用（炭末法[3]）

5.1.1 受試藥物的制備 稱取大黃粗粉100g，加8倍量水（800mL）浸泡30min[4]，煮沸15min后，過濾。于40～50℃濃縮至0.5g生藥/mL（200mL）。

5.1.2 實驗分組貯藏前 取健康小鼠20只，雌雄各半，隨機分為2組，每組10只，分別為（1）空白組（給予0.9%生理鹽水0.2mL/10g體重灌胃）（2）大黃水煎液組(簡稱大黃組）具體分組見表5。

貯藏一年后 取健康小鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，分別為（1）空白組（同上）（2）常溫組（3）低溫組。具體分組見表6。

5.1.3 實驗方法與結(jié)果 分組后連續(xù)給相應(yīng)藥物2d[4]，日灌胃量按表5、表6。然后禁食不禁水20～24h后，給以相應(yīng)炭末混懸藥液，含炭末0.1g?mL-1。此時開始計時，將小鼠分置于鋪有濾紙的籠內(nèi)進行觀察。記錄其出現(xiàn)黑便的時間，排黑便的數(shù)量、性狀以及稀糞沾染肛門的情況，連續(xù)觀察6h。用SPSS13.0版統(tǒng)計軟件對各組實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析[5]。結(jié)果見表5、6。

表5 貯藏前大黃對正常小鼠排便時間和數(shù)量的影響

表6 貯藏一年后大黃對正常小鼠排便時間和數(shù)量的影響

注：與空白對照組相比較，***P＜0.001。

結(jié)果顯示：與空白組相比，貯藏前大黃瀉下作用較強。貯藏一年后兩組大黃藥液均具有致瀉作用。且大黃常溫、低溫組的瀉下作用均較強，能明顯縮短排便時間(P＜0.001)，增加排便數(shù)量(P＜0.001)。

5.2 止血作用

5.2.1 毛細玻管法[6]受試藥物制備

陽性對照組 取云南白藥粉2.5g，加蒸餾水50mL，使其濃度為0.05 g?mL-1。

大黃組：稱取大黃粗粉150g，加8倍量95%乙醇浸泡2h，過濾。減壓回收乙醇，使成浸膏。浸膏用60mL的蒸餾水溶解，微加熱，趁熱過濾，然后再定容為120mL。使其濃度為1.25g生藥/mL。

常溫、低溫組制法均同大黃組。

實驗分組

貯藏前 取健康小鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，分別為（1）空白組（給予0.9%生理鹽水0.2mL/10g體重灌胃）（2）陽性組（云南白藥液）（3）大黃組。具體分組見表7。

表7 貯藏前大黃對小鼠凝血時間的影響

貯藏一年后 取健康小鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，分別為（1）空白組（同上）（2）陽性組（同上）（3）常溫組（4）低溫組。具體分組見表8。

實驗方法與結(jié)果

分組后連續(xù)給相應(yīng)藥物5d，每日一次。最后一次灌胃2h后，用毛細玻管插入小鼠眼內(nèi)眥后靜脈叢，深5mm，自血液流進玻管開始記時，待血液注滿玻管后，取出平放于桌面上。每隔15s，折斷玻管約5mm，并緩慢向左右拉開觀察折斷處是否有血凝絲出現(xiàn)，直至有血凝絲出現(xiàn)，所需時間即為凝血時間。計算出藥物對凝血時間的縮短百分率(變化率)。結(jié)果見表7、8。

凝血時間縮短百分率= ×100%

表8 貯藏一年后大黃對小鼠凝血時間的影響

結(jié)果顯示：云南白藥組與空白、貯藏前大黃、貯藏后常溫、低溫組大黃相比較，有明顯縮短凝血時間的作用，具有顯著意義。且云南白藥組(P＜0.001)的凝血作用較強，能明顯縮短凝血時間，凝血作用優(yōu)于貯藏前大黃組（P＜0.01)；貯藏一年后大黃常溫、低溫組與空白組比較無明顯縮短凝血時間的作用，而與云南白藥組比較，常溫組（P＜0.01 )與低溫組（P＜0.001)凝血作用明顯不如云南白藥組。

5.2.2 小鼠斷尾法止血實驗[6]受試藥物的制備及陽性對照藥物 同毛細玻管法5.2.1.1。

實驗分組

貯藏前 取健康小鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，分別為（1）空白組（給予0.9%生理鹽水0.2mL/10g體重灌胃）（2）陽性組（云南白藥液）（3）大黃組。具體分組見表9。

貯藏一年后 取健康小鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，分別為（1）空白組（同上）（2）陽性組（同上）（3）常溫組（4）低溫組。具體分組見表10。

實驗方法與結(jié)果

連續(xù)給相應(yīng)藥物3d，每日一次。最后一次灌胃2h后，將小鼠置于固定器內(nèi)，暴露其尾部，剪去尾巴尖部(約在距甩尖4mm處)，此時啟動秒表，這時有血液自尾巴末端流出，每隔15s左右用濾紙輕沾出血處，直至血管斷端處無血液被濾紙沾取，此時所用時間為出血時間。計算出藥物對出血時間的縮短百分率(變化率)。結(jié)果見表9、10。

出血時間縮短百分率= ×100%

表9 貯藏前大黃對小鼠出血時間的影響

表10 貯藏一年后大黃對小鼠出血時間的影響

注：與空白對照組相比較，**P＜0.01。

結(jié)果顯示：與空白組相比較，云南白藥、貯藏前大黃組均有縮短出血時間的作用，均具有顯著意義。云南白藥組(P＜0.05)和貯藏前大黃組（P＜0.05 )的止血作用均強，能明顯縮短凝血時間；貯藏一年后大黃常溫、低溫組與空白組相比對剪尾后的小鼠出血時間影響均無明顯差異，不具有明顯止血作用。

6 結(jié)果與討論

6.1 本實驗對大黃藥材在兩年貯藏期間的外觀性狀、干燥失重、浸出物含量進行了動態(tài)觀測，發(fā)現(xiàn)在貯藏期間外觀性狀會發(fā)生變化且有吸潮現(xiàn)象發(fā)生，明確了大黃在存放期間浸出物有逐漸減少的趨勢，綜合分析觀測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)低溫比常溫條件更適宜大黃貯藏。

6.2 實驗結(jié)果表明：貯藏一年后的兩組大黃仍具有明顯瀉下作用。而貯藏前大黃具有明顯的止血凝血作用，貯藏后兩組實驗藥材均沒有明顯的止血和凝血作用。說明一年貯藏時間對大黃的瀉下作用無明顯影響，而對止血和凝血作用影響較大。宋文惠等[7]研究發(fā)現(xiàn)大黃在貯藏1～2年內(nèi)使用最佳，此時有效成分大黃素含量高。大黃素和大黃素甲醚可明顯促進血液凝固，大黃飲片在貯藏過程中隨著貯藏時間的增加，其蒽醌類成分含量會下降[8-9]，由此可見，大黃藥材貯藏時間不宜過長。提醒臨床藥用應(yīng)注意此問題，同時也說明了中藥材及飲片有效期研究的必要性和緊迫性，以及建立中藥溯源系統(tǒng)的實際意義。

6.3 大黃的主要有效成分為蒽醌衍生物，結(jié)合蒽醌是大黃的主要瀉下成分[10]。蒽酚、蒽酮常與蒽醌同時存在，可相互轉(zhuǎn)換逐漸氧化成蒽醌。所以含有蒽醌的藥材采集后需儲藏一定時間后才可藥用，目的是使其成分氧化完全，蒽醌含量增加。大黃在一年的貯藏期內(nèi)蒽醌含量會有所增加，部分藥效成分并未減少，以致貯藏一年后瀉下作用無明顯減弱[7]。

6.4 現(xiàn)代研究表明：大黃的有效成分主要為蒽醌類、蒽酮類、二苯乙烯類、多糖類及鞣質(zhì)類等，其藥理作用為瀉下、抗菌、止血、利膽、抗腫瘤等[11]。下一步應(yīng)延長貯藏時間，結(jié)合化學成分來研究大黃藥材藥理作用變化，如大黃的蒽醌類、沒食子酸和d-兒茶素等有效成分在貯藏期間的變化，以深入探討大黃在貯藏期間的藥效變化以及機制。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典2015版一部[S].北京∶中國醫(yī)藥科技出版社,2015∶23.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典2015版四部[S].北京∶中國醫(yī)藥科技出版社,2015∶103,202.

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Research on the quality and pharmacological changes of Dahuang during storage

/LI Qian,AI Qing-qing, LAN Zhiqiong ,ZHENG Li,WANG Ya-yun, SUN Xue-mei, LU Xian-ming//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the quality and pharmacological changes of Dahuang during storage, and provide some reference for clinical use.Method:The exterior quality, weight loss on drying and extractum content of Dahuang were dynamically observed and measured during two years of storage. The changes of diarrhea,coagulation and hemostasis effect of two Dahuang groups that was stored for one year was investigated by charcoal method, capillary tube method and cutting tail procedure.Result:As the storage time prolonged, metamorphic Dahuang was found. Weight loss on drying decreased and the extract umcontent didn’t meet with the standard. After one year of storage, the two groups still had significant diarrhea effect, but the effects of hemostas is and coagulation was unobvious.Conclusion:The quality of Dahuang is changing during the process of storage. The storage of one year has no significant effect on the diarrhea effect of Dahuang, but greatly in fluencehemostas is and coagulation effect.

Rhubarb; storage conservation; efficacy

R 282

A

1674-926X(2017)06-001-04

國家自然科學基金基礎(chǔ)科學人才培養(yǎng)基金-成都中醫(yī)藥大學 中藥基礎(chǔ)基地科研訓練及科研能力提高項目子課題(No.J1310034-07)

成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥材標準化教育部重點實驗室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川成都 611137

李倩（1993-），女，碩士研究生，研究方向為中藥品種質(zhì)量與資源開發(fā)Tel∶15680803931 Email∶1270025149@qq.com

蘭志瓊（1979-）,女，博士，副教授，碩士生導師，第四批四川省中醫(yī)藥管理局學術(shù)帶頭后備人選，主要從事中藥品種質(zhì)量與資源開發(fā)的教學、科研工作Tel∶028-61800231 Email∶lanlan1979512@126.com

2017-08-25

（責任編輯：胡慧玲）