文/寨鴻瑞 郭 慶

中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛隱性乳房炎乳汁相關(guān)指標(biāo)的影響

文/寨鴻瑞1郭 慶2*

（1 河南省開封市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；2 安徽科寶生物工程有限公司）

用乙醇溶液提取中藥有效成分，接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌，制備中藥微生態(tài)制劑，選取某奶牛場經(jīng)CMT法檢測患有隱性乳房炎的泌乳奶牛，隨機(jī)分成中藥微生態(tài)治療組、陽性對(duì)照組（不進(jìn)行治療）、健康對(duì)照組，治療后第7天再用CMT檢測乳汁，評(píng)價(jià)中藥微生態(tài)制劑對(duì)乳汁相關(guān)指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示：中藥微生態(tài)制劑在試驗(yàn)0 天時(shí)，患隱性乳房炎奶牛與陰性對(duì)照組比，乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率都極顯著升高（P＜0.01），乳清中的白蛋白（ALB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和乳酸脫氫酶（LDH）含量都極顯著升高（P＜0.01）。通過7 天中藥治療后，中藥治療組與陽性對(duì)照組比，體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率、ALB、LDH和ALT含量差異顯著（P ＜0.05），與陰性對(duì)照組比，體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率、ALB、LDH和ALT含量差異不顯著（P＞0.05），結(jié)果表明：中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛隱性乳房炎有良好的治療效果，其主要是能夠使乳汁中的ALB、LDH和ALT含量降至正常值。

隱性乳房炎；中藥；微生態(tài)制劑；乳汁；乳清

乳房炎是奶牛乳腺發(fā)生的一種炎癥，是危害奶牛場最大、最常見、經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病之一，尤其是奶牛隱性乳房炎，由于其發(fā)病率高，無明顯的臨床癥狀，乳汁雖有變化但肉眼很難察覺，且隨著病情的發(fā)展可能會(huì)變成臨床型乳房炎[1，2]。近年來用中草藥治療奶牛乳房炎已成為熱門的研究課題，并且已有中草藥復(fù)方制劑、散劑、湯劑和中草藥提取物制成注射劑，在奶牛乳房炎的防治方面發(fā)揮了重要作用[3～5]，目前，也有采用微生態(tài)制劑治療奶牛隱性乳房炎的報(bào)道[6，7]，但都是單純的采用益生菌制成微生態(tài)制劑。為了探索療效顯著、簡單易行、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的中藥療法，以克服其它療法的弊端。本試驗(yàn)以中獸醫(yī)理論為基礎(chǔ)，篩選出對(duì)奶牛乳房炎有效的中藥，經(jīng)過科學(xué)組方，提取有效成分，接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌，發(fā)酵后制成中藥微生態(tài)制劑，直接給奶牛飲用，通過測定用藥前后乳汁中體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LDH）相關(guān)指標(biāo)的影響，以評(píng)價(jià)其對(duì)奶牛隱性乳房炎治療效果。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

杜仲葉、銀杏葉、紫蘇、白頭翁、紫錐菊、葎草、蝦殼、黃芪、甘草購于淮北市養(yǎng)生堂大藥房；CMT診斷液購于西安麥得法藥業(yè)有限公司；乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌購于徐州市獻(xiàn)華生物科技有限公司；ALB、ALT、和LDH試劑盒均購于上海士鋒生物科技有限公司；乙醇等化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器

HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋、恒溫磁力攪拌器、RE-5001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、DL-360B超聲波清洗器、邁瑞B(yǎng)A-90半自動(dòng)生化分析儀、高速冷凍離心機(jī)、CONscan40型數(shù)顯電導(dǎo)率儀。

1.3 中藥微生態(tài)制劑的制備工藝

將杜仲葉、銀杏葉、紫蘇、白頭翁、紫錐菊、葎草、蝦殼、黃芪、甘草等按比例準(zhǔn)確稱取，用80%乙醇浸泡30 min（料液比1:10），然后超聲15 min，回流提取，第一次2 h，用16 層紗布過濾倒出藥液。藥渣再加60%乙醇（料液比1:8），第二次1 h，倒出藥液，合并2 次濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無醇味，向濃縮液中加純化水至1 g/mL生藥。以1 000 g濃縮液加15 g的白糖加熱煮沸5 min，降至常溫?zé)o菌室內(nèi)接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母30 g，37 ℃發(fā)酵72 h，即得中藥微生態(tài)制劑，4 ℃保存?zhèn)溆肹8]。

1.4 乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的測定

參照《奶牛病學(xué)》[9]中的方法檢測體細(xì)胞數(shù)，用CONscan40型數(shù)顯電導(dǎo)率儀測定乳汁的電導(dǎo)率。

1.5 乳 清 中 ALB、ALT和LDH含量的測定

3 000 r/min離心乳汁除去乳脂，然后12 000 r/min離心，取上清液4 ℃保存，備用。采用邁瑞B(yǎng)A-90半自動(dòng)生化分析儀測定乳清中ALB、ALT和LDH含量，按試劑盒說明書進(jìn)行測定。

1.6 試驗(yàn)動(dòng)物的分組與采樣

選取某奶牛場的泌乳奶牛若干頭。嚴(yán)格消毒，棄去前三把乳汁，應(yīng)用CMT診斷液進(jìn)行診斷，根據(jù)付秀花、王恬的方法[10]判定患有隱性乳房炎的泌乳奶牛。經(jīng)CMT檢測患有隱性乳房炎的奶牛30 頭，隨機(jī)分成中藥治療組（Ⅰ組，20 頭65 個(gè)乳區(qū)）與陽性對(duì)照組（Ⅱ組，10 頭26 個(gè)乳區(qū)）；另選10 頭健康奶牛作為陰性對(duì)照組（Ⅲ組，40 個(gè)乳區(qū)）。中藥治療組奶牛自由飲用中藥微生態(tài)制劑，3 次／天，陽性對(duì)照組不用藥，健康對(duì)照組飲用5 倍稀釋后的中藥微生態(tài)制劑，用藥7 天后，采取乳樣進(jìn)行分析。同時(shí)比較用藥第0天和用藥后第7天的各組乳汁指標(biāo)的變化。

1.7 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 中藥微生態(tài)劑乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的影響

由表1可以知，在治療前，Ⅰ、Ⅱ組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與Ⅲ組相比差異極顯著（P＜0.01）。通過中藥微生態(tài)制劑治療7 天后，Ⅰ組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與Ⅱ組相比差異極顯著（P＜ 0.01），與Ⅲ組相比差異不顯著（P＞ 0.05）；Ⅱ組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與Ⅲ組相比差異極顯著（P＜ 0.01）（表1）。

表1 中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛隱性乳房炎體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的影響

表2 中藥微生態(tài)制劑對(duì)隱性乳房炎患牛乳清中ALB、LDH、ALT含量的影響

2.2 中藥微生態(tài)制劑對(duì)隱性乳房炎患牛乳清中ALB、ALT和LDH含量的影響

由表2可知，在治療前，Ⅰ、Ⅱ組奶牛乳清中ALB、ALT和LDH含量與Ⅲ組相比差異極顯著（P ﹤0.01）。通過中藥微生態(tài)制劑治療7 天后，Ⅰ組奶牛乳清中ALB、LDH、ALT與Ⅱ組相比差異顯著（P﹤0.05），與Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞0.05）；Ⅱ組奶牛乳清中的ALB、LDH、ALT與Ⅲ組相比差異極顯著（P ﹤0.01）（表2）。

3 討論

由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，讓患有隱性乳房炎的奶牛連續(xù)飲用7 天中藥微生態(tài)制劑后，乳汁體細(xì)胞數(shù)下降比較明顯，治療組由153.58 萬個(gè)/mL降到48.13 萬個(gè)/mL，降低乳汁體細(xì)胞數(shù)明顯，而陽性對(duì)照組變化不大，陰性對(duì)照組體細(xì)胞數(shù)下降，說明中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛隱性乳房炎具有較好的預(yù)防作用。中藥微生態(tài)制劑防治隱性乳房炎的途徑，可能是乳酸菌與腸道菌群建立有益菌的生長，減少有害菌群的產(chǎn)生，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，加強(qiáng)機(jī)體防御能力，也可能是中藥中的有效成分能夠清除氧自由基，修復(fù)被損傷的乳腺細(xì)胞等。將中藥和有益菌放在一起進(jìn)行發(fā)酵制成微生態(tài)制劑，能夠起到協(xié)同作用。但其作用機(jī)理還有待深入研究。

在中藥微生態(tài)制劑配方中，紫蘇、白頭翁、杜仲葉、銀杏葉等均有清熱解毒、活血化瘀的功能，黃芪、甘草等均具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用[11]，乳酸菌是良好的免疫激活劑，能夠增強(qiáng)奶牛免疫功能，激活巨噬細(xì)胞活性，提高奶?？贵w水平和免疫球蛋白水平，提高抗病力和抗應(yīng)激能力，有效預(yù)防金黃色葡萄球菌等有害菌的感染，降低乳房炎發(fā)病率[12，13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥微生態(tài)制劑對(duì)患有隱性乳房炎奶牛有良好的治療效果，ALB、ALT和LDH含量達(dá)到正常的水平，與陰性對(duì)照組相當(dāng)。這為臨床應(yīng)用提供了試驗(yàn)數(shù)據(jù)，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。C

[1] 王義桂. 中西藥結(jié)合對(duì)奶牛乳房炎的治療試驗(yàn)[J]. 中國畜禽種業(yè)，2013，9（9）：124-125.

[2] 凌丁，張業(yè)懷，莫文湛，等. 中草藥防治奶牛隱性乳房炎試驗(yàn)[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015（12）：146-148.

[3] 張啟迪，劉煥奇，金忠輝，等. 復(fù)方蒲公英注射液處方篩選試驗(yàn)研究[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2008，25（8）：46-47.

[4] 陳亞楠，劉旭，于文會(huì)，等. 歸芪散防治奶牛隱性乳房炎的研究[J]. 中國奶牛，201（1）：36-41.

[5] 武瑞，和翀翼，富艷玲，等. 防治奶牛乳房炎中藥乳膏劑的研制與質(zhì)量鑒定[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，24（2）：26-30.

[6] 楊靜，高淑琴，王慶奎，等. 微生態(tài)活菌制劑防治奶牛隱性乳房炎的效果試驗(yàn)[J]. 畜牧與飼料科學(xué)，2012，33（8）：105-106.

[7] 李睿文，李鐵拴，關(guān)鳴，等. 生物活性制劑康貝防治奶牛隱性乳房炎[J]. 河北畜牧獸醫(yī)，2004，20（6）：18-19.

[8] 郭慶. 一種防治奶牛隱性乳房炎中藥微生態(tài)添加劑的制備方法：中國，201410396851.2[P]，2016-06-15.

[9] 肖定漢. 奶牛病學(xué)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[10] 程振濤. 奶牛隱性乳房炎的診斷方法與細(xì)菌學(xué)研究[D]：[碩士論文]. 貴陽：貴州大學(xué)，2006.

[11] 付秀花，王恬. 中草藥對(duì)防治奶牛乳房炎病原菌的體外抑菌試驗(yàn)[J]. 動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2002，19（5）：16-19.

[12] 莊宏，劉愛君. 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響[J]. 飼料研究，2015（17）：19-20.

[13] 朱丹丹，劉宇，徐銘，等. 微生態(tài)制劑防制奶牛乳房炎的研究進(jìn)展[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（9）：218-221.

寨鴻瑞（1982-），女，河南開封人，碩士，獸醫(yī)師，從事動(dòng)物衛(wèi)生與產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督。

*通信作者：郭慶（1980-），男，安徽淮北人，碩士，副研究員，從事中藥微生態(tài)制劑的研究與開發(fā)。

2017-09-08）