鄭宏亮

摘 要：目的：建立了復(fù)方鮮竹瀝口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對魚腥草、桔梗進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC測定枇杷葉中熊果酸的含量。結(jié)果：薄層色譜法能準(zhǔn)確鑒別魚腥草、桔梗，HPLC能準(zhǔn)確測定熊果酸的含量，測得熊果酸的線性范圍為2.04～40.84μg·mL-1，R=0.9999；平均回收率為99.32%，RSD（%）=0.58%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、可行，可作為復(fù)方鮮竹瀝口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：復(fù)方鮮竹瀝口服液；熊果酸；薄層色譜法；HPLC

復(fù)方鮮竹瀝口服液為祛痰劑，具有清熱化痰，止咳之功效，主治痰熱咳嗽，痰黃黏稠。由鮮竹瀝、魚腥草、枇杷葉、桔梗、半夏、生姜、薄荷油加工而成的中藥復(fù)方口服液。為了更好的控制本品質(zhì)量，建立了復(fù)方鮮竹瀝口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用薄層色譜法對魚腥草、桔梗進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法測定枇杷葉中熊果酸的含量。

1 儀器、試藥及樣品

高效液相色譜儀（島津Nexera XR）；迪馬C18（250×4.6mm，5μm）色譜柱；熊果酸對照品（中檢所，批號：110742-201220），甲基正壬酮對照品、桔梗對照藥材（中檢所）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其它試劑均為分析純；復(fù)方鮮竹瀝口服液（市售樣品，規(guī)格：10ml*10支）。

2 薄層鑒別

薄層鑒別 結(jié)合本產(chǎn)品特點(diǎn)，參照藥典，建立了魚腥草、桔梗、半夏藥材的薄層定性鑒別方法。

2.1 魚腥草鑒別。取本品200ml，置圓底燒瓶中，加水100ml，連接揮發(fā)油測定器。自測定器上端加水使充滿刻度部分，再加醋酸乙酯1ml，連接回流冷凝管，加熱回流1小時(shí)，停止加熱，放置片刻，分取醋酸乙酯層，作為供試品溶液。另取甲基正壬酮對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含10μg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10μl，對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯（8：2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點(diǎn)。

2.2 桔梗鑒別。取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液10ml，加熱回流30分鐘，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20m1，合并三氯甲烷液，加水洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取桔梗對照藥材1g，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合溶液20ml，加熱回流2小時(shí)，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.3 專屬性試驗(yàn)。分別取不含魚腥草的陰性樣品、不含桔梗的陰性樣品，按上述各自方法制成陰性樣品供試品溶液。結(jié)果在與甲基正壬酮對照品色譜相應(yīng)的位置上，魚腥草陰性樣品不顯相同的黃色斑點(diǎn)。在與桔梗對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，不含桔梗的陰性樣品不顯相同顏色的斑點(diǎn)。本品其他成分不干擾魚腥草、桔梗的定性鑒別，專屬性良好。

3 含量測定 建立了HPLC法測定本品中枇杷葉主要有效成分熊果酸含量方法

3.1 色譜條件。以十八烷基砝烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（65：15：20）為流動相；柱溫35℃；進(jìn)樣量20μl；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按熊果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

3.2 對照品溶液的制備。取熊果酸對照品適量，精密稱定，加95%乙醇制成每1ml含熊果酸20μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備。精密取本品5ml，置50ml量瓶中，加入95%乙醇適量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）10分鐘，放冷，加95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 專屬性試驗(yàn)。按處方比例制備不含枇杷葉的陰性樣品，按供試品方法制備陰性樣品溶液，結(jié)果表明，陰性樣品溶液在熊果酸色譜峰處無干擾峰，方法專屬性良好。

3.5 線性關(guān)系考察。精密稱取熊果酸對照品10.21mg，置50ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品原液。精密量取對照品原液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置10ml量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對照品溶液。照含量測定法，精密量取20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作線性回歸，詳見表1。

結(jié)果表明，熊果酸在濃度為2.04～40.84μg·mL-1的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號樣品，平行測定6次，計(jì)算含量，考察含量結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果符合規(guī)定，重復(fù)性良好，詳見表2。

3.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)。精密稱取熊果酸對照品10.14mg，加95%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品原液。精密量取本品2.5ml，共9份，置50ml量瓶中，分別精密加入對照品原液2.0、2.5、3.0ml（每個(gè)濃度3份），加入95%乙醇適量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）10分鐘，放冷，加95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為回收率供試品溶液。同法配制對照品溶液。精密量取供試品及對照品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算熊果酸的回收率，詳見表3。

結(jié)果表明，熊果酸在高、中、低3個(gè)濃度下的回收率均在98%-102%，RSD小于2.0%，說明本方法準(zhǔn)確度良好。

3.8 樣品測定 用已建立的熊果酸含量測定方法測定3個(gè)不同批號的市售樣品，詳見表4。

結(jié)果表明，3個(gè)不同批次的樣品含量測定結(jié)果均符合規(guī)定，且批次間熊果酸含量無明顯差異，含量均一。

4 結(jié)論

經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，建立的薄層色譜法和高效液相色譜法，可用于本產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

5 討論

5.1 魚腥草的主要成分為揮發(fā)油，油中主要為甲基壬酮，所以對魚腥草藥材主要定性鑒別甲基壬酮。藥典中展開劑為正己烷-醋酸乙酯（9：1），而本品采用此展開劑比移值（Rf=0.2）較小，分離效果不佳，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)摸索，采用正己烷-醋酸乙酯（8：2）比例，比移值符合規(guī)定（Rf=0.5），分離效果好，斑點(diǎn)清晰。

5.2 枇杷葉中熊果酸的流動相系統(tǒng)采用乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（65：15：20），熊果酸色譜峰與相鄰色譜峰達(dá)到良好分離，峰形柱效均符合規(guī)定。由于本產(chǎn)品成分較多，采用藥典枇杷葉藥材熊果酸流動相乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（67：12：21），與相鄰一個(gè)色譜峰未完全分開，所以減少乙腈量，延后保留時(shí)間，達(dá)到完全分離。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社，2015：224.

[2]中華人民共和國藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社，2015：227.

[3]中華人民共和國藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社，2015：204-205.endprint