黃懿++++++潘濤+++++++田霞++++++肖作奇

[摘要]目的 建立香芪生乳合劑的質量標準。方法 采用薄層色譜法（TLC）對香芪生乳合劑中主要藥味進行薄層色譜定性鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）測定制劑中芍藥苷的含量。結果 TLC可對制劑中當歸、川芎、白芍、木香、黃芪等藥材進行鑒別，斑點清晰，方法簡單易行，專屬性好。HPLC檢測結果顯示，芍藥苷最佳檢測波長為231 nm，21.1～421.5 μg/ml范圍內線性關系良好，平均回收率為98.6%，RSD為1.7%。結論 該研究方法簡單、準確、重復性好、專屬性強，可用于香芪生乳合劑的質量控制。

[關鍵詞]香芪生乳合劑；芍藥苷；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

[中圖分類號] R943 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）10（c）-0008-05

[Abstract]Objective To establish the quality standard of Xiangqi Shengru Mixture.Methods Identification of main herbal medicines in Xiangqi Shengru Mixture were performed by TLC.The main effective component of paeoniflorin was determined by HPLC.Results Identification of Angelicae Sinensis Radix，Chuanxiong Rhizoma， Radix Paeoniae Alba，Aucklandiae Radix and Astragali Radix and so on was established by TLC.The method was simple，the spots were clear with highly specific attribute.HPLC detection results showed that the best detection wavelength was 231 nm，the linear range of the paeoniflorin was 21.1～421.5 μg/ml，the range of the spotting recovery rate was 98.6%，and RSD was 1.7%.Conclusion The method can be used for the quality control of Xiangqi Shengru Mixture，and it is simple，accurate with good repeatability and specificity.

[Key words]Xiangqi Shengru Mixture；Paeoniflorin；Quality standard；TLC；HPLC

香芪生乳合劑是由白芍、當歸、通草、川芎、木香、黃芪等12味藥材制成的中藥復方制劑，有益氣養(yǎng)血、通經(jīng)下乳的作用，用于產(chǎn)后氣血虧損，乳汁不足。方中白芍、當歸養(yǎng)血調經(jīng)、補血和血；川芎、木香行氣、止痛，黃芪益氣、固脫，諸藥合用起到益氣養(yǎng)血、通經(jīng)下乳的作用。該制劑為湖南省婦幼保健院醫(yī)院制劑，年產(chǎn)值200余萬元，臨床療效確切。為更好地控制該制劑質量，參照文獻報道相關研究方法[1-7]，本研究采用薄層色譜法（TLC）建立當歸、川芎、白芍、木香、黃芪等藥材的定性鑒別方法；采用高效液相色譜法（HPLC）建立處方中主要有效成分芍藥苷的含量測定方法。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

電子分析天平（德國，Mettler Toledo XS205型，精度為0.1 mg），超聲清洗器（上?？茖?，HS-2060），高效液相色譜儀（日本島津，LC-20A型），二極管陣列檢測器（日本島津，SPD-M20A），柱溫箱（日本島津，CTO-10AS）。

0.22 μm微孔濾膜（美國，密理博），薄層層析硅膠（中國青島海洋化工集團公司），水（娃哈哈純凈水），乙腈（美國，Tedia，色譜純），其他常用試劑均為分析純。對照品及對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供，詳細情況如下：當歸對照藥材（批號：120927～201014，供鑒別用），川芎對照藥材（批號：120918～200809，供鑒別用），芍藥苷對照品（批號：110736～200833，供含量測定用），木香對照藥材（批號：120921～200607，供鑒別用），去氫木香內酯對照品（批號：111525～201008，供含量測定用），黃芪甲苷對照品（批號：110781～200613，供含量測定用）。香芪生乳合劑由湖南省婦幼保健院藥學部制劑室提供樣品（批號：150828， 151210）。

1.2當歸、川芎的鑒別

取香芪生乳合劑（批號：150828，151210）20 ml，每次用乙酸乙酯20 ml振搖提取2次，過濾，取濾液蒸干，加乙酸乙酯1.0 ml溶解，即得供試品溶液。另分取當歸對照藥材0.5 g和川芎對照藥材0.5 g，分別加20 ml乙酸乙酯，超聲20 min，過濾，取濾液蒸干，加乙酸乙酯1.0 ml溶解，即得對照藥材溶液。陰性對照溶液的制備：按處方稱取除當歸和川芎的其他藥材，制成陰性對照樣品。按《中國藥典》2015年版TLC試驗[8]，取上述四種溶液各10 μl，點于薄層板上，展開劑：環(huán)己烷∶乙酸乙酯（9∶1），展開10 cm，取出，晾干，置365 nm紫外光燈下檢視，拍照記錄。

1.3白芍的鑒別

取香芪生乳合劑（批號：150828，151210）50 ml，用30 ml水飽和的正丁醇振搖提取2次，過濾，取濾液，用15 ml氨試液洗滌2次，棄去洗液，再用以20 ml正丁醇飽和的水洗滌2次，棄去洗液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1.0 ml溶解，即得供試品溶液。另取稱取芍藥苷對照品0.5 mg，加甲醇1.0 ml溶解，即得對照品溶液。陰性對照溶液的制備：按處方取除白芍的其他藥材，制成缺白芍的陰性。按《中國藥典》2015年版TLC試驗[8]，吸取上述三種溶液各10 μl，點于薄層板上，展開劑：三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（40∶5∶10∶0.2），展開10 cm，取出晾干，噴5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃加熱至斑點清晰，拍照記錄。

1.4木香的鑒別

取香芪生乳合劑（批號：150828，151210）50 ml，30 ml乙酸乙酯振搖提取2次，過濾取乙酸乙酯液，水浴揮干，殘渣加乙酸乙酯1.0 ml 溶解，即得供試品溶液。另稱取木香對照藥材0.5 g，加20 ml乙酸乙酯，超聲20 min，濾過取濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1.0 ml 溶解，即得對照藥材溶液。另取去氫木香內酯對照品，加乙酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得對照品溶液。陰性對照溶液的制備：按處方稱取除木香的其他藥材，制成缺木香的陰性。按《中國藥典》2015年版TLC試驗[8]，吸取上述三種溶液各10 μl，點于薄層板上，展開劑：環(huán)己烷∶丙酮（10∶3），展開10 cm，取出晾干，噴5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃加熱至斑點顯色清晰，拍照記錄。

1.5黃芪的鑒別

稱取黃芪甲苷對照品0.5 mg，加甲醇1.0 ml溶解，即得對照品溶液。陰性對照溶液的制備：按處方稱取除黃芪的其他藥材，制成缺黃芪的陰性對照。按《中國藥典》2015年版TLC試驗[8]，取上述對照和陰性及“1.3”項下的供試品溶液各10 μl，點于同一薄層板上，展開劑：三氯甲烷∶甲醇∶水（65∶35∶10）的下層溶液，展開10 cm，取出晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置365 nm紫外光燈觀察，拍照記錄。

1.6芍藥苷的含量測定方法

1.6.1色譜條件 色譜柱：色譜柱（Agilent TC-C18，4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；流速： 1.0 ml/min；檢測波長：231 nm；柱溫：25℃；進樣量為10 μl。

1.6.2樣品液制備 對照品溶液制備：精密稱取經(jīng)過減壓干燥后的芍藥苷對照品8.43 mg，放置于20 ml容量瓶中，適量甲醇溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每毫升含芍藥苷421.5 μg）。

供試品溶液制備：取香芪生乳合劑5 ml于10 ml容量瓶中，用色譜甲醇定容，搖勻，取上清液，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

陰性對照溶液制備：按香芪生乳合劑的處方稱取除白芍外的其他藥材，按制劑生產(chǎn)工藝制備，取樣品溶液5 ml于10 ml容量瓶中，用色譜甲醇定容，搖勻，取上清液，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得陰性對照溶液。

1.6.3專屬性試驗 精密吸取“1.6.2”項下各溶液，按“1.6.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。

1.6.4線性關系考察 分別精密吸取“1.6.2”項下對照品溶液0.5、1、2、4、8、10 ml，分別置于10 ml的容量瓶中，加水定容，搖勻，即為不同濃度的對照品溶液，分別取對照品溶液，按“1.6.1”項下色譜條件進行HPLC分析。

1.6.5精密度試驗 精密吸取芍藥苷對照品溶液，按“1.6.1”項下色譜條件進樣，重復6 次，記錄芍藥苷峰面積。

1.6.6重復性試驗 采用同一批次制劑樣品（20160130），按“1.6.2”項下方法平行制備6批供試品溶液，分別按“1.6.1”項下色譜條件測定，記錄芍藥苷峰面積。

1.6.7穩(wěn)定性試驗 稱供試品溶液，按“1.6.1”項下的色譜條件，分別在0、1、2、4、12、24 h 進樣測定，記錄芍藥苷峰面積。

1.6.8加樣回收率試驗 精密量取已知含量的香芪生乳合劑9份于10 ml容量瓶中，每份2.5 ml，分別按含量80%、100%、120%精密加入一定量的對照品，加水2.5 ml，加甲醇定容，每個濃度平行制備3份，取適量溶液過0.22 μm微孔濾膜，即得。按“1.6.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算加樣回收率。

1.6.9樣品的測定 按“1.6.2”中方法制備得到供試品溶液（批號為150828、151210、160130），按“1.6.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算樣品中芍藥苷含量。

2結果

2.1當歸、川芎的鑒別

當歸、川芎的鑒別結果見圖1。供試品與對照藥材相同的位置上顯示相同顏色的熒光斑點，陰性在相關位置無斑點。

2.2白芍的鑒別

白芍的鑒別結果見圖2。供試品與對照品在相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性在相關位置無斑點。

2.3木香的鑒別

木香的鑒別結果見圖3。供試品與對照品相同的位置上顯相同顏色的斑點，陰性在相關位置無斑點。

2.4黃芪的鑒別

黃芪的鑒別結果見圖4。供試品與對照品相同的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性在相關位置無斑點。

2.5芍藥苷的含量測定結果

2.5.1專屬性試驗 專屬性試驗結果見圖5。芍藥苷與相鄰其他色譜峰的分離度>1.5，拖尾因子符合要求（0.995），按芍藥苷計算，理論塔板數(shù)>5000。陰性樣品在與芍藥苷對照品相同保留時間（約17 min）處沒有色譜峰。

2.5.2線性關系考察 計算得回歸方程：y=21 589x-16 790，R2 = 0.9999。結果表明芍藥苷在21.1～421.5 μg/ml范圍內線性關系良好，橫坐標（x）為芍藥苷濃度，縱坐標（y）為色譜峰面積。

2.5.3精密度試驗 計算得到芍藥苷峰面積的RSD為0.7%，說明精密度良好。

2.5.4重復性試驗 計算芍藥苷峰面積的RSD是1.3%，證明方法的重復性良好。

2.5.5穩(wěn)定性試驗 計算得到芍藥苷峰面積RSD是1.4%，證明供試品溶液在24 h穩(wěn)定性良好。

2.5.6加樣回收率試驗 計算得到平均加樣回收率為98.6%，RSD為1.7%。

2.5.7樣品的測定 計算得到150828、151210、160130三批次香芪生乳合劑中芍藥苷的含量分別為0.546、0.591、0.564 mg/ml。

3討論

TLC利用不同成分對吸附劑吸附能力得不同，在展開劑流吸附劑的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附的循環(huán)，達到不同成分分離的目的，是現(xiàn)階段中藥復方制劑中藥味鑒別最常用的方法。HPLC是以經(jīng)典的液相色譜為基礎，在高壓下的液體為流動相的色譜過程，一般配備高靈敏度的檢測器，具有高效的特征，通過與標準物質對照能對復方制劑中的有效成分進行含量測定。香芪生乳合劑中當歸、川芎、白芍、黃芪、木香諸藥合用起到益氣養(yǎng)血、通經(jīng)下乳的作用[9-13]，基于此，本研究采用TLC法對制劑中的這些藥材進行鑒別。當歸和川芎有效成分相近，都含稿本內酯、阿魏酸等成分，《中國藥典》2015年版中紅藥貼膏、婦科調經(jīng)片等多種制劑中當歸和川芎都采用TLC同時鑒別，故本研究采用TLC法對當歸和川芎同時鑒別。白芍在處方中為君藥，且芍藥苷為白芍的主要有效成分，含量較高，故選擇其作為含量測定的指標。

根據(jù)《中國藥典》2010年版一部及相關文獻報道芍藥苷在230 nm 波長處有最大吸收[14-18]，通過在200～400 nm 波長范圍內掃描芍藥苷對照品溶液和供試品溶液，結果在231 nm波長處有最大吸收，故選擇231 nm為檢測波長。

從三批次檢測結果看，該制劑生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，質量可靠。該研究方法簡單易行、可操作性強、準確、穩(wěn)定、可靠，可作為香芪生乳合劑的質量控制方法，為該制劑的進一步開發(fā)提供科學依據(jù)。

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