劉浩

摘 要：目的：對(duì)處方中黃柏和苦參兩種藥材合理利用及進(jìn)一步提高治糜康栓的臨床療效。方法：采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化，取最優(yōu)結(jié)果對(duì)其“提取次數(shù)”等因素再進(jìn)行考察。結(jié)果：最佳工藝為加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時(shí)，提取3次。

關(guān)鍵詞：治糜康栓；鹽酸小檗堿；正交試驗(yàn)；高效液相檢測(cè)

治糜康栓是國(guó)家正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的純中藥制劑，收載與2015版《中華人民共和國(guó)藥典》一部，具有清熱解毒燥濕清熱的功效，主要用于濕熱下注所致的帶下病，臨床療效確切，市場(chǎng)好。

處方的黃柏和苦參兩味藥物抗病原微生物的有效成分均為生物堿，其中黃柏以鹽酸小檗堿為代表，苦參生物堿以苦參堿和氧化苦參堿為代表，而這些成分的脂溶性較好，在熱水中的溶解性有限，而原工藝提取方法為水提，大大限制了臨床治療病原微生物感染的有效成分生物堿的提取，脂溶性有效成分有太多的浪費(fèi)?；趯?duì)黃柏和苦參兩種藥材合理利用及進(jìn)一步提高治糜靈栓的臨床療效的目的，我們?cè)诓桓淖冊(cè)に囂幏?、藥物用量及原主要工藝的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了工藝的優(yōu)化，形成了一種簡(jiǎn)單、易行、適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)的生產(chǎn)工藝。

由于2015版藥典將鹽酸小檗堿作為含量測(cè)定的指標(biāo)性成分，在盡量不改變?cè)に嚭唾|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況下，我們以鹽酸小檗堿為指標(biāo)性成分，進(jìn)行了工藝的篩選：

1 鹽酸小檗堿的含量測(cè)定

1.1 儀器

儀器：安捷倫-高效液相色譜儀（LC-10ATvp泵，LC-10Avp檢測(cè)器）。

色譜柱：Kromasil C18色譜柱（3.9mm×200mm，5μm）；Kromasil C18保護(hù)柱。

流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（33：67）。

流速：1.0ml/分鐘。

檢測(cè)波長(zhǎng)：424nm。

1.2 對(duì)照品

鹽酸小檗堿對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所，110713-200911，純度為86.8%。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取鹽酸小檗堿對(duì)照品9.378mg（按含鹽酸小檗堿為86.8%計(jì)為8.14mg），精密稱定，置5ml容量瓶用甲醇定容，取出40μl用甲醇定容到2ml。鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液分別自動(dòng)進(jìn)樣4、7、10、13、16、20μl，測(cè)得鹽酸小檗堿的峰面積，以質(zhì)量X與色譜峰面積Y做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=25.475X-13.195（r=0.99995），結(jié)果見表1。

表明鹽酸小檗堿在0.13～0.65μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.4 供試品溶液制備

取醇提物約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，稱定重量，置50℃水浴中加熱使充分溶散，取出，放冷，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置過(guò)夜，取出，取上清液迅速濾過(guò)，精密吸取濾液2ml加在堿性氧化鋁柱（100-200目，12g內(nèi)徑為1cm）上，加甲醇35ml洗脫，收集洗脫液蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

1.5 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl，供試品溶液10μl入高效液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。

2 乙醇濃度、用量、提取時(shí)間考察

乙醇濃度、用量、提取時(shí)間及提取次數(shù)是影響回流提取的主要因素，因此對(duì)乙醇濃度、用量、提取時(shí)間進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化，取最優(yōu)結(jié)果對(duì)其“提取次數(shù)”因素再進(jìn)行考察見表2。

試驗(yàn)方法：黃柏、苦參各200g加水煎煮三次，第一次2小時(shí)，第二、三次各1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，藥渣按表2加入不同濃度不同倍數(shù)的乙醇煎煮，按煎煮時(shí)間和次數(shù)進(jìn)行提取，濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇，干燥，測(cè)出膏率和干膏中鹽酸小檗堿的量，結(jié)果見表3、4。

F1-0.1（2，2）=9.00；F1-0.05（2，2）=19.00； F1-0.01（2，2）=99.00

分析：由表中結(jié)果可知，醇回流提取正交試驗(yàn)中的四個(gè)因素，乙醇濃度（%）、溶媒體積（v）、提取時(shí)間（h）及提取次數(shù)中，溶媒體積對(duì)小檗堿含量影響較大，溶媒體積F值小于0.05，有差異性。對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，四因素對(duì)小檗堿含量影響大小為B>D>A>C，其中D、A、C三因素對(duì)小檗堿含量影響不大。

因此確定最佳工藝為A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時(shí)，提取3次。

最佳工藝驗(yàn)證：

取提取物粉末約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，稱定重量，置50？C水浴中加熱使充分溶散，取出，放冷，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置過(guò)夜，取出，取上清液迅速濾過(guò)，精密吸取濾液10ml加在，堿性氧化鋁柱（100-200目，12g內(nèi)徑為1cm）上，加甲醇35ml洗脫，收集洗脫液蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl，供試品溶液5-10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見表5。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，所確定的正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果重現(xiàn)性良好，可以最后確定最佳工藝為A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時(shí)，提取3次。

3 討論

3.1 將苦參、黃柏藥渣中的有效成分充分提取后進(jìn)行制劑，提高了有效成分的轉(zhuǎn)移率，充分利用藥材。

3.2 有效成分的提取率增高，抗病原微生物的藥理活性顯著增加。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：1118.endprint