海 英 阿古拉 雙 福 烏蘭其其格 山丹

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)院 ，呼和浩特 010110)

蒙藥蓽茇提取物胡椒堿對孕鼠的影響

海 英1,2阿古拉2*雙 福3烏蘭其其格2山丹3

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)院 ，呼和浩特 010110)

目的：了解蒙藥蓽茇降血脂有效成分胡椒堿對Wistar孕鼠的影響。方法妊娠的雌性Wistar大鼠隨機(jī)分成陰、陽性組及高、中、低劑量組每組12只, 稱重和編號。孕鼠于妊娠第7～16d 分別灌胃胡椒堿(高劑量287.04m g/kg、中劑量71.76mg/kg、低劑量17.94mg/kg), 陽性對照組于孕期11d一次腹腔注射環(huán)磷酰胺, 于妊娠第20d處死。分析胚胎發(fā)育指標(biāo), 檢查有無外觀畸形和骨骼畸形。結(jié)果與對照組比較, 胡椒堿高、中劑量組對孕鼠體重增長及胎鼠生長指標(biāo)有顯著性差異(P<0.05 )；高劑量組對胎鼠外觀畸形和骨骼畸形未見顯著增加。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)劑量與條件下蓽茇胡椒堿高、中劑量組使孕鼠體重增長、胎鼠生長指標(biāo)緩慢或下降；低劑量組對胎鼠外觀、骨骼和內(nèi)臟均無顯著影響。

蒙藥;蓽茇;胡椒堿;孕鼠

蓽茇(Piper longum L.)是胡椒科多年野生草本植物蓽茇的干燥未成熟果，味辛,性溫、有膩、銳、輕、燥等功效，具有調(diào)理胃溫,祛“巴達(dá)干·赫依”,調(diào)節(jié)體素,滋補(bǔ)強(qiáng)壯,平喘祛痰,止痛等功能。主治胃火衰敗,不思飲食,不消化病等寒性疾病[1]。為進(jìn)一步了解其安全性,對蓽茇提取物胡椒堿對孕鼠敏感期是否有毒性進(jìn)行了研究。

1 材料

Wistar大鼠,♀200 ～230g 150只, ♂250 ～270g, 75 只。由內(nèi)蒙古大學(xué)動物中心提供。潔凈度國家二級, 批號: 京動字8806M35 ，蓽茇胡椒堿( Piperine , 簡稱PP不規(guī)范， 用Pip.)。從蓽茇中自行提取、分離。經(jīng)內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)所測定純度≥98%。用蒸餾水配置成不同濃度( 高劑量71.76 mg/mL、中劑量17.99 mg/mL、低劑量4.48 mg/mL放到“方法”里)的混懸液(簡稱PPA),避光保存。注射用環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide for Injection,簡稱CP，用Cyc.為什么不用口服制劑？),批號:國藥準(zhǔn)字H31021703, 規(guī)格:200 mg/支，茜素紅( 批號:711217,北京化工廠)、氫氧化鉀(批號:960711,呼和浩特化學(xué)試劑廠)、丙三醇(甘油C3H8O3) ( 批號:20041115 , 天津市凱通化學(xué)試劑有限公司)、冰醋酸(批號:20040620,天津化學(xué)試劑有限公司)、1%水合氯醛,2、4、6三硝基酚(批號:20030901,廣州化學(xué)試劑廠)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉等,均為分析純。

2 方法[2-7]

取性成熟而未交配過的大鼠,按雌雄2:1交配,發(fā)現(xiàn)陰道栓作為妊娠的“0”d,檢出的“孕鼠”隨機(jī)分為5組, 每組12只,稱重和編號。其中3組作為PPA高、中、低劑量組。根據(jù)PPA半數(shù)致死量( LD50=1148.15mg/kg)設(shè)計(jì),分別相當(dāng)于LD50的1/4、1/16和1/64,即高劑量組287.04 mg/kg·d-1、中劑量組71.76 mg/kg·d-1、低劑量組17.94 mg/kg·d-1, 于妊娠第7～16d每天灌胃；對照組(蒸餾水)在孕期第7～16 d，每天以5 mL/kg餾水灌胃；陽性對照組(環(huán)磷酰胺 配置方法)以10 mg/kg孕期第11d一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺。受孕后7～16d稱重,并記錄妊娠第0、3、6、9、12、15 、18、20d的體重。孕鼠于妊娠第20 d處死, 剖腹暴露子宮,檢查受孕情況, 記錄著床數(shù)、吸收胎、死胎和活胎鼠?；钐ナ笥涗浱プ畜w重、體長、尾長并檢查胎鼠外觀有無異常。將每窩1/3活胎不剝皮在中性甲醛液中固定2～3周后檢查內(nèi)臟,再取出肝、腎、子宮和睪丸做病理切片,觀察有無病變。將每窩2/3的活胎剝皮去除內(nèi)臟后放入無水乙醇中固定48h～72h, 即轉(zhuǎn)入1% KOH溶液中3～5d后將此溶液棄去, 加入茜素紅應(yīng)用液進(jìn)行染色,直到胎鼠骨骼全部染成桃紅色為止,染色后將胎鼠置于透明液A、B中各1～2d, 經(jīng)上述處理的胎鼠, 放于平皿中用放大鏡進(jìn)行觀察。

2 結(jié)果

2.1 PPA對孕鼠體重的影響：與對照組比較，胡椒堿3個劑量組和陽性對照組0～6d體重增長無顯著性差異(P>0.05)。6～20d體重增長情況經(jīng)方差分析比較，PPA高、中劑量組與對照組比較有極顯著差異(P<0.01),PPA低劑量組、陽性對照組與對照組比較無顯著差異(P>0.05)。

實(shí)驗(yàn)表明，胡椒堿高、中劑量組對孕鼠體重增長有影響,見表1 、2 。

表1 PPA 對孕鼠體重增長的影響

注：與模型組比較，*P<0.001 ，與第2wk比較，#P<0.001，與第2、4wk比較，△P<0.001.

表2 各組孕鼠體重增長的情況

注: 與對照組比較，※P<0.05

2.2 PPA 對胎鼠發(fā)育的影響：對胎鼠體重、體長、尾長、胎盤重量等指標(biāo)PPA 高、中劑量組及陽性對照組與對照組比較差異有顯著性(P<0.05)，低劑量組則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)表明，蓽茇胡椒堿高、中劑量組與陽性對照組對胎鼠體重、體長、尾長、胎盤重量增長有顯著影響(P<0.05)， 見表3 。

表3 PPA對胚胎發(fā)育基本情況比較

注:與對照組比較，※P< 0.05

3 討論

蒙藥蓽茇降血脂有效成分胡椒堿在本實(shí)驗(yàn)條件下, 中、高劑量對胚胎發(fā)育有明顯影響，對孕鼠體重增長、胎鼠早期生長均有影響；低劑量則無觀察到明顯影響。因此, 含有胡椒堿成分的蓽茇藥材, 用于孕婦時應(yīng)慎用或注意劑量和療程, 胡椒堿或胡椒堿衍生物制劑, 建議認(rèn)真完成致畸實(shí)驗(yàn)研究。(增加一些文獻(xiàn)內(nèi)容并加以討論)

[1]羅布桑等,蒙藥學(xué)[M].呼和浩特：民族出版社，1989:189.

[2]吳德生,董奇男,衡正昌,等.在致畸研究中小鼠胎鼠發(fā)育遲緩的評價(jià)指標(biāo)[J].四川醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1984, 15(1):59-63 .

[3]陳奇.藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1987:120 .

[4]周文江,喬偉偉,楊麗萍,等.血爾寶補(bǔ)鐵蛋白咀嚼片對大鼠胚胎致畸作用的研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)( 農(nóng)業(yè)科學(xué)版),2003.6.21(2):116-120 .

[5] 李健,張玲,等.甲基汞對大鼠胚胎毒性的研究[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999.(3):9.

[6]賈慶軍,周燕虹, 等.傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)中鼠骨骼標(biāo)本制備方法改進(jìn)[J]. 白求恩軍醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào),2005-3,3(1):54-55.

[7]楊麗萍, 楊幼明,等.黃芩對大鼠胚胎致畸作用的觀察[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2003-6,13(3):155-158.

海英，博士生，副教授，從事蒙醫(yī)藥傳統(tǒng)理論基礎(chǔ)與應(yīng)用研究，Tel:15947716564，E-mail:153658748@qq.com

*通訊作者:阿古拉，教授，博士生導(dǎo)師，從事蒙醫(yī)療術(shù)學(xué)現(xiàn)代研究，Tel:13804745237， E-mail:agula372000 @126.com

R291.2

A

1006-6810(2017)05-0068-02

2017年月日收稿