付 銳，楊 鈞

(濟(jì)寧市皮膚病防治院，山東 濟(jì)寧 272000）

祛銀膠囊治療銀屑病的作用機(jī)理研究

付 銳，楊 鈞

(濟(jì)寧市皮膚病防治院，山東 濟(jì)寧 272000）

目的 研究祛銀膠囊治療銀屑病的藥效學(xué)機(jī)制。方法 用小鼠尾部鱗片表皮模型，豚鼠耳部銀屑病模型，觀察祛銀膠囊對銀屑病動物模型的影響，用小鼠碳粒廓清功能法觀察對小鼠免疫功能的影響。結(jié)果 祛銀膠囊能促進(jìn)模型小鼠尾部鱗片表皮的顆粒層形成，改善豚鼠耳部銀屑病模型的病理改變，抑制小鼠的非特異免疫功能。結(jié)論 祛銀膠囊有治療銀屑病的作用。

祛銀膠囊；銀屑病；銀屑病動物模型；藥效學(xué)

銀屑病是常見的自身免疫性疾病之一，具有反復(fù)性、難根治的特點。自制中藥祛銀膠囊由金銀花、黃連、拳參、當(dāng)歸、白鮮皮、苦參、槐花等中藥飲片提取精制而成，功能清熱解毒、涼血潤燥、活血止癢,主治尋常型銀屑病。參照《中藥新藥研究的技術(shù)要求》，對祛銀膠囊進(jìn)行了治療銀屑病的主要藥效學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 中藥祛銀膠囊(濟(jì)寧市皮膚病防治院制劑室生產(chǎn))，制劑規(guī)格為0.38g/粒，相當(dāng)于1.55g中藥飲片/粒。消銀膠囊(陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn))，規(guī)格為0.3g/粒，相當(dāng)于0.574g中藥飲片/粒。實驗給藥劑量均用制劑量表示(g/kg)，灌胃給藥時以生理鹽水制成所需濃度的混懸液。己烯雌酚注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，規(guī)格為1ml:2mg。注射用硫酸長春新堿(浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))，規(guī)格為1mg/支。鹽酸普萘洛爾(江蘇云陽集團(tuán)藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，規(guī)格為原料藥。5%心得安乳劑自制：取鹽酸普萘洛爾5g用適量50%乙醇溶解，加入月桂氮卓酮5g和聚乙烯吡咯烷酮10g使溶解，再加50%乙醇使成100ml，搖勻，即得。

1.1.2 動物 SPF級KM小鼠，體重18～22g；SPF級Wistar大鼠，體重180～200g；普通級豚鼠，體質(zhì)量350～400g；動物均購自魯抗醫(yī)藥股份公司動物中心，動物證號：SCXK(魯)20130001號。

1.2 實驗方法

1.2.1 對小鼠尾部鱗片表皮的影響 參考文獻(xiàn)方法[2]，取SPF級KM小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成5組：中藥祛銀膠囊高、中、低劑量組(g/kg)，消銀膠囊陽性組和陰性組(等容積純化水)。給藥組分別在每天上午8時灌胃給藥，劑量為0.2ml/10g，每日1次，連續(xù)14d；陰性組給予等容積純化水。在末次給藥24h后處死小鼠，剪取離尾根1.5cm處的背部表皮，做常規(guī)組織切片，HE染色。在光鏡下觀察小鼠尾皮膚的角化層、棘細(xì)胞層、顆粒層、真皮層和毛囊的變化，同時計數(shù)100個鱗片中觀察到顆粒層形成的鱗片數(shù)[1]。

1.2.3 對豚鼠耳銀屑病模型的影響 參考文獻(xiàn)方法[3]，豚鼠雌雄各半，先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，又將豚鼠雙耳去毛后，隨機(jī)分為空白組12只、實驗組54只。實驗組采用5%心得安乳劑涂于豚鼠雙側(cè)耳背，空白組涂抹基質(zhì)，每次涂0.3ml，4次/d。涂藥2周后，實驗組取4只、空白組取2只做病理學(xué)檢查：實驗組耳組織出現(xiàn)角化過度及角化不全、顆粒層變薄、真皮層血管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤、乳突突出，證明造模成功。實驗組剩余的50只豚鼠根據(jù)體重和造模結(jié)果隨機(jī)分成5組：中藥祛銀膠囊高、中、低劑量組，消銀膠囊陽性組和陰性組，陰性組和空白組均給予等容積純化水；均灌胃給藥，各組劑量均是1ml/100g·次，2次/d。給藥10d后，12%水合氯醛0.35ml/100g腹腔注射，經(jīng)腹主動脈取血處死，取豚鼠雙耳組織，10%甲醛溶液固定，用石蠟包埋，HE染色后，中性樹膠封片。置光鏡觀察，任選5個視野，行Baker法評分。

1.2.4 對小鼠碳粒廓清速率的影響 參考文獻(xiàn)方法[4]，采用碳粒廓清法測定中藥祛銀膠囊對小鼠單核吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響。SPF級KM小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成5組：中藥祛銀膠囊高、中、低劑量組，消銀膠囊陽性組和陰性組(等容積純化水)。灌胃給藥，1次/d，劑量為0.2ml/10g，連續(xù)7d；第7d給藥后2h，先稱體重，然后各鼠均由尾靜脈注射印度墨汁0.1ml/10g(臨用前用生理鹽水稀釋5倍)；注射完畢立即計時，分別于注射2min后、10min后、18min后，用預(yù)先經(jīng)250u/ml肝素溶液處理過的毛細(xì)管從小鼠左、右眼眶后靜脈叢取血0.02ml，立即吹入盛0.1%Na2CO3液2ml的試管中，混勻，于分光光度計600nm波長處測取光密度(OD值)，作為小鼠碳粒廓清速率指標(biāo)。

2 結(jié) 果

2.1 對小鼠尾鱗片表皮的影響

正常組小鼠表皮顆粒細(xì)胞較少，給藥組為角質(zhì)不均或消失、棘細(xì)胞層增厚、顆粒層增生、基底細(xì)胞分裂減少等。表明中藥祛銀膠囊對鼠尾鱗片表皮顆粒層形成有明顯的促進(jìn)作用，與陰性組比較，各給藥組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與陽性組比較，中藥祛銀膠囊高劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；各給藥組真皮層和毛囊等未見明顯變化。結(jié)果見表1。

表1 對小鼠尾部鱗片表皮的影響( ± s)

表1 對小鼠尾部鱗片表皮的影響( ± s)

注:與陰性組比較,*P＜0.05,**P＜0.01；與陽性組比較,＃P＜0.05。

組別 n 劑量 有顆粒層的鱗片數(shù)(%)陰性組 10---12.04±4.55*陽性組 10 0.6923.02±6.11**高劑量組 10 2.6431.63±6.64**＃中劑量組 10 1.3225.81±5.13**低劑量組 10 0.6619.40±4.70*

2.2 對豚鼠耳銀屑病模型的影響

空白組角質(zhì)層薄，呈網(wǎng)狀交織，約1～2層，顆粒層清晰；棘層細(xì)胞3～5層；基底層單層柱狀細(xì)胞，表皮突平坦；真皮層無淺層毛細(xì)管擴(kuò)張，分布有少量淋巴細(xì)胞。陰性組可見角化過度或角化不全，顆粒層消失或變薄，棘層肥厚，真皮毛細(xì)血管擴(kuò)張還有輕中度炎細(xì)胞浸潤，Baker評分結(jié)果見表2。陰性組與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，證明造模成功。光鏡觀察，各給藥組角化不全或過度角化現(xiàn)象減輕，棘層變薄，顆粒層增加，表明給藥組對改善豚鼠銀屑病樣病變均有效，中藥祛銀膠囊高劑量組優(yōu)于陽性組和低劑量組，呈現(xiàn)劑量依賴型量效關(guān)系。

表2 對豚鼠耳銀屑病模型Baker評分的影響

2.3 對小鼠碳粒廓清速率的影響

見表3研究結(jié)果顯示，各給藥組與陰性組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；祛銀膠囊高劑量組優(yōu)于陽性組和低劑量組，表明中藥祛銀膠囊能降低單核巨噬細(xì)胞對異物的吞噬能力，抑制機(jī)體非特異性免疫功能。

3 討 論

銀屑病人群發(fā)病率0.1%～2%，部分歐洲國家可達(dá)到3%[5]。其發(fā)病機(jī)制未完全明了，目前研究認(rèn)為表皮細(xì)胞的過度增殖，炎癥和免疫學(xué)異常在尋常型銀屑病發(fā)展中起重要作用[6]。本實驗證實祛銀膠囊能促進(jìn)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層的形成，抑制小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂，顯著改善豚鼠耳部銀屑病模型的病理改變，抑制單核巨噬細(xì)胞對異物的吞噬和機(jī)體非特異免疫功能，實驗結(jié)果為祛銀膠囊治療銀屑病提供了藥效學(xué)依據(jù)。

表3 對小鼠碳粒廓清功能的影響(x ± s)

[1]阿布都吉力力·阿布都艾尼，尤力都孜·買買提，熱比姑麗·伊斯拉木.土大黃根提取物對小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2016，13(20):4-7,29.

[2]楊皓瑜，王金平，李夢琳，等.清熱涼血中藥對小鼠銀屑病模型的干預(yù)機(jī)制[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，38(2):111-114.

[3]楊正生，李力，王亞斐，等.姜黃素對豚鼠銀屑病樣動物模型的藥效評價及對增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響[J].中華皮膚科雜志，2015，48(3):175-178.

[4]劉晏，魏剛，朱豐林，等.新痹痛靈對小鼠免疫功能的影響[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，31(5):908-910.

[5]TanJ,WolfeB.A patient decision aid for psoriasis based on current clinical practice guidelines[J].Arch Dermatol,2012,148(6):718-723.

[6]Kim J,Krueger JG.The immunopathogenesis of psoriasis[J].Dermatol Clin,2015,33(1):13-23.

Study on the Mechanism of Quyin Capsules in Treating Psoriasis

FU Rui, YANG Jun
(Dermatology hospital of jining city, Shandong Province, 272000, China)

Objective Pharmacodynamic Mechanism of Quyin Capsules in the Treatment of Psoriasis.Methods The effects of Quyin Capsules on the immune function of mice were observed by using mouse tail scale epidermis model and guinea pig ear psoriasis model.The effects of Quyin Capsules on simulated psoriasis animal model were observed.Results Quyin Capsules can promote the formation of granular layer on the tail scale epidermis of model mice,improve the pathological changes of guinea pig ear psoriasis model and inhibit the non-specific immune function of mice.Conclution Quyin Capsules has the effect of treating psoriasis.

Quyin Capsules;Psoriasis;Psoriasis animal model;Pharmacodynamics

10.19593/j.issn.2095-0721.2017.12.031

濟(jì)寧市中醫(yī)藥科技項目（項目編號ZYY2016-24）

付銳（1976-）女，漢族，山東濟(jì)寧人，碩士學(xué)歷，副主任醫(yī)師。