李航，時(shí)慧，王建華，孫玉萍，劉奇男，崔成偉

（丹東市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 丹東 118002）

2015至2016年度丹東市流感病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析

李航，時(shí)慧，王建華，孫玉萍，劉奇男，崔成偉

（丹東市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 丹東 118002）

目的：分析2015年4月至2016年3月丹東市流感病毒流行情況，了解病毒毒株的型別，為科學(xué)預(yù)防和控制流感提供依據(jù)。方法：采集流感樣病例（ILI）的咽拭子標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測病毒核酸。使用狗腎傳代細(xì)胞株（Madin-Darby canine kidney，MDCK）進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)。結(jié)果：共采集流感樣病例咽拭子1 438份，檢測出流感病毒核酸陽性154份，檢出率為10.71%，流感病毒核酸陽性數(shù)分別為乙型流感病毒Victoria系79份，甲型流感病毒H3N2亞型64份，乙型流感病毒Yamagata系8份，甲型流感病毒新甲型H1N1亞型3份。2016年1月至3月流感病毒核酸檢測陽性率較高。對陽性標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，分離到54株毒株，分離率為35.06%，其中乙型流感病毒Victoria系39株，甲型流感病毒H3N2亞型6株，乙型流感病毒Yamagata系7株，甲型流感病毒新甲型H1N1亞型2株。2015年6月、2016年3月流感病毒分離陽性率較高。不同性別、年齡ILI流感病毒檢測陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：2015至2016年度丹東市流感的流行呈季節(jié)性，易感人群應(yīng)做好流感的預(yù)防措施。

流感；病毒；核酸；病原學(xué)

流行性感冒簡稱流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，是目前尚未有效控制的世界性傳染病，每年導(dǎo)致高達(dá)100萬人死亡［1］。流感病毒分為甲型（A）、乙型（B）、丙型（C）3型，其中甲型流感引起4次世界大流行。流感是第一個(gè)實(shí)行全球監(jiān)測的疾病［2］，流感監(jiān)測是預(yù)防控制流感的關(guān)鍵措施之一，也是每年確定流感流行株、對疫情預(yù)警預(yù)測的基礎(chǔ)［3］。流感潛伏期短，經(jīng)呼吸道飛沫傳播，傳播迅速，抗原易變異，人群對變異株普遍易感，控制難度大［4］。通過流感病原學(xué)監(jiān)測可以了解流感病毒優(yōu)勢株的變化，分析預(yù)測流感流行的趨勢和特點(diǎn)，有效防控流感疫情。因此，本研究通過分析2015至2016年丹東市流感病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果，旨在為本地區(qū)流感的科學(xué)防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 呼吸道病毒采樣管為友康基業(yè)生物科技（北京）有限公司產(chǎn)品；病毒RNA提取試劑盒為上海之江生物科技有限公司產(chǎn)品；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為美國Bio-rad公司產(chǎn)品（IQ5型），實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑為江蘇碩世生物科技有限公司產(chǎn)品；細(xì)胞培養(yǎng)瓶為美國Thermo公司產(chǎn)品；DMEM、胎牛血清、PBS等組織細(xì)胞培養(yǎng)試劑均為美國Gibco公司產(chǎn)品。狗腎傳代細(xì)胞株（Madin-Darby canine kidney，MDCK）由遼寧省疾病預(yù)防控制中心提供，抗A（H1N1）亞型血清、抗A（H3N2）亞型血清、抗B型Yamagata系（BY）病毒血清、抗B型Victoria系（BV）病毒血清由國家流感中心提供。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 參照2010年版《全國流感監(jiān)測方案》，選擇丹東市婦女兒童醫(yī)院和東港市中心醫(yī)院作為監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院。選擇發(fā)病3 d內(nèi)的流感樣病例（influenza-like illness，ILI）（體溫≥38 ℃，伴咳嗽或咽痛之一，而缺乏其他實(shí)驗(yàn)室確定診斷依據(jù)），由哨點(diǎn)醫(yī)院值班醫(yī)生采集其鼻咽拭子標(biāo)本，標(biāo)本在4℃條件下保存，48 h內(nèi)送丹東市疾病預(yù)防控制中心流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，不能在48 h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室的，置－70℃條件下保存，待檢。

1.2.2 核酸提取 吸取200 μl咽拭子標(biāo)本，利用上海之江全自動核酸提取儀（醫(yī)療器械備案憑證編號：滬浦械備20150058號；批號：P20160301）及其配套試劑提取病毒RNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.3 核酸檢測 將提取好的病毒RNA嚴(yán)格按照江蘇碩世生物科技有限公司甲/乙型流感病毒核酸測定試劑盒的說明配制反應(yīng)體系，在美國Biorad公司IQ5型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行甲/乙型流感病毒的核酸檢測分型，陽性樣品繼續(xù)做分型檢測。

1.2.4 病毒分離 將核酸檢測陽性的標(biāo)本接種到MDCK細(xì)胞，置于33℃5%的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變（CPE），當(dāng)CPE達(dá)到75%～100%時(shí)收獲，進(jìn)行紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA），對HA滴度≥8的標(biāo)本進(jìn)行紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)（HI）。陰性樣品繼續(xù)盲傳2代，看是否出現(xiàn)病變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分類變量比較采用Fisher精確檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病毒核酸檢測結(jié)果 2015年4月至2016年3月共檢測ILI咽拭子標(biāo)本1 438份，流感病毒核酸檢測陽性數(shù)154份，檢出率為10.71%。流感病毒核酸陽性數(shù)最高為乙型流感病毒Victoria系79份，其次為甲型流感病毒H3N2亞型64份，乙型流感病毒Yamagata系8份，甲型流感病毒新甲型H1N1亞型3份。不同月份ILI標(biāo)本的檢測結(jié)果見表1，2016年1月至3月流感病毒核酸檢測陽性率較高，說明2016年1月至3月形成活動高峰，主要由乙型流感BV亞型、甲型H3N2亞型流感病毒引起。

表1 2015至2016年度丹東市流感病毒核酸檢測陽性率及病毒型別分布

2.2 病毒分離結(jié)果 對154份流感病毒核酸檢測陽性的咽拭子標(biāo)本進(jìn)行流感病毒分離培養(yǎng)，進(jìn)行血凝試驗(yàn)，陽性毒株54株，分離率為35.06%。對54株毒株進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，具體分型為甲型流感病毒H3N2亞型6株，甲型流感病毒新甲型H1N1亞型2株，乙型流感病毒BV系39株，乙型流感病毒BY系7株。不同月份流感病例標(biāo)本的分離培養(yǎng)結(jié)果見表2，2015年6月、2016年3月流感病毒分離陽性率較高，主要由乙型流感病毒引起。

表1 2015至2016年度丹東市流感病毒核酸檢測陽性率及病毒型別分布

2.3 不同性別、年齡ILI標(biāo)本的檢測結(jié)果 1 438例進(jìn)行流感病毒檢測的ILI中，男性ILI標(biāo)本檢測陽性率與女性比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同年齡ILI標(biāo)本檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 不同性別、年齡ILI標(biāo)本的檢測結(jié)果

3 討論

根據(jù)流感的流行特征，我國北方地區(qū)通常將流感分為流行季（10月至次年3月）和非流行季（4月至當(dāng)年9月）。我國東北地區(qū)屬于典型的溫帶大陸性季風(fēng)氣候，其氣候環(huán)境、遺傳因素等具有明顯的地域特征，以往監(jiān)測顯示，我國流感流行特征南北方差距較大［5-6］，北方地區(qū)以冬季高峰為主，而南方具有冬、夏兩個(gè)高峰［7］。

流感病毒H基因和N基因的多變性可導(dǎo)致抗原突變的出現(xiàn)［8］，每隔幾年，就會有一種逃避人類免疫的變異株出現(xiàn)，引起流感大流行［9］，通過對流感病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測，可以對流感的型別及亞型進(jìn)行鑒定，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)亓鞲胁《镜淖儺?，為流感防控工作提供科學(xué)依據(jù)。

本文對2015年4月至2016年3月ILI的檢測結(jié)果進(jìn)行分析，在2016年1月至2016年3月的冬春季呈現(xiàn)高峰，與既往研究結(jié)果［10-12］一致。流感毒株絕大多數(shù)分離于2016年1月至2016年3月所采集的標(biāo)本，這與遼寧省毒株分離在時(shí)間上基本一致，呈現(xiàn)出明顯的季節(jié)性［13］，且不同性別、年齡LIL流感病毒檢測陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各級醫(yī)療衛(wèi)生單位應(yīng)意識到流感病毒傳染性強(qiáng)、傳播速度快、防控難度大，在流感高發(fā)季節(jié)，發(fā)現(xiàn)疫情要早報(bào)告、早隔離治療、早報(bào)告處理，避免引起流感爆發(fā)。

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EtiologicalAnalysisofSurveillanceResultsofInfluenzafrom2015to2016inDandongCity

LI Hang，SHI Hui，WANG Jianhua，SUN Yuping，LIU Qinan，CUI Chengwei
（Center for Disease Control and Prevention of Dandong，Dandong 118002，China）

Objective：To investigate the prevalent strains and etiologic characteristics of influenza in Dandong from Apr 2015 to Mar 2016，and to provide a scientific basis for the prevention and control of influenza.Methods：Throat swabs of influenza-like illness（ILI） cases were collected.The nucleic acid of influenza viruses was detected by real-time PCR.Influenza viruses were isolated by Madin-Darby canine kidney（MDCK）cells.Results：A total of 1 438 specimens were collected，and 154 were positive for influenza viral RNA with the detection rate of 10.71%.The highest positive number of influenza virus nucleic acid was for 79 copies of Victoria type B influenza，followed by 64 copies of H3N2，8 copies of Yamagata type B influenza and 3 copies of H1N1.The higher detection rate of influenza virus nucleic acid happened in Jan 2016 to Mar 2016.And 54 influenza virus strains were isolated with the detection rate of 35.06%.Among which there were 39 strains of Victoria type B influenza，6 strains of H3N2，7 strains of Yamagata type B influenza and 2 strains of H1N1.The higher positive rate of isolation of influenza virus happened in Jun 2015 and Mar 2016.There was no significant difference in the detection rate of influenza virus between different age and different sex.Conclusion：Influenza in Dandong city from 2015 to 2016 is seasonal，and susceptible population should take preventive measures.

influenza； virus； nucleic acid； etiology

R511.7

A

1008-2344（2017）04-0342-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.04.014

2017-03-03

（文敏編輯）