邢佰穎 陳新梅 秦 樂 岳志敏 郭 輝 段章好

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

昆侖雪菊，屬菊科金雞菊屬一年生草本植物，廣泛分布于我國新疆和田地區(qū)，含有多種活性成分，具有一定的抗氧化[1]；降脂[2]；降血壓[3]等一系列藥理活性，具有極高的藥用價(jià)值。黃酮類化合物是其主要化學(xué)成分之一[4]，是一種較強(qiáng)的抗氧化劑，可清除體內(nèi)自由基[5]，對(duì)緩解疲勞有一定幫助。本試驗(yàn)通過建立小鼠負(fù)重游泳模型，研究昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠抗疲勞作用的影響，為昆侖雪菊的全面利用提供科學(xué)依據(jù)。

1材 料

1.1 儀器

UV-5100紫外可見光分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)；恒溫不銹鋼水浴鍋(上海樹立儀器儀表有限公司)；JM-A3002電子天平(諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥

氯化鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20160902)；亞硝酸鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20160509)；三氯化鋁(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有公司，分析純，批號(hào)：20141215)；氫氧化鈉(天津市廣成化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20140907)； 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：Y01M7S10307)；雪菊(新疆潤元本草有限公司，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)李寶國老師鑒定為昆侖雪菊，批號(hào):20160910)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性昆明種小鼠，體重28～32g。由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)檢中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供。動(dòng)物合格證編SCXK(魯)20160007。

2試驗(yàn)方法

2.1 昆侖雪菊總黃酮的制備

精密稱取研碎后過60目網(wǎng)篩的昆侖雪菊4.00 g，加入40 mL蒸餾水，于90 ℃水浴鍋中熱浸20 min，過濾，重復(fù)2次，合并2次浸漬液得11.14 mg/mL高劑量昆侖雪菊總黃酮。后用蒸餾水稀釋2次，各稀釋1倍，得5.57 mg/mL中劑量和2.78 mg/mL低劑量昆侖雪菊總黃酮[6]。

2.2 小鼠分組與給藥

將40只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為空白組、低劑量組、中劑量組、高劑量組4組，每組10只，并稱量體重，標(biāo)記編號(hào)?？瞻捉M灌胃0.1 mL/10 g生理鹽水，其余各組分別灌胃等量低、中、高劑量昆侖雪菊總黃酮。各組小鼠喂食普通飼料，自由飲水，每日灌胃2次，連續(xù)灌胃給藥30 d。

2.3 小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

連續(xù)灌胃給藥30 d，末次給藥后稱量小鼠體重并在小鼠尾部負(fù)重其體重的6%。給藥30 min[7]后將小鼠放入水深25 cm，水溫20±2℃的游泳箱進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)[8]，記錄小鼠從開始游泳到力竭(小鼠頭部沉入水中8s不再浮出水面時(shí)為體力耗竭[9])所用的時(shí)間。

2.4 數(shù)據(jù)分析

3結(jié) 果

由表1可見，連續(xù)給藥30 d后空白組、低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠游泳時(shí)間依次增加。與空白組相比，高劑量組可極顯著延長小鼠負(fù)重游泳力竭所需要的時(shí)間(P<0.001)。

表1 昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響Table 1 Effects of total flavonoids from coreopsis tinctoria on weight-loaded swimming time in mice

注：與空白組相比，***P<0.001。

4討 論

本試驗(yàn)通過建立小鼠負(fù)重游泳模型，研究昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠抗疲勞作用的影響。疲勞主要是由于身體中的乳酸及其他代謝產(chǎn)物的堆積，導(dǎo)致肌肉張力降低，造成運(yùn)動(dòng)耐久性降低。根據(jù)Harman教授提出的自由基氧化傷害學(xué)說，自由基-脂質(zhì)過氧化疲勞理論成為運(yùn)動(dòng)性疲勞理論的核心[10]。機(jī)體在長時(shí)間高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)需要有氧運(yùn)動(dòng)和無氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合供能，如果持續(xù)時(shí)間很長，機(jī)體缺氧程度就會(huì)加深，因此會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基和中間代謝產(chǎn)物，這說明機(jī)體內(nèi)的自由基是產(chǎn)生疲勞的原因之一[11]。

試驗(yàn)結(jié)果顯示低、中、高劑量組昆侖雪菊總黃酮可不同程度延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，增強(qiáng)其抗疲勞能力[12]，與空白組相比，高劑量組昆侖雪菊總黃酮影響極為顯著。昆侖雪菊含有較高黃酮含量，黃酮具有抗氧化作用，可清除體內(nèi)的自由基，使機(jī)體抗脂質(zhì)氧化能力增強(qiáng)，減少體內(nèi)代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的組織損傷，增強(qiáng)抗疲勞能力，延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。昆侖雪菊主要生長于新疆高海拔地區(qū)，污染少，由于其含有多種活性成分，并有顯著抗氧化、清除自由基的作用，可作為一種茶飲而推廣飲用。

[1] 楊英士,陳偉,楊海燕 等.昆侖雪菊中2個(gè)黃酮類化合物的分離鑒定及其抗氧化活性評(píng)價(jià)[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,37(4):149～154.

[2] 方煊,李雅麗,陳新梅.雪菊黃酮對(duì)脂肪變肝細(xì)胞的降脂效果[J]. 溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,46(10):720-723.

[3] 楊博,張薇. 新疆雪菊化學(xué)成分及研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)工程與裝備,2013,11:140-141.

[4] 丁豪,楊海燕,辛志宏.昆侖雪菊黃酮類化合物的抗氧化相互作用研究[J]. 食品科學(xué),2015,36(25):26-32.

[5] 邱佳俊,高飛,李雅麗 等.雪菊總黃酮抗氧化活性研究[J].中國現(xiàn)代中藥,2015,17(5):435-439.

[6] 沙愛龍,吳瑛,盛海燕 等.昆侖雪菊黃酮對(duì)衰老模型小鼠腦及臟器指數(shù)的影響[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,34(7):66-68.

[7] 張娜娜,陳新梅,劉青 等.人參皂苷脂質(zhì)體對(duì)小鼠低溫力竭游泳試驗(yàn)的初步研究[J]. 藥學(xué)研究,2013,32(2):72-73.

[8] 馮昀熠,梁光義,張永萍 等.絞股藍(lán)對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響[J]. 貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,31(6):80.

[9] 鄭琳,劉瀟陽,周新 等.南極磷蝦油對(duì)負(fù)重游泳小鼠的抗疲勞作用[J]. 大連業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(2):108-110.

[10] 馬向前,胡穎.桑葉總黃酮抗運(yùn)動(dòng)疲勞作用及相關(guān)機(jī)制研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(11):216-219.

[11] 王帥,蔣慧,席琳喬 等.小花棘豆總黃酮對(duì)小鼠游泳運(yùn)動(dòng)能力的影響[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,33(9):49-53.

[12] 鄧炳楠.大豆異黃酮抗疲勞作用及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2015,34(1):55-57.