馮怡錕，胡桂明，?！〖?，蔣玉涵，張　敏，吳會芳，顧　斌，付文靜，任景麗

(鄭州大學第二附屬醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450014)

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率僅次于乳腺癌[1]。宮頸鱗狀細胞癌的癌前病變包括低級別鱗狀上皮病變及高級別鱗狀上皮低度病變。研究[2]證實高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)持續(xù)感染是宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌發(fā)生的重要原因。由于宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的級別判定尚缺乏客觀依據(jù)，在很大程度上受病理科醫(yī)生自身及彼此之間的主觀因素影響，使得最終診斷結(jié)果重復性差、易出現(xiàn)偏差，從而導致臨床漏診或過度治療。因此，為提高宮頸病變診斷的準確性，找到可靠的生物學標志物為組織病理學診斷提供客觀依據(jù)對宮頸癌防治意義重大[3]。本文通過觀察CK4和P16在正常宮頸、宮頸低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達情況，探討兩者在宮頸疾病的診斷及分級中的應用價值。

1　材料與方法

1.1材料收集鄭州大學第二附屬醫(yī)院2016年3月至2017年3月收治的宮頸組織標本140例，其中30例正常宮頸組織，40例低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、40例高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和30例宮頸鱗狀細胞癌。

1.2方法所有組織經(jīng)過質(zhì)量分數(shù)4%中性多聚甲醛進行固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，在 65 ℃ 烤片機內(nèi)烤片，時間為120 min，免疫組化采用EnVision法，病理診斷經(jīng)2位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)生分別閱片。所用一抗P16、CK14及免疫組化試劑盒均購自基因科技(上海)股份有限公司。

1.3結(jié)果判定CK14陽性定位于細胞質(zhì)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒；P16陽性定位于細胞核和細胞質(zhì)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒。依據(jù)顯色程度對陽性程度進行判定：無色：0分；淡黃色：1分；棕黃色：2分；棕褐色：3分。按照陽性細胞占所觀察細胞的比例分為：陽性細胞數(shù)≤10%：1分；>10%～50%：2分；>50%～75%：3分；>75%：4分。最后把2項指標的積分相乘進行結(jié)果判定，結(jié)果分為4級：0～3分：(-)；4～5分：(+)；6～7分：(++)，8分以上：(+++)；其中(+)～(+++)為陽性表達。以后三者總和計算總的陽性表達率。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS 20.0進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料用百分數(shù)表示，比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2　結(jié)果

2.1不同宮頸組織中CK14的表達CK14在正常宮頸、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性表達率分別為86.7%、67.5%、40.0%、26.7%，前2組的陽性表達率明顯高于后2組，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

2.2不同宮頸組織中P16的表達P16在正常宮頸、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性表達率分別為6.7%、42.5%、65.0%、86.7%，前2組的陽性表達率明顯低于后2組，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

3　討論

宮頸癌最常見的組織學類型是鱗狀細胞癌，其發(fā)病是從宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變到浸潤性癌的一個連續(xù)發(fā)展過程。對宮頸癌進行早期篩查、診斷，有利于對患者病情施以有效的控制[4]。

P16蛋白是細胞周期素依賴性激酶的抑制蛋白，具有抑制細胞增殖、調(diào)節(jié)細胞周期的作用[5]。P16蛋白可作為宮頸癌前病變診斷的生物標志物，其免疫組化染色結(jié)果可以用于評估高級別上皮內(nèi)病變。近年來越來越多的研究表明，細胞生長周期的失調(diào)在人類腫瘤的發(fā)生中起重要作用。P16基因以缺失、突變方式廣泛參與腫瘤形成，檢測P16基因有無改變對判斷患者腫瘤的易感性以及預測腫瘤的預后具有十分重要的臨床意義。本研究結(jié)果顯示，在正常鱗狀上皮組織中P16蛋白幾乎不表達，當發(fā)生鱗狀上皮內(nèi)病變及癌變時則以P16蛋白的高表達為特征，上皮細胞呈彌漫陽性。P16陽性表達率與病變級別之間具有正相關(guān)關(guān)系，即從正常宮頸到宮頸上皮內(nèi)病變再到宮頸癌P16陽性率呈逐漸遞增趨勢，提示P16的高表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。鱗狀上皮中P16的陽性表達細胞呈明顯的層片狀分布，在宮頸低級別鱗狀上皮內(nèi)病變組中，P16的陽性細胞絕大多數(shù)分布于鱗狀上皮的下1/3，隨著病變級別升高至宮頸鱗狀細胞癌，陽性細胞則彌漫分布于鱗狀上皮的全層，故觀察陽性細胞的分布情況對于宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變級別的客觀準確判定有重要意義。另外，P16還可以鑒別在組織學中易與宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變相混淆的老年萎縮性改變、鱗狀上皮化生及一些良性鱗狀上皮增生性病變，后三者不表達P16。因此，P16蛋白是一個能夠較好反映宮頸鱗狀上皮病變的指標。

CK14是一種分化特異的蛋白，屬于酸性CK家族。CK14是低相對分子質(zhì)量的CK，主要標志在單層上皮，但也有文獻[6]報道CK14在任何來源和分化程度的鱗狀細胞癌組織標本中都有表達，如肺癌、食管癌、喉癌、宮頸鱗狀細胞癌等惡性腫瘤，可作為診斷鱗狀細胞癌的標志物。相關(guān)研究[7]也證實，在不同來源和分化程度的鱗狀細胞癌組織中均有CK14的表達，因此，CK14不僅可作為協(xié)助上皮性惡性腫瘤診斷的有效指標，也可作為鱗狀細胞癌診斷的一項腫瘤標志物[7-8]。CK14在腫瘤的診斷、療效評價和預后評估方面具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，在正常宮頸和絕大多數(shù)宮頸低級別鱗狀上皮內(nèi)病變中，CK14彌漫陽性表達，在宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌病變中CK14幾乎不表達。CK14隨著宮頸疾病的進展，表達逐漸降低。在實際工作中，單憑組織學特點有很大一部分宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變難以區(qū)分高、低級別，本研究發(fā)現(xiàn)CK14對于鑒別宮頸低級別鱗狀上皮內(nèi)病變與高級別鱗狀上皮內(nèi)病變有指導意義，可以解決病理科醫(yī)生在病變分級方面的困惑，對后續(xù)的臨床治療方案的制定也有很大幫助。

本研究聯(lián)合檢測了P16、CK14在正常宮頸、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達，結(jié)果顯示，隨著宮頸疾病的進展，P16表達逐漸升高，而CK14的表達逐漸降低。此2項指標可作為早期診斷宮頸癌前病變及宮頸癌的標志物，對早期準確診斷有著積極意義，可以為臨床診療對策的制定提供確實有效的幫助，值得推薦應用于宮頸病變組織的日常病理診斷工作，其聯(lián)合檢測可作為宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變分級與鱗狀細胞癌診斷的重要輔助指標，從而提高宮頸病變組織學診斷的準確性和病理科醫(yī)生之間診斷的一致性。

總之，P16的表達在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中逐漸增高；CK14在正常宮頸組織和宮頸低級別鱗狀上皮內(nèi)病變中高表達，而在宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸鱗狀細胞癌組織中低表達或無表達。兩者聯(lián)合檢測在宮頸癌前病變的分級以及宮頸癌的早期診斷中有重要的價值。