祝行琴

（浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院 浙江 杭州 310008）

結直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，其在我國的發(fā)病率正逐年攀升，尤其在東南沿海等發(fā)達地區(qū)[1]。而結直腸腺癌是由結直腸腺瘤逐步發(fā)展而來，因此，通過研究結直腸腺瘤的發(fā)病機制能夠進一步揭示結直腸腺癌的起源。維生素D廣為人知的功能是其調(diào)節(jié)小腸、骨骼和腎臟對鈣離子的吸收及代謝。近年來，有研究者認為維生素D與結直腸癌有著密不可分的聯(lián)系[2]?；谝陨涎芯楷F(xiàn)狀，本研究旨在探討維生素D及其受體與結直腸癌癌前病變——結直腸腺瘤的相關性。

1.資料與方法

1.1 一般資料

2016—2017年期間收集本院被確診為結直腸腺瘤患者病例45例，其中男性22例，女性23例，年齡36～72歲，獲取其全血標本及組織標本。納入標準：經(jīng)病理學確診的結直腸腺瘤患者，具有完整臨床和病理資料；無免疫相關疾病或其他原發(fā)腫瘤病史。以同時期本院健康查體人群30例作為正常對照組，排除自身免疫相關疾病及長期服用激素者。

1.2 ELISA技術測定血漿維生素D濃度

收集全血標本，離心并取上清，于-80℃長期保存。采用25羥基總維生素D定量測定試劑盒(LIAISON 25-OH Vitamin D TOTAL Assay，DiaSorin Inc.USA)，利用LIAISON化學發(fā)光分析儀檢測，試劑盒檢測范圍為4.0～150ng/mL。

1.3 RNA的提取

收集組織用液氮冷凍后于存-80℃長期保存。組織加入Trizol試劑后進行勻漿處理，將組織充分裂解。隨后加入氯仿200μL，劇烈震蕩15s，12000g離心15min，將上清液移至另一離心管中，加入等體積異丙醇冰上沉淀，75%乙醇洗滌、空氣干燥后，以適量DEPC水溶解并檢測RNA的純度及濃度。

1.4 熒光實時定量PCR技術

取上述提取的RNA為模板，首先進行逆轉錄PCR將RNA轉錄成cDNA，再以cDNA為模板進行實時定量PCR。VDR引物上游：CTGACCCTGGAGACTTTGAC，下游：TTCCTCTGCACTTCCTCATC。反應條件：變性95℃ 5s、退火55℃ 15s、延伸72℃ 20s，40個循環(huán)。以2-△△Ct法分析目的基因相對表達量。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS20.0進行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布資料以均數(shù)±方差描述，兩組比較采用兩獨立樣本t檢驗；非正態(tài)資料以中位數(shù)(IQR)表示，兩組比較采用Mann-whitney U檢驗分析。

2.結果

2.1 維生素D在結直腸腺瘤患者中低表達

經(jīng)檢測，正常組血漿中25-OH-D的濃度（41.35ng/ml±4.570ng/ml）明顯高于結直腸腺瘤組（22.28ng/ml±2.445ng/ml，P＜0.01）；同時，我們將腺瘤組的血漿維生素D濃度與患者的年齡、性別、吸煙、飲酒、腫瘤的部位、大小、病理類型等進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)均無相關性。而將維生素D缺乏作為獨立危險因素進行分析，其腺瘤組表現(xiàn)為（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084）。

2.2 維生素D受體在結直腸腺瘤患者中低表達

以正常組的組織作為參照，正常組織VDRmRNA的表達水平（1.00±0.22）明顯高于腺瘤組織（0.52±0.08，P＜0.01），但結直腸腺瘤組織中VDRmRNA的表達與患者的年齡、性別、吸煙、飲酒、腫瘤大小、病理類型等的關系，我們未發(fā)現(xiàn)其相關性。

3.討論

有文獻報道稱維生素D缺乏是結直腸癌的危險因素，研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)血中25-(OH)D的水平與大腸癌的患病風險呈負相關[3]。而本研究中兩組血漿維生素D比較來看，正常組明顯高于腺瘤組（P＜0.01），將維生素D缺乏作為危險因素計算出腺瘤組（OR：4.875；95%CI：2.144～11.084），研究結果進一步說明維生素D在腺瘤形成的時期便開始減少，并貫穿從腺瘤到腺癌的過程，可以作為結直腸腺瘤的獨立危險因素。而維生素D發(fā)揮生物學效應的重要條件之一便是與維生素D受體相結合。有研究證實，維生素D能在結腸腺癌細胞中與維生素D受體結合，從而通過調(diào)節(jié)下游靶基因如MYC、EGFR等，促進腫瘤細胞的凋亡，從而抑制細胞增殖[4]。因此，若缺乏維生素D受體，則即使補充維生素D也無法發(fā)揮抗腫瘤的作用。結合本研究中的發(fā)現(xiàn)，腺瘤組織中的維生素D受體表達顯著降低（P＜0.01），這說明維生素D受體表達水平的降低從結直腸腺瘤階段已經(jīng)發(fā)生了，并貫穿結直腸癌癌變的過程。在結直腸腺瘤患者中維生素D受體表達的底下以及血漿維生素D水平的降低共同影響促進了腺瘤的發(fā)生發(fā)展并進一步促進腺瘤向腺癌發(fā)展的進程。

綜上所述，血漿維生素D可作為結直腸腺瘤的危險因素，維生素D或可作為預防結直腸腺瘤的藥物，但由于服用高劑量的維生素D存在高鈣血癥的風險，因此在注重提高維生素D攝入量的同時再提高維生素D受體的水平使之能更好地結合共同發(fā)揮抗腫瘤作用，同時也能不引起高鈣血癥。另一方面，由于維生素D缺乏在正常人群中也普遍存在[5]，將維生素D作為結直腸腺瘤的診斷標志物并不合適。

[1]代珍,鄭榮壽,鄒小農(nóng)，等.中國結直腸癌發(fā)病趨勢分析和預測[J].中華預防醫(yī)學雜志, 2012, 46(7): 598-603.

[2] Ranji P,Akbarzadeh A,Rahmati-Yamchi M.Associations of Probiotics with Vitamin D and Leptin Receptors and their Effects on Colon Cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev.2015;16(9):3621-7.

[3] Jenab M,Bueno-de-Mesquita HB,Ferrari P,et al.Association between pre-diagnostic circulating vitamin Dconcentration and risk of colorectal cancer in European populations:a nested case-control study[J]. BMJ. 2010,340:b5500.

[4]方瑩,宋皓軍,丁小云. 維生素D抗結直腸癌的研究進展[J].腫瘤, 2014; 11:1064.

[5] Khadilkar VV,Khadilkar AV.Use of Vitamin D in Various Disorders[J]. Indian J Pediatr.2013;80(3):215-8.