滿 洋,楊 璞,李晞睛,曲映紅
(上海海洋大學(xué),食品科學(xué)與工程國家級實驗教學(xué)示范中心,上海 201306)
銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉含有多種生物活性成分,其中的黃酮類化合物具有抗氧化、防止衰老、抑菌抗病毒等功效,且安全可靠,食用健康,可用于加工藥品和保健食品。從植物中提取黃酮通常使用的溶劑是水或乙醇水溶液,并輔以微波、超聲波等以提高提取效率[1-6]。本文用乙醇水溶液浸提銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉中的粗黃酮,并考察提取物對DPPH自由基的清除能力,旨在為開發(fā)綠色安全的天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。
干燥的銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉購于上海。
試劑:1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH),乙醇,均為分析純。
儀器:LLJ-306Z粉碎機(jī),江門市貝爾斯頓電器有限公司;AL204電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;KQ5200E超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;752N紫外可見分光光度計,上海儀電分析儀器有限公司。
1.2.1 粗黃酮的提取
分別將已干燥的銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉粉碎,過60目篩。精確稱取10 g碎葉粉末,料液比分別為1:30、1:25、1: 20、1: 15、1:10條件下,用70%乙醇于70℃超聲浸提[7-8]120 min,5000 rpm離心5 min,上清液即為銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉醇提粗黃酮溶液。其他條件不變,以水為提取劑時,可得到銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉水提粗黃酮溶液。
1.2.2 DPPH自由基清除率的測定
將提取得到的粗黃酮溶液按照方敏和勾明玥[9-10]的實驗方法,測定粗黃酮溶液和空白反應(yīng)混合物在517 nm處的吸光度,根據(jù)下列公式計算清除率:
K(%)=[1-(A1- A2)/A0]×100 式中,K為樣品對DPPH 自由基的清除率,A1為DPPH溶液加粗黃酮溶液后的吸光度,A2為粗黃酮溶液在測定波長的吸光度, A0為DPPH溶液不加粗黃酮溶液的吸光度。
圖1 醇提粗黃酮對DPPH自由基的清除率Fig.1 The scavenging rate of crude flavonoids extracted with ethanol to DPPH radicals
從圖1可以看出,三種植物葉的醇提粗黃酮對DPPH自由基的清除率隨料液比的提高而增大,大小順序為烏飯樹葉>桑葉>銀杏葉。選定的五種料液比條件下,烏飯樹葉醇提粗黃酮的DPPH清除率都在80%以上,顯示出優(yōu)良的抗氧化活性。隨料液比的增加,桑葉醇提粗黃酮的DPPH清除率快速上升,當(dāng)料液比達(dá)到1:10時,清除率已上升至近80%。銀杏葉醇提粗黃酮對DPPH自由基的清除率隨料液比的增加上升緩慢,均為50%以下。
圖2 水提粗黃酮對DPPH自由基的清除率Fig.2 The scavenging rate of crude flavonoids extracted with water to DPPH radicals
從圖2可以看出,三種植物葉的水提粗黃酮對DPPH自由基的清除率隨料液比的提高而增大,大小順序為銀杏葉>烏飯樹葉>桑葉。當(dāng)料液比升至1:20時,銀杏葉水提粗黃酮的DPPH自由基清除率達(dá)80%以上;料液比達(dá)1:15時,烏飯樹葉水提粗黃酮的DPPH自由基清除率也上升至70%以上。桑葉水提粗黃酮對DPPH自由基的清除率較低,為60%以下。
銀杏葉水提粗黃酮的DPPH自由基清除率高于醇提粗黃酮,而烏飯樹葉和桑葉醇提粗黃酮的DPPH自由基清除率高于水提粗黃酮。當(dāng)料液比上升到1:15時,烏飯樹葉醇提和水提粗黃酮都顯示出較高的DPPH自由基清除能力。
銀杏葉、烏飯樹葉和桑葉的醇提和水提粗黃酮均有一定的DPPH自由基清除能力,其中,烏飯樹葉水提粗黃酮和銀杏葉醇提粗黃酮顯示了較高的抗氧化能力,是良好的天然抗氧化劑,值得進(jìn)一步開發(fā)利用。
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