□ 李智高 毛永楊 蘇 濤 田金蘭 大理州食品檢驗(yàn)檢測(cè)院

隨著食品工業(yè)的不斷發(fā)展以及人們對(duì)健康問題的重視，食品安全受到越來越多的關(guān)注[1]。當(dāng)前，在食品安全性要求越來越高的背景下，天然食品防腐劑成為研究重點(diǎn)。在天然食品防腐劑中，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶是比較常見的三類。根據(jù)相關(guān)的報(bào)道，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果十分好，本實(shí)驗(yàn)擬在符合GB 2760-2014規(guī)定的情況下，研究乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果，為其應(yīng)用范圍的擴(kuò)大提供參考資料。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致食品污染的常見微生物，因而選擇這兩種菌為供試菌種。

1 材料與方法

1.1 材料

乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均購(gòu)自安徽省某化學(xué)試劑廠，而大腸桿菌和金黃色葡萄球菌由某學(xué)院生命科學(xué)系提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 試劑制備

進(jìn)行試劑制備時(shí)，分別制備質(zhì)量濃度為0、2、5、10、30、50 g/L的乳酸鏈球菌肽、溶菌酶溶液備用。

1.2.2 培養(yǎng)基制備

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基制備，高壓蒸汽滅菌備用。

1.2.3 菌懸液制備

在制備過程中，在無菌條件下，將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種在2個(gè)試管斜面上，放置在溫度為37 ℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行活化培養(yǎng)，時(shí)間為24 h。將活化培養(yǎng)完成的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌使用2 mL、0.85%氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫，并將洗脫液分別倒入包含一定量液體培養(yǎng)基的三角瓶中，將恒溫振蕩器放置其中，并進(jìn)行2 h震蕩培養(yǎng)，然后就可以獲得兩種細(xì)菌的混懸液。

1.2.4 接種培養(yǎng)

使用移液管取出9 mL培養(yǎng)基，然后將其倒入50 mL的三角瓶中，并在三角瓶中加入1 mL、質(zhì)量濃度為50 g/L的乳酸鏈球菌肽試液，均勻搖晃，將其搖勻。根據(jù)同樣的方法，分別添加質(zhì)量濃度為0（無菌水，為對(duì)照組）、2、5、10、30 g/L的乳酸鏈球菌肽試液，因而，乳酸鏈球菌肽的實(shí)際使用量分別是0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L。然后使用移液管在上述三角瓶中分別添加1.0 mL的制備好的菌懸液。每一個(gè)質(zhì)量濃度共做3組重復(fù)，并使用細(xì)菌過濾膜對(duì)每一個(gè)瓶口進(jìn)行包裹。置恒溫振蕩器內(nèi)37 ℃進(jìn)行18 h的震蕩培養(yǎng)。另外取1.1 mL無菌水，將其加入到包含9 mL培養(yǎng)基的三角瓶中，將其用作調(diào)零。

使用同樣的方法分別制備溶菌酶的質(zhì)量濃度為0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L的培養(yǎng)液，使用與上述相同的方法進(jìn)行接種培養(yǎng)。

1.2.5 OD值測(cè)定

在培養(yǎng)完成后，從每一個(gè)三角瓶中取出1 mL培養(yǎng)液，同時(shí)利用無菌水對(duì)其進(jìn)行10倍稀釋，然后使用分光光度計(jì)，在550 nm波長(zhǎng)的位置對(duì)其吸光值進(jìn)行測(cè)定，每一個(gè)樣品都進(jìn)行3次測(cè)定[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

與對(duì)照組相比，乳酸鏈球菌肽對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著質(zhì)量濃度的增加不斷增強(qiáng)。在乳酸鏈球菌肽的質(zhì)量濃度為0.2 g/L，乳酸鏈球菌肽對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經(jīng)比較明顯，在乳酸鏈球菌肽的質(zhì)量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時(shí)，其OD值已經(jīng)接近或者為0。在溶菌酶質(zhì)量濃度為0.3 g/L時(shí)，與對(duì)照組相比，其對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經(jīng)比較明顯，在溶菌酶質(zhì)量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時(shí)，其OD值已經(jīng)接近或者為0。

從總體上看，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著其質(zhì)量濃度的增加而不斷增強(qiáng)。

3 討論

乳酸鏈球菌肽又可以稱為乳球菌肽，它是一種通過蛋白質(zhì)發(fā)酵而提取的。乳酸鏈球菌肽可以很好地抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的生長(zhǎng)。通常情況下，它對(duì)革蘭氏陰性菌的作用不是十分明顯，但是在冷凍、加熱等特定條件下，會(huì)使革蘭氏陰性菌死亡，起到好的殺菌效果。溶菌酶是一種水解酶，多存在于哺乳動(dòng)物的體液、乳汁以及禽類蛋白中，同時(shí)在微生物以及植物中也有。溶菌酶一種很好的抑菌蛋白，分為酵母菌細(xì)胞壁溶解酶、細(xì)菌細(xì)胞壁溶解酶以及霉菌細(xì)胞壁溶解酶。溶菌酶在枯草桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌等細(xì)菌中的效果很好，其本身無毒害，安全性很高，放心使用。

4 結(jié)語

乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有很好的抑制作用。考慮到乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均安全無害，因而其最佳抑菌濃度可以為1.0 g/L ，此時(shí)其細(xì)菌殺滅相對(duì)比較好。