李狀狀，李 霞,2，王縉云，張曉雨，梁 艷

(1.大連海洋大學(xué)，遼寧省海洋生物資源恢復(fù)與生境修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023;2.大連海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

細(xì)胞培養(yǎng)是指將有機(jī)體內(nèi)的某一組織取出，使其分散成單個細(xì)胞，在人工條件下細(xì)胞存活、生長和分裂的技術(shù)。魚類細(xì)胞培養(yǎng)始于二十世紀(jì)六十年代，由Wolf等[1]建立了世界上第一個魚類細(xì)胞系——虹鱒(Oncorhynchusmykiss)性腺細(xì)胞系RTG-2,目前已報道的魚類細(xì)胞系超過280株。這些細(xì)胞系被應(yīng)用于病毒學(xué)、毒理學(xué)、生理學(xué)、腫瘤及基因工程等多個研究領(lǐng)域，近幾年魚類細(xì)胞系作為環(huán)境污染物的監(jiān)測生物得到廣泛的重視。

環(huán)境污染物是指進(jìn)入環(huán)境后改變環(huán)境的正常組成和性質(zhì)，進(jìn)而直接或間接有害于人類與其他生物的物質(zhì)。近些年，隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)快速發(fā)展，大量的污染物隨廢水及地表徑流排放到水體中，使水資源環(huán)境遭受了一定的破壞[2]。進(jìn)入水體中的主要是重金屬(Cd、Cr、Zn等)、有機(jī)化合物(酚類化合物、有機(jī)農(nóng)藥、多環(huán)芳羥類等)、生物學(xué)性毒素(病菌、病毒等)等。其中重金屬的影響尤其嚴(yán)重。

篩選檢測水環(huán)境污染物的指示生物很重要。以往的工作主要是利用成體魚作為檢測指標(biāo)，研究內(nèi)容包括污染物對魚體組織的損傷[3-5]、在魚體內(nèi)的富集和分布[6-7]及對魚類生長發(fā)育的影響[8-9]等方面。隨著魚類細(xì)胞系的建立，利用細(xì)胞系研究污染物的毒性效應(yīng)[10-11]、遺傳學(xué)損傷[12-13]及對基因表達(dá)的影響[14-15]等方面的研究也有較多的報道。由于魚類自身具有排毒和免疫作用，所以只有污染情況達(dá)到一定程度時一些不良生理指標(biāo)才能表現(xiàn)出來，并且個體間也有差異，靈敏度也較差。體外培養(yǎng)的魚類細(xì)胞可以直接和污染物接觸，具有靈敏度高、均一性好、觀察方便等特點(diǎn)，是毒理學(xué)研究理想的試驗(yàn)材料。筆者綜述重金屬對魚類細(xì)胞系影響的研究進(jìn)展，以期為環(huán)境監(jiān)測及細(xì)胞毒理學(xué)研究提供幫助。

1 重金屬對魚類細(xì)胞系的影響

重金屬可分為必需金屬和非必需金屬，約有45種。必需金屬是機(jī)體進(jìn)行正常生理活動所不可缺少的，如Cu、Fe、Se、Zn、Mg、Co等。重金屬含量較低時，對有機(jī)體的生長發(fā)育有促進(jìn)作用，但當(dāng)濃度超過一定閾值時，就會對機(jī)體產(chǎn)生毒害作用[16]。非必需金屬包括Cd、Hg、Ag、Pb、Au等，它們不參與機(jī)體的代謝反應(yīng)，濃度較低時就可對機(jī)體產(chǎn)生毒性效應(yīng)。我國水體中可檢測的重金屬有Cd、Cr、Zn、Cu、Pb、Ni、Hg、Fe等，其中危害程度較大的是Cd、Cr、Zn、Cu和Pb[17]。

1.1 重金屬對細(xì)胞系的毒性研究

早在1968年Rachlin等[18]首次利用體外培養(yǎng)的胖頭鯉(Pimephalespromelas)肌肉細(xì)胞系檢測環(huán)境中Zn的毒性作用，得出細(xì)胞存活率與鋅離子濃度之間呈正相關(guān)毒性效應(yīng)。以后利用魚類細(xì)胞系進(jìn)行重金屬的毒性效應(yīng)及毒理學(xué)研究工作廣泛開展起來。Babich等[19]研究了幾種重金屬對BF-2細(xì)胞系的毒性作用，結(jié)果顯示重金屬毒性大小為Ag>Hg>Cd>Zn>Cu>Co>Ni>Mn>Sn>Pb>Cr(三價)。Maraeine等[20]研究了6種重金屬對虹鱒RTG-2細(xì)胞系的毒性效應(yīng)，得出重金屬毒性大小為Hg>Cd>Zn>Cu>Pb>Ni。Tan等[21]研究了4種重金屬對草魚(Ctenopharyngodonidellus)鰭條細(xì)胞系、草魚腎細(xì)胞系、鯉魚(Cyprinuscarpio)上皮瘤細(xì)胞系、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)卵巢細(xì)胞系，褐色大頭魚(Brownbullhead)肌肉細(xì)胞系和胖頭鯉肌肉細(xì)胞系6種魚類細(xì)胞系的毒性作用，結(jié)果表明6種細(xì)胞系對4種重金屬的敏感性大小為Cr和Cd>Zn>Cu，Cu對草魚腎細(xì)胞系比其他細(xì)胞系毒性更強(qiáng)，而Cr和Zn對鯉魚上皮瘤細(xì)胞系比其他細(xì)胞系毒性更強(qiáng)，Cd是對胖頭鯉肌肉細(xì)胞系毒性最強(qiáng)的重金屬，4種重金屬對草魚鰭條細(xì)胞系、胖頭鯉肌肉細(xì)胞系均表現(xiàn)為中度毒性，Cu對褐色大頭魚細(xì)胞系毒性最低，其余重金屬均表現(xiàn)為中度毒性，認(rèn)為草魚腎細(xì)胞系、胖頭鯉肌肉細(xì)胞系、鯉魚上皮瘤細(xì)胞系可作為重金屬毒性應(yīng)急評估較為敏感的生物檢測指標(biāo)。以上研究可以看出，Hg和Cd兩種重金屬在已研究的細(xì)胞系中表現(xiàn)為強(qiáng)毒性，Zn和Cu兩種重金屬對大多數(shù)細(xì)胞系表現(xiàn)為中度毒性，而其他重金屬對不同細(xì)胞系或同一種魚不同組織的細(xì)胞系則表現(xiàn)出強(qiáng)弱不同的毒性效應(yīng)。分析認(rèn)為，Hg和Cd作為有毒的重金屬，其能夠競爭性的替換Ca2+、Fe2+、Zn2+等金屬離子在膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白上的結(jié)合位置，通過改變Ca2+等其他離子通道大量進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)而造成細(xì)胞毒性[22]。

吳迪等[23]研究發(fā)現(xiàn)二倍體泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)鰭細(xì)胞系對重鉻酸鉀的敏感性高于三倍體泥鰍鰭細(xì)胞系。譚鳳霞等[10]研究Zn2+、Cd2+、Cu2+和Cr6+4種重金屬對稀有鮈鯽(Gobiocyprisrarus)鰭細(xì)胞系的毒性作用時發(fā)現(xiàn)，4種重金屬對稀有鮈鯽鰭條細(xì)胞系的毒性效應(yīng)均隨著傳代代數(shù)的增大而下降。以上研究結(jié)果說明細(xì)胞類型以及傳代次數(shù)對重金屬的吸收能力有一定的影響，這可能與細(xì)胞內(nèi)金屬硫蛋白基因的分類與分布不同相關(guān)，從而引起細(xì)胞對重金屬的隔離與解毒能力的差異[24]。

不同重金屬形態(tài)(是指重金屬的價態(tài)、結(jié)合態(tài)、化合態(tài)和結(jié)構(gòu)態(tài)4個方面，即重金屬元素在環(huán)境中以某種離子或分子存在的實(shí)際形式)對細(xì)胞系毒性效應(yīng)不同[25-26]。Babich等[19]研究了18種金屬鹽對BF-2細(xì)胞系的毒性作用，結(jié)果顯示陰離子配合物毒性為亞砷酸鹽>重鉻酸鹽>鉻酸鹽>砷酸鹽>亞硒酸鹽>高錳酸鹽>硒酸鹽。Goswami等[11]研究了Zn和Cd不同二價鹽對印度鯉科魚類Labeorohita鰭細(xì)胞系中的毒性，發(fā)現(xiàn)毒性排序?yàn)镃dCl2

納米級新型材料在工業(yè)生產(chǎn)與科學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用，是生物學(xué)(化妝品、牙膏等)、醫(yī)學(xué)(藥品)和物理學(xué)(光學(xué)，通信工程等)應(yīng)用必不可少的納米材料。由于其化學(xué)成分和納米尺度特征，研究其潛在毒性對生物系統(tǒng)的影響具有重要意義。Fernández等[27]研究評估新型材料氧化鋅納米顆粒、ZnO和Zn2+對魚類細(xì)胞株(RTG-2，RTH-149和RTL-W1)的細(xì)胞毒性潛力，指出氧化鋅納米顆粒的毒性顯著高于整體ZnO和Zn2+。Munari等[28]研究了用甲基聚乙二醇(M-PEG)包被的CdS量子點(diǎn)和硫化銀對RTG-2細(xì)胞系的細(xì)胞毒性，并發(fā)現(xiàn)CdS量子點(diǎn)在高質(zhì)量濃度(10 μg/mL和50 μg/mL)表現(xiàn)出高度細(xì)胞毒性，而Ag2S不顯示細(xì)胞毒性效應(yīng)。已有研究發(fā)現(xiàn)，這些新型納米材料既可使原有重金屬的毒性增強(qiáng)(ZnO-NPs)，也可使有毒重金屬變?yōu)闊o毒重金屬(Ag2S)，納米顆粒的毒性來自它們具有更大的反應(yīng)性和潛在增加細(xì)胞攝取重金屬的能力[29-30]。因此研究重金屬生產(chǎn)的新型材料對解決水環(huán)境污染問題、更新和補(bǔ)充重金屬的排放標(biāo)準(zhǔn)有著非常大的作用。

1.2 重金屬對魚類遺傳學(xué)損傷性的研究

遺傳學(xué)損傷是指體內(nèi)如DNA、RNA等遺傳物質(zhì)和相關(guān)的物質(zhì)載體等受內(nèi)外因素影響，導(dǎo)致遺傳物質(zhì)或者載體等發(fā)生損傷(如斷裂、缺失等)，引起的系列遺傳的生理病理改變的現(xiàn)象。細(xì)胞凋亡率、單細(xì)胞電泳形成的彗星拖尾率等以及微核率是常用的檢測DNA損傷的指標(biāo)，是評價環(huán)境中有毒物質(zhì)對細(xì)胞造成遺傳損傷的一項(xiàng)非常有意義的參數(shù)[31]。細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，它在多細(xì)胞生物清除異常細(xì)胞、調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)等方面起著至關(guān)重要的作用[32]，而重金屬能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且凋亡率與重金屬含量呈正相關(guān)。項(xiàng)黎新等[33]用Cd2+、Cr6+、Hg2+、Cu2+、As5+和Pb2+等重金屬離子進(jìn)行脅迫誘導(dǎo)草魚ZC7901細(xì)胞，經(jīng)末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口末端標(biāo)記法檢測后發(fā)現(xiàn)6種重金屬均能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。Wang等[34]采用DNA斷裂分析和流式細(xì)胞技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)亞砷酸鈉能夠通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)野生細(xì)鱗鯻(Theraponjarbua)鰭細(xì)胞系(JF細(xì)胞)產(chǎn)生細(xì)胞凋亡。Krumschnabel等[12]應(yīng)用SUB-G1法[30]測定鎘和銅引起虹鱒鰓和肝細(xì)胞系細(xì)胞凋亡。Morcillo等[35]研究重金屬Cd、Hg、MeHg(甲基汞)、As和Pb對金頭鯛(Sparusaurata)SAF-1細(xì)胞系的遺傳毒性，結(jié)果表明凋亡細(xì)胞數(shù)目隨著重金屬濃度的增加而增加。

彗星試驗(yàn)是一種在單細(xì)胞水平上通過測定細(xì)胞的拖尾率和遷移長度來檢測DNA微損傷的方法。白麗雯等[36]采用該方法研究CuSO4對松江鱸(Trachidermusfasciatus)腎細(xì)胞系的DNA損傷作用，發(fā)現(xiàn)CuSO4可以導(dǎo)致松江鱸腎細(xì)胞發(fā)生拖尾和遷移，且拖尾率和遷移長度在半致死質(zhì)量濃度時與對照組存在差異顯著(P<0.05)。筆者利用該方法研究了氯化鋅和硫酸銅分別對不同倍性泥鰍鰭細(xì)胞系的DNA損傷程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著重金屬含量的逐漸增大，細(xì)胞的拖尾率和遷移長度均逐漸增大，在高含量時與對照組存在極差異顯著(P<0.01)。

檢測重金屬對細(xì)胞系DNA損傷的另外一個指標(biāo)是微核率[37]。重金屬污染可使細(xì)胞有絲分裂產(chǎn)生異常形成微核，微核是有絲分裂后期無著絲粒的染色體片段或染色體單體滯留在細(xì)胞質(zhì)中形成的，一般呈圓形或橢圓形。在污染物脅迫下，成體魚紅細(xì)胞微核率變化已成為重要的檢測指標(biāo)，但在魚類細(xì)胞系鮮有報道。吳迪等[23]的研究發(fā)現(xiàn)不同倍性泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)鰭細(xì)胞系的微核率隨著重鉻酸鉀含量的增大，二倍體和三倍體泥鰍鰭細(xì)胞系的微核率均先升高后下降，且三倍體細(xì)胞系微核率高于二倍體細(xì)胞系。認(rèn)為微核率出現(xiàn)下降的原因是Cr6+含量過高時，抑制細(xì)胞的正常分裂或使細(xì)胞核完全裂解，造成微核率降低。但也有報道認(rèn)為微核率與重金屬濃度呈正相關(guān)的關(guān)系。白麗雯等[36]研究發(fā)現(xiàn)隨著CuSO4含量的增大松江鱸腎細(xì)胞系的微核率逐漸增大，最高達(dá)14.33‰。由此可見微核率可作為重金屬的檢測指標(biāo)。

1.3 重金屬對魚類細(xì)胞系基因表達(dá)的影響

在細(xì)胞內(nèi)與重金屬結(jié)合的主要是金屬硫蛋白。金屬硫蛋白是一種低分子量富含半胱氨酸的具有必需金屬和非必需金屬離子解毒的金屬結(jié)合蛋白[28]。重金屬離子誘導(dǎo)的金屬硫蛋白基因的表達(dá)，已被證明在隔離和解毒各種重金屬離子中發(fā)揮重要的作用[37]。金屬硫蛋白的一個顯著特點(diǎn)就是在轉(zhuǎn)錄水平上能夠被環(huán)境中的重金屬所誘導(dǎo)。當(dāng)外界重金屬元素含量達(dá)到一定值時誘導(dǎo)MT表達(dá)，且MT表達(dá)水平的高低與重金屬含量直接相關(guān)。Chan等[38]研究Cu2+、Hg2+、Cd2+、Zn2+4種重金屬對斑馬魚(Daniorerio)肝細(xì)胞系ZFL金屬硫蛋白基因表達(dá)量時，得出Cd2+是對體外細(xì)胞系金屬硫蛋白基因的表達(dá)最有力的誘導(dǎo)劑。Minghetti等[13]應(yīng)用微列陣技術(shù)研究3種重金屬(Cu、Zn和Cd)對金頭鯛細(xì)胞系SAF-1金屬硫蛋白基因的表達(dá)影響，研究得知，Cu、Zn和Cd均能增加金屬硫蛋白基因的表達(dá)量。吳迪等[39]利用實(shí)時定量PCR技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)重鉻酸鉀可誘導(dǎo)二倍體泥鰍鰭細(xì)胞系(DIMF)金屬硫蛋白基因表達(dá)量顯著升高。Cheuk等[40]運(yùn)用RT-PCR方法研究了不同重金屬(Zn2+、Cd2+、Cu2+、Hg+、As3+、As5+、Cr3+和Cr6+)對斑馬魚肝細(xì)胞系ZFL和斑馬魚尾鰭細(xì)胞系SJD金屬硫蛋白基因金屬調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1(MTF-1)mRNA誘導(dǎo)表達(dá)情況，結(jié)果表明每種金屬離子均可誘導(dǎo)SJD細(xì)胞系MTF-1 mRNA水平的表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)Zn2+和Cd2+在兩個細(xì)胞系均為最強(qiáng)誘導(dǎo)劑。這與Chan等[38]研究的結(jié)果一致。

也有報道，某些重金屬離子選擇性的增加某些細(xì)胞系內(nèi)金屬硫蛋白基因的表達(dá)。Cheuk等[40]運(yùn)用RT-PCR方法研究了不同重金屬(Zn2+、Cd2+、Cu2+、Hg+、As3+、As5+、Cr3+和Cr6+)對斑馬魚ZFL細(xì)胞系(肝)金屬硫蛋白基因金屬調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1(MTF-1)mRNA誘導(dǎo)表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)只有Zn2+，Cd2+，Cu2+，Hg2+和As3+可引起ZFL細(xì)胞MTF-1 mRNA水平的表達(dá)。Yan等[14]用DNA步移法和瞬時表達(dá)分析對幾種重金屬對斑馬魚尾鰭細(xì)胞系(SJD.1)MT基因啟動子的調(diào)控作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)Cu2+、Cd2+、Zn2+對SJD.1細(xì)胞系MT基因轉(zhuǎn)錄有明顯感應(yīng)，而Hg2+、Ni2+、Pb2+和Co2+無明顯感應(yīng)。

重金屬誘導(dǎo)MT基因的表達(dá)還受其它因素的影響。Vergani等[41]研究細(xì)胞信號生長因子(GH)與重金屬之間的干擾作用時，發(fā)現(xiàn)所有重金屬誘導(dǎo)的MT-A(金屬硫蛋白異構(gòu)體)表達(dá)水平均高于MT-B(金屬硫蛋白異構(gòu)體)，但當(dāng)重金屬結(jié)合GH時有差異，對于MT-B Zn2+/GH和Cd2+/GH沒有干擾，Hg2+/GH具有負(fù)面干擾；對于MT-A，Zn2+/GH和Hg2+/GH沒有干擾，Cu2+/GH具有負(fù)面干擾和Cd2+/GH具有正面干擾。Magda等[42]研究發(fā)現(xiàn)魚類細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽可以螯合重金屬離子減少對細(xì)胞的毒性作用。

重金屬不僅影響與其結(jié)合的特異性基因表達(dá)，也對其他基因如熱應(yīng)激蛋白、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因、特殊酶基因等表達(dá)產(chǎn)生影響。Deane等[43]利用RT-PCR技術(shù)研究重金屬(Cd2+，Cu2+和Ni2+)誘導(dǎo)黑鯛成纖維細(xì)胞系熱休克同源蛋白HSC70和熱休克蛋白HSP70轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)HSP70對環(huán)境中重金屬污染物有強(qiáng)響應(yīng)。Minghetti等[13]應(yīng)用微列陣技術(shù)研究3種重金屬(Cu、Zn和Cd)對金頭鯛細(xì)胞系SAF-1銅轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶(ATP7A)基因的表達(dá)影響，發(fā)現(xiàn)只有Cu可以增加ATP7A mRNA基因的表達(dá)水平，且其表達(dá)受MT基因的轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。Torre等[15]利用實(shí)時熒光定量PCR測定CdCl2、HgCl2、As2O3和K2Cr2O7對魚類PLHC-1細(xì)胞系A(chǔ)BC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)量的影響時發(fā)現(xiàn)，不同的重金屬與特定的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因特異性相互作用，調(diào)控發(fā)生在轉(zhuǎn)錄和功能水平?？梢娭亟饘賹?yīng)激蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的表達(dá)影響比較大，并且ATP7A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的表達(dá)受金屬硫蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。重金屬可以調(diào)節(jié)魚類的許多細(xì)胞反應(yīng)途徑，并刺激多種基因的表達(dá)，因此，魚類細(xì)胞系在探究水體中重金屬對魚體組織的影響機(jī)理起著重要的作用。

2 展 望

相對于活體魚而言，魚類細(xì)胞系對水體中的重金屬反應(yīng)更為敏感、快速。將魚類細(xì)胞系作為水環(huán)境中重金屬檢測以及毒性應(yīng)急評估的生物指標(biāo)，對于建立科學(xué)的重金屬排放標(biāo)準(zhǔn)、防治環(huán)境污染、保障養(yǎng)殖生產(chǎn)以及人類健康有著非常重要的意義。傳統(tǒng)的研究是在試驗(yàn)條件下進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)并進(jìn)行環(huán)境污染物的毒理學(xué)研究，細(xì)胞生長環(huán)境與實(shí)際水環(huán)境還是有一定不同。Schnell等[44]設(shè)計(jì)了一種體外魚鰓培養(yǎng)系統(tǒng)[42-44]，則解決了上述問題。建立魚類細(xì)胞直接和待測試水環(huán)境接觸的快速檢測體系，是未來研究的重點(diǎn)。

環(huán)境中重金屬種類眾多，重金屬是怎樣調(diào)控凋亡基因表達(dá)的？轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白如何誘導(dǎo)細(xì)胞攝取較多的重金屬的？仍有許多重金屬對細(xì)胞的作用機(jī)理等需要進(jìn)一步深入研究。

[1] Wolf K,Quimby M C.Established eurythermicline of fish cells in vitro[J].Science,1962,135(23):1065-1066.

[2] 郭曉,李國良,陳求穩(wěn),等.南運(yùn)河重金屬污染狀況及生態(tài)風(fēng)險評價[J].生態(tài)毒理學(xué)報，2015,10(6):238-245.

[3] 徐永江，柳學(xué)周，于志剛，等.幾種重金屬離子對半滑舌鰨組織損傷的研究[J].海洋水產(chǎn)研究，2005，26(6)：11-16.

[4] 王少博，王維民，郭亞楠，等． 重金屬鎘和鉻對草魚苗的急性和慢性毒性效應(yīng)[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，43(4):60-64.

[5] 劉芳芳，李忠海，付湘晉，等.東洞庭湖網(wǎng)箱養(yǎng)殖鯉魚生長期內(nèi)重金屬的富集特征[J].環(huán)境科學(xué)研究，2013，26(2)：166-172.

[6] 楊曉云，溫勇，陳曉燕，等.重金屬在北江魚類和底棲動物體內(nèi)的富集及污染評價[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2010，33(6)：194-198.

[7] 涂宗財，龐娟娟，鄭婷婷，等.吳城鄱陽湖自然保護(hù)區(qū)魚體中重金屬的富集及安全性評價[J].水生生物學(xué)報，2017,41(4):878-883.

[8] 郭勇勇,華江環(huán),楊麗華，等.三峽庫區(qū)水樣中重金屬含量及其對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒性評價[J].水生生物學(xué)報,2015,39(5):885-892.

[9] 陳玉翠，陳錦云.重金屬Cu2+、Cd2+、Hg2+對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒性效應(yīng)[J].南方水產(chǎn)科學(xué),2016,12(3):35-42.

[10] 譚鳳霞，楊方星，王衛(wèi)民,等.稀有鮈鯽鰭細(xì)胞系的建立及其作為測定重金屬毒性模型的探討[J].水生生物學(xué)報,2009,33(4):767-771.

[11] Goswami M,Yadav K,Dubey A,et al.In vitro cytotoxicity assessment of two heavy metal salts in a fsh cell line (RF)[J].Drug Chem Toxicol,2014,37(1):48-54.

[12] Krumschnabel,G,Ebner H L,Hess M W,et al.Apoptosis and necroptosis are induced in rainbow trout cell lines exposed to cadmium[J].Aquat Toxicol,2010，99(1):73-85.

[13] Minghetti M,Leaver M J,Taggart J B ,et al.Copper induces Cu-ATPase ATP7A mRNA in a fish cell line,SAF1 [J].Comparative Biochemistry and Physiology,Part C，2011,154(2):93-99.

[14] Yan C H,Chan K M.Characterization of zebrafish metallothionein gene promoter in a zebrafish caudal fin cell-line,SJD.1[J].Marine Environmental Research,2002,54(3/5):335-339.

[15] Torre C D,Zaja R,Loncar J,et al.Interaction of ABC transport proteins with toxic metals at the level of gene and transport activity in the PLHC-1 fish cell line[J] .Chemico-Biological Interactions,2012,198(1/3):9-17.

[16] 陳懷青,陸承平.魚類細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用[J].國外水產(chǎn),1991(1):1-3.

[17] 姜澤東,周伯文,段晶晶.魚類細(xì)胞培養(yǎng)的研究與應(yīng)用[J].北京水產(chǎn),2008(3):42-47.

[18] Rachlin J W,Perlmutter A.Fish cells in culture for study of aquatic toxicants[J].Water Research,1968,2(6):409-414.

[19] Babich H,Puerner J A， Borenfreund E.In vitro cytotoxicity of metals to bluegill (BF-2) cells[J].Archives of Environmental Contamination and Toxicology,1986,15(1):31-37.

[20] Maracine M,Segner H.Cytotoxicity of metals in isolated fish cells:importance of the cellular glutathione status [J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology,1998,120(1):83-88.

[21] Tan F,Wang M ,Wang W M,et al.Comparative evaluation of the cytotoxicity sensitivity of six fish cell lines to four heavy metals in vitro[J].Toxicology in Vitro,2008,22(1):164-170.

[22] Dalton T P,He L,Wang B,et al.Identification of mouse SLC39A8 as the transporter responsible for cadmium-induced toxicity in the testis[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2005,102(9)：3401-3406.

[23] 吳迪，李霞，秦艷杰，等.重鉻酸鉀對不同倍性泥鰍鰭細(xì)胞系的毒性效應(yīng)[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2017 ,24(1):173-179.

[24] 盛樟，竺俊全.水生動物金屬硫蛋白分子毒理學(xué)研究進(jìn)展[J].生物學(xué)雜志,2014,31(2):77-81.

[25] 劉清，王子健，湯鴻霄.重金屬形態(tài)與生物毒性及生物有效性關(guān)系的研究進(jìn)展[J].環(huán)境科學(xué),1996(1):89-92.

[26] Wardle D A ,Nilsson M C ,Zackrisson O．Fire—derived charcoal causes loss offorest humus[J]．Science，2008，320(5876)：629.

[27] Fernández D ,García-Gómez C ,Babín M.In vitro evaluation of cellular responses induced by ZnO nanoparticles ,zinc,ions and bulk ZnO in fish cells[J].Sci Total Environ,2013,452/453(5):262-274.

[28] Munari M ,Sturve J ,Frenzilli G ,et al.Genotoxic effects of CdS quantum dots and Ag2S nanoparticles in fish cell lines (RTG-2)[J].Mutation Research/Genetic Toxicology & Environmental Mutagenesis,2014(775/776):89-93.

[29] Chithrani B D,Ghazani A A,Chan W C.Determining the size and shape dependence of gold nanoparticle uptake into mammalian cells[J].Nano Lett,2006,6(4):662-668.

[30] Farré M,Gajda-Schrantz K,Kantiani L,et al.Ecotoxicity and analysis of nanomaterials in the aquatic environment[J].Anal Bioanal Chem,2009,393(1):81-95.

[31] 蔡恒江,唐學(xué)璽,張培玉,等.UV-B輻射和久效磷對三角褐指藻DNA共同傷害效應(yīng)[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2004,34(6):993-996.

[32] Hambach R,Lison D,D'Haese P C,et al.Co-exposure to lead increases the renal response to low levels of cadmium in metallurgy workers [ J ].Toxicology Letters,2013,222(2):233-238.

[33] 項(xiàng)黎新，邵健忠，孟真.六種重金屬離子脅迫誘導(dǎo)魚類細(xì)胞凋亡的研究 [J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2001,28(6):866-868.

[34] Wang Y C,Chaung R H,Tung L C.Comparison of the cytotoxicity induced by different exposure to sodium arsenite in two fish cell lines[J].Aquat Toxicol,2004,69(1):67-79.

[30] Nicoletti G ,Migliorati M C ,Pagliacci,et al.A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry[J].Immunol.Methods,1991,139(2):271-279.

[35] Morcillo P,Esteban M,Cuesta A.Heavy metals produce toxicity,oxidative stress and apoptosis in the marine teleost fish SAF-1 cell line[J].Chemosphere,2016(144):225-233.

[36] 白麗雯，李狀狀，李霞，等.CuSO4對松江鱸腎細(xì)胞系的毒性效應(yīng)[J].海洋環(huán)境科學(xué)，2017，36(2)：161-166.

[37] 陳思，魯克慶，馬興銘.微核試驗(yàn)方法及應(yīng)用研究進(jìn)展[J] .中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2016,26(2):83-86.

[38] Chan K M,Ku L L,Chan P C,et al.Metallothionein gene expression in zebrafish embryo-larvae and ZFL cell-line exposed to heavy metal ions[J] .Marine Environmental Research,2006,62(4):83-87.

[39] 吳迪，周詩珈，李霞，等.重鉻酸鉀對泥鰍鰭細(xì)胞系的毒理學(xué)研究[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報，2016,31(6)：646-650.

[40] Cheuk W K,Chan P C,Chan KM.Cytotoxicities and induction of metallothionein (MT) and metal regulatory element (MRE)-binding transcription factor-1 (MTF-1) messenger RNA levels in the zebrafish (Daniorerio) ZFL and SJD cell lines after exposure to various metal ions[J].Aquatic Toxicology,2008,89(2):103-112.

[41] Vergani L,Lanza C,Scarabelli L,et al.Heavy metal and growth hormone pathways in metallothionein regulation in fish RTH-149 cell line[J].Comparative Biochemistry and Physiology,Part C ,2009,149(4):572-580.

[42] Magda M,HelmutS.Cytotoxicity of metals in isolated fish cells: importance of the cellular glutathione status[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology，1998，120(1)：83-88.

[43] Deane E E,Woo N Y .Impact of heavy metals and organochlorines on hsp70 and hsc70 gene expression in black sea bream fibroblasts [J].Aquatic Toxicology,2006,79(1):9-15.

[44] Schnell S,Bawa-Allah K,Otitoloju A,et al.Environmental monitoring of urban streams using a primary fish gill cell culture system (FIGCS) [J].Ecotoxicology and Environmental Safety,2015(120):279-285.