古小莉，李惠青，呂曉瑜，李永賢，楊宏亮，黃 珂

(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300)

副溶血性弧菌(Vibrioparahemolyticus)為革蘭氏陰性嗜鹽菌，廣泛分布于近海海域和海產(chǎn)品中，是引起食物中毒的主要病原菌之一，食用被副溶血性弧菌污染的食物可引起嘔吐、腹瀉等癥狀胃腸炎、敗血癥甚至死亡[1-2]。根據(jù)國(guó)家和廣東省食源性致病菌監(jiān)測(cè)網(wǎng)統(tǒng)計(jì)[3-6]，自1998年以來(lái)，我國(guó)微生物性食物中毒的病原分布發(fā)生了顯著的變化，由副溶血性弧菌引起的食物中毒，已成為我國(guó)沿海地區(qū)微生物性食物中毒首位。

作為生食水產(chǎn)品消費(fèi)重要地區(qū)，廣州地區(qū)生食水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染狀況不容樂(lè)觀。對(duì)廣東省生食水產(chǎn)品副溶血性弧菌污染調(diào)查結(jié)果顯示[7-9]，生食水產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染情況普遍，副溶血性弧菌已成為生食水產(chǎn)品的主要風(fēng)險(xiǎn)因子。三文魚(yú)是一種味道鮮美深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài)的生食水產(chǎn)品，市場(chǎng)流通的三文魚(yú)大多為冷藏進(jìn)口，其在生長(zhǎng)水域、長(zhǎng)途運(yùn)輸、存儲(chǔ)、銷售和食用加工等環(huán)節(jié)容易受到副溶血性弧菌的污染。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及臨床上抗生素的廣泛及不規(guī)范使用，副溶血性弧菌耐藥性日益嚴(yán)重[10-13]，耐藥菌可通過(guò)食物鏈直接轉(zhuǎn)移至人體內(nèi)[14]，給臨床治療帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)，已嚴(yán)重威脅人類健康。為了解廣州市市售生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的污染狀況及分離株的耐藥情況，本研究對(duì)廣州市的批發(fā)市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及超市售賣的生食三文魚(yú)進(jìn)行副溶血性弧菌污染調(diào)查及耐藥性分析，以期為生食三文魚(yú)副溶血性弧菌防控及對(duì)指導(dǎo)和規(guī)范臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

副溶血性弧菌ATCC17802，大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)ATCC25922均購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物有限公司。

1.1.2 儀器與試劑

Vitek 2 Compact 30全自動(dòng)微生物鑒定儀(法國(guó)生物梅里埃公司)；3%NaCl堿性蛋白胨水(廣東環(huán)凱生物有限公司)；弧菌顯色培養(yǎng)基(法國(guó)科瑪嘉公司)；細(xì)菌鑒定GN卡及藥敏試驗(yàn)AST-GN14卡(法國(guó)生物梅里埃公司)。

1.2 方法

1.2.1 采樣

2016年1—10月期間從廣州市的批發(fā)市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市按隨機(jī)采樣原則采集生食三文魚(yú)65份，其中批發(fā)市場(chǎng)43份，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市各11份，每份樣品約200 g均采用無(wú)菌方法采集，無(wú)菌采樣后置4 ℃低溫保存，3～8 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2.2 生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的分離和鑒定

副溶血性弧菌的分離根據(jù)GB 4789.7—2013《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)：副溶血性弧菌檢驗(yàn)》[15]方法，以無(wú)菌操作均質(zhì)樣品，用3%NaCl堿性蛋白胨水增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng)，用弧菌顯色培養(yǎng)基分離，挑取可疑菌落用Vitek 2 Compact 30全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行鑒定。

1.2.3 藥敏試驗(yàn)

采用Vitek 2 Compact 30全自動(dòng)微生物鑒定儀的藥敏分析模塊，選取AST-GN14藥敏卡對(duì)篩選出的副溶血性弧菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。以大腸埃希氏菌ATCC25922作為藥敏試驗(yàn)質(zhì)控菌株。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 22.0軟件，x2檢驗(yàn)比較樣品中副溶血性弧菌陽(yáng)性率的差異，以P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異非常顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌污染狀況

2.1.1 不同月份生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌檢出情況

2016年于廣州市共采集生食三文魚(yú)65份，副溶血性弧菌陽(yáng)性23份，副溶血性弧菌總體檢出率為35.38%。其中7月副溶血性弧菌的檢出率最高，為50%，1月檢出率最低，為25%(表1)。不同月份生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的檢出率無(wú)顯著性差異(x2=2.57，P=0.465)。

表1 不同月份生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的檢出情況

2.1.2 不同采樣地點(diǎn)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌檢出情況

流通環(huán)節(jié)中不同的采樣地點(diǎn)副溶血性弧菌檢出情況見(jiàn)表2，批發(fā)市場(chǎng)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌檢出率最高為48.84%，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市的副溶血性弧菌檢出率均為9.09%。不同采樣地點(diǎn)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，差異非常顯著(x2=10.06，P=0.007)。

表2 不同采樣地點(diǎn)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌檢出情況

2.2 藥敏試驗(yàn)

從生食三文魚(yú)中共分離出63株副溶血性弧菌，分離株對(duì)臨床常見(jiàn)的17中抗生素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，全部分離株對(duì)阿莫西林、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因等12種抗生素敏感。哌拉西林、頭孢唑啉和四環(huán)素有中介敏感菌株，但無(wú)耐藥菌株。產(chǎn)生耐藥的菌株有對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率為6.35%，對(duì)氨芐西林的耐藥率高達(dá)98.41%。同時(shí)耐受兩種藥物(氨芐西林/復(fù)方新諾明)的有4株。

3 討 論

2016年對(duì)廣州市售生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)表明，廣州市售生食三文魚(yú)受副溶血性弧菌污染的情況嚴(yán)重，副溶血性弧菌檢出率高達(dá)35.38%，高于1999—2000年(18.9%)[16]及2013年(21.43%)[9]?？梢?jiàn)，廣州市生食三文魚(yú)副溶血性弧菌污染呈逐年上升的趨勢(shì)。不同地點(diǎn)采集的生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌檢出率差異非常顯著(P<0.01)，其中陽(yáng)性樣品大多來(lái)自批發(fā)市場(chǎng)，批發(fā)市場(chǎng)檢出率高達(dá)50%，表明批發(fā)市場(chǎng)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌污染已呈普遍狀態(tài)。批發(fā)市場(chǎng)副溶血性弧菌檢出率較高或許與其售賣包裝方式及保藏方式容易導(dǎo)致污染有關(guān)。批發(fā)市場(chǎng)生食三文魚(yú)普遍無(wú)密實(shí)包裝鋪于冰面或無(wú)低溫措施直接擺放售賣，而超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)為盒裝置于冷柜銷售。

不同月份生食三文魚(yú)副溶血性弧菌檢出結(jié)果顯示，7月份檢出率最高，達(dá)50%，10月份次之(33.3%)。7月和10月屬?gòu)V州氣溫最高的季節(jié)，溫度高的季節(jié)副溶血性弧菌檢出率高，這與李海麟等[17-19]的研究結(jié)果相符，研究指出該菌在環(huán)境中的分布呈明顯的季節(jié)性，與溫度直接相關(guān)，溫度越高就越利于副溶血性弧菌生長(zhǎng)。因此，消費(fèi)者在選購(gòu)新鮮生食三文魚(yú)后，若不能立即食用，可將其低溫貯存，以延緩副溶血性弧菌生長(zhǎng)。

表3 63株副溶血性弧菌對(duì)17種抗生素的敏感性

注：R.耐藥；I.中介敏感；S.敏感.

藥敏結(jié)果表明，63株副溶血性弧菌分離株對(duì)抗生素的敏感性大致相同，無(wú)多重耐藥情況，分離株存在3種耐藥譜：耐氨芐西林、耐復(fù)方新諾明和耐氨芐西林—復(fù)方新諾明。分離株對(duì)阿莫西林、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因等12種抗生素100%敏感，因此上述抗生素可作為廣州地區(qū)治療因食用生食三文魚(yú)感染副溶血性弧菌的首選抗生素。全部分離株對(duì)氨芐西林不敏感，耐藥率高達(dá)98.41%。氨芐西林普遍呈耐藥，與相關(guān)研究報(bào)道氨芐西林耐藥情況相似[10-12]。不能忽略的是，作為美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心推薦兒童治療弧菌感染首選藥物的復(fù)方新諾明[20]，在本研究中出現(xiàn)了耐藥株，雖然耐藥情況不嚴(yán)重，但已有研究報(bào)道副溶血性弧菌對(duì)復(fù)方新諾明的敏感率為 100%[21-22]，表明副溶血性弧菌的耐藥性已逐漸出現(xiàn)變化，為臨床治療增加了難度。

綜上所述，廣州市售生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌污染較嚴(yán)重，分離的副溶血性弧菌存在一定程度的耐藥情況，食用被副溶血性弧菌污染的生食三文魚(yú)可能會(huì)引發(fā)群體腹瀉等食品安全事件，對(duì)公眾健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)生食三文魚(yú)中副溶血性弧菌的監(jiān)測(cè)和抗生素的使用管理，有效預(yù)防和控制副溶血性弧菌的污染，才能提高生食三文魚(yú)的食品安全水平。

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