馬小明+孫密+林悅+劉銀金+羅芳+郭隆華+邱彬+林振宇+陳國南

摘要可視化檢測方法是一種以光學(xué)響應(yīng)信號為基礎(chǔ)，通過裸眼比較反應(yīng)液中顏色的深淺或種類的變化，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物的肉眼識別檢測， 具有檢測結(jié)果可視化、操作簡單快捷、檢測成本低和響應(yīng)速度快等優(yōu)點(diǎn)。在各種納米材料中，金納米材料由于具有獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)，被廣泛用于可視化傳感器的構(gòu)建。當(dāng)納米粒子之間的距離或形貌改變時，其局域表面等離子共振吸收峰會產(chǎn)生相應(yīng)的變化，引起溶液顏色的改變。本文綜述了近幾年基于金納米材料的可視化傳感器在分析檢測中的研究進(jìn)展，分析了該技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中面臨的主要問題，并對未來的發(fā)展前景進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞金納米顆粒； 可視化傳感器； 評述

1引 言

金納米顆粒具有良好的穩(wěn)定性，能夠被長期保存，同時，通過改變合成方法能夠制備出各種不同形貌、不同尺寸的納米顆粒[1～]。金納米顆粒具有較高的摩爾吸光系數(shù)（5

SymboltB@ 1010 L/（mol·cm）），比傳統(tǒng)的顯色染料高3～個數(shù)量級[5]。這使得基于金納米顆粒的比色分析方法的檢測靈敏度可以達(dá)到納摩爾級別，檢出限遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)的比色分析方法[6]。同時，金納米顆粒具有獨(dú)特的局域表面等離子體共振（Localized surface plasmon resonance，LSPR）特性，當(dāng)材料的形貌、表面性質(zhì)、反應(yīng)環(huán)境或顆粒之間的距離發(fā)生改變時，其紫外可見吸收峰會發(fā)生變化，同時溶液的顏色也會相應(yīng)地改變[7，8]。因此可以采用金納米顆粒的顏色變化作為響應(yīng)信號，依靠肉眼對信號進(jìn)行讀取識別，達(dá)到可視化檢測的目的。自1997年Mirkin首次提出以金納米顆粒為可視化檢測的顯色底物，基于金納米顆?？梢暬治鰴z測方法開始有了突破性的進(jìn)展，隨后被廣泛用于核酸、蛋白質(zhì)、離子、有機(jī)物和細(xì)胞等物質(zhì)的檢測中[9～12]。此外，金納米顆粒具有優(yōu)異的催化活性，能夠催化顯色底物產(chǎn)生顏色變化，從而實(shí)現(xiàn)待測物的可視化分析檢測[13]。因此，基于金納米材料的可視化生物傳感器不僅能滿足高靈敏的檢測需求，同時具有操作簡單、信號響應(yīng)速度快、檢測結(jié)果直觀、不需要額外的輔助設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，尤其適合于現(xiàn)場快速檢測和實(shí)驗(yàn)條件較為落后等區(qū)域。

2基于金納米材料距離變化的可視化分析法

金納米顆粒之間距離的變化會引起LSPR的改變，從而產(chǎn)生溶液的顏色差異，因此可以根據(jù)金納米顆粒的空間距離變化構(gòu)建可視化傳感器[1]。基于金納米顆?！熬嚯x變化”的可視化分析方法主要有交聯(lián)聚集和非交聯(lián)聚集。交聯(lián)聚集主要是在金納米顆粒表面上修飾不同的識別分子（如DNA、抗體、小分子等），通過目標(biāo)物與識別分子之間特異性的識別作用（如DNA雜交、抗原抗體特異性識別、金屬配體絡(luò)合作用等），拉近金納米顆粒之間的距離，溶液的顏色由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色[15～18]。非交聯(lián)聚集主要是通過改變金納米顆粒的表面性質(zhì)而引起的，如改變p值、離子強(qiáng)度、溶劑成分等[19，20]。

21交聯(lián)聚集檢測

通過AuS共價鍵將DNA修飾到金納米顆粒的表面，利用堿基互補(bǔ)配對作用或核酸適配體對目標(biāo)分子的特異性識別，實(shí)現(xiàn)了DNA、miRNA或小分子的可視化檢測。如圖1A所示，通過不對稱修飾的方法在金納米顆粒表面上分別修飾上兩條不同序列的DNA，當(dāng)存在目標(biāo)DNA時，DNA之間通過堿基互補(bǔ)配對形成Y型結(jié)構(gòu)，拉近了金納米顆粒之間的距離，溶液的顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色。值得注意的是，與傳統(tǒng)通過DNA誘導(dǎo)金納米顆粒聚集產(chǎn)生大量的團(tuán)聚物不同，該方法形成了金納米顆粒二聚體結(jié)構(gòu)，減少了非響應(yīng)性雜交，間接提升了金納米顆粒的利用率，實(shí)現(xiàn)了對于pmol/L級別DNA的檢測[21]。將探針序列替換成對于赭曲霉毒素A（OA）具有特異性識別的核酸適配體序列，便能實(shí)現(xiàn)小分子目標(biāo)物的可視化檢測[22]。此外，將金納米顆粒不對稱修飾技術(shù)與雙鏈特異性核酸酶（DSN）循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合，也能實(shí)現(xiàn)miRNA的超靈敏可視化分析檢測，檢出限達(dá)05 fmol/L（圖1B）[23]

在金納米顆粒表面上功能化不同的反應(yīng)基團(tuán)，通過目標(biāo)物與反應(yīng)基團(tuán)之間的特異性反應(yīng)，可實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物的可視化檢測[2，25]。hou等[26]分別制備了修飾有炔基和疊氮基團(tuán)的金納米顆粒，通過抗壞血酸鈉將Cu2+還原為Cu+，觸發(fā)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，拉近金納米顆粒之間的距離，實(shí)現(xiàn)了對Cu2+的可視化分析檢測，檢出限為50

SymbolmA@ mol/L。在此基礎(chǔ)上，Qu等[27]將氧化銅納米顆粒代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶標(biāo)記物修飾到二抗上，經(jīng)過免疫反應(yīng)后，二抗上的氧化銅納米顆粒酸溶解之后生成Cu2+，隨后用還原劑將Cu2+還原為Cu+觸發(fā)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了對抗原的可視化分析檢測（圖2A）。此外，采用堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記的檢測抗體也能實(shí)現(xiàn)抗原的可視化檢測，酶催化水解底物抗壞血酸磷酸酯鈉（AAp）生成抗壞血酸，將Cu2+定量地還原為Cu+，隨后經(jīng)過點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，金納米顆粒發(fā)生團(tuán)聚，溶液顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色（圖2B）[28]。

圖2（A）基于CuO標(biāo)記的抗體和點(diǎn)擊化學(xué)引發(fā)AuNPs聚集的可視化免疫測定[27]； （B）基于ALP酶促反應(yīng)和點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)誘導(dǎo)AuNPs聚集的可視化免疫測定[28]

ig2（A） AuNPsbased immunoassay with combination of CuO labeled antibody and click chemistry[27] （B） Visual immunoassay of AuNPs based on clicking chemical reaction triggered by alkaline phosphatase （ALP） enzymatic reaction[28]

未經(jīng)過功能化修飾的金納米顆粒也能通過誘導(dǎo)聚集，縮短納米顆粒之間的距離，達(dá)到可視化檢測的目的。Liu等[29]報道了一種基于乙酰膽堿酯酶催化水解產(chǎn)物誘導(dǎo)金納米顆粒聚集的可視化檢測方法，實(shí)現(xiàn)了對腸病毒71型（EV71）的高靈敏檢測。 該方法以乙酰膽堿酯酶作為酶標(biāo)記物，催化水解乙酰膽堿生成硫代乙酰膽堿； 硫代膽堿通過AuS共價鍵鍵合到金納米顆粒表面。在靜電作用的誘導(dǎo)下， 金納米顆粒聚集，溶液的顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色。此外，Liu等[30]發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶的催化活性會被有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥抑制，因此基于上述原理構(gòu)建的可視化傳感器也能用于農(nóng)藥殘留物的檢測（圖3）。endprint

22非交聯(lián)聚集檢測

由于DNA具有帶負(fù)電荷的磷酸骨架，將單鏈DNA修飾到金納米顆粒表面可以提高粒子之間的靜電排斥力，增強(qiáng)其穩(wěn)定性并能在高鹽離子濃度下穩(wěn)定存在。然而，當(dāng)DNA的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時，DNA會遠(yuǎn)離金納米顆粒表面。由于失去DNA的保護(hù)，金納米顆粒在高鹽離子濃度中的穩(wěn)定性會急速下降，形成大量團(tuán)聚體[31]。hao等[32]發(fā)現(xiàn)修飾有DNA的金納米顆粒能夠在高鹽離子濃度下保持穩(wěn)定，溶液的顏色為紅色，但是當(dāng)加入脫氧核糖核酸酶I將DNA水解后，在相同的離子強(qiáng)度下，由于缺乏DNA保護(hù)，金納米顆粒形成聚集體，通過肉眼就能觀察到明顯的顏色變化。Liu等[33]發(fā)現(xiàn)發(fā)夾DNA也能有效地吸附在金納米顆粒表面，防止金納米顆粒在高鹽濃度下發(fā)生聚集。當(dāng)存在有目標(biāo)DNA時，原本吸附在金納米表面的發(fā)夾DNA會與目標(biāo)物結(jié)合，引發(fā)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，最終形成較長序列的雙鏈DNA，

遠(yuǎn)離金納米顆粒表面，因此在高鹽濃度下金納米顆粒發(fā)生聚集，溶液的顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色（圖A）。基于非交聯(lián)聚集的可視化檢測方法也能用于小分子的檢測，Yang等[3]報道了OA適配體包裹的金納米顆粒能夠在高鹽離子濃度下穩(wěn)定存在，當(dāng)存在有目標(biāo)物時， OA會與適配體結(jié)合形成G四鏈體，遠(yuǎn)離金納米顆粒表面，因此在高鹽濃度下溶液的顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色，依據(jù)溶液的顏色變化實(shí)現(xiàn)對20 nmol/L OA分子的可視化檢測（圖B）。此外，可以通過溶液酸堿度變化構(gòu)建可視化傳感器，富含C堿基的DNA序列在不同酸堿度中呈現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu)，在不同的p值下， 當(dāng)DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，金納米顆粒由于失去DNA的保護(hù)而聚沉，溶液的顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色[35]。

圖（A）基于雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的免酶催化金納米顆?？梢暬瘷z測DNA[33]； （B）基于適配體金納米顆粒可視化傳感用于OA的檢測[3]

ig（A） Enzymefree colorimetric detection of DNA by using Au nanoparticles and hybridization chain reaction amplification[33] （B） Aptamerbased colorimetric biosensing of Ochratoxin A using unmodified gold nanoparticles indicator[3]

3基于金納米材料形貌變化的可視化分析法

31基于金納米顆粒生長的可視化分析檢測

通過調(diào)控金納米顆粒的生長過程，金納米材料的形貌變化也會導(dǎo)致LSPR的改變， 根據(jù)溶液的顏色變化也可以構(gòu)建可視化傳感器[36]。如圖5A所示，Rica等[37]通過控制金納米顆粒生長過程中形貌變化實(shí)現(xiàn)血清中前列腺特異性抗原（PSA）和艾滋病病毒（IV1）的可視化檢測。該方法采用修飾在酶標(biāo)板上的捕獲抗體對目標(biāo)物進(jìn)行識別，隨后與修飾過氧化氫酶的檢測抗體形成抗原抗體三明治夾心結(jié)構(gòu)。當(dāng)不存在目標(biāo)物時，大量的雙氧水（2O2）與氯金酸（AuCl）發(fā)生反應(yīng)，加快了金納米顆粒的生長速度，最終形成球形的、非聚集的紅色金納米顆粒。反之，過氧化氫酶會催化分解2O2成水和氧氣，減緩晶體的生長速率，導(dǎo)致金納米顆粒不對稱生長，溶液的顏色為藍(lán)色。通過肉眼識別溶液的顏色變化，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)物的超靈敏可視化檢測，檢出限可達(dá)1 Symbolm@@ 18 g/mL[37，38]。Peng等[39]基于類似的機(jī)理，采用免疫競爭法實(shí)現(xiàn)了對甲基睪酮的可視化檢測，檢測靈敏度與傳統(tǒng)方法相比提高了50倍。

圖5（A）基于等離子體ELISA用于超靈敏可視化檢測癌癥標(biāo)志物[37]； （B）基于乙醛脫氫酶催化金納米顆粒生長的可視化檢測[1]； （C）基于葡萄糖氧化酶催化金納米顆粒生長用于肺癌癌癥標(biāo)志物的檢測[2]； （D）基于目標(biāo)物介導(dǎo)的適配體功能化的金納米顆粒生長用于復(fù)雜樣品中小分子目標(biāo)物的可視化檢測[3]

ig5（A） Plasmonic ELISA for ultrasensitive detection of disease biomarkers with naked eyes[37]； （B） Alcohol dehydrogenasecatalyzed gold nanoparticle seedmediated growth allows reliable detection of disease biomarkers with the naked eye[1]； （C） Glucose oxidasecatalyzed growth of gold nanoparticles enables quantitative detection of attomolar cancer biomarkers[2]； （D） Colorimetric detection of small molecules in complex matrixes via targetmediated growth of aptamerfunctionalized gold nanoparticles[3]

通過種子介導(dǎo)生長法，控制金納米顆粒生長成不同形貌、尺寸的納米顆粒，也能實(shí)現(xiàn)可視化檢測[0]。Peng等[1]開發(fā)了一種基于乙醇脫氫酶催化分解反應(yīng)來控制金納米顆粒生長的可視化分析方法（圖5B）。該方法以乙醇脫氫酶為酶標(biāo)記物，以乙醇、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）、晶種（5 nm）和AuCl為酶促反應(yīng)底物。當(dāng)存在目標(biāo)物時，抗體上標(biāo)記的乙醇脫氫酶會將NAD+和乙醇催化分解生成還原型輔酶I（NAD）和乙醛。反應(yīng)生成的NAD將AuCl還原生成金單質(zhì)，并在金核（5 nm）上不斷地沉積生長，溶液的顏色發(fā)生明顯的變化[1]。Liu等[2]以葡萄糖氧化酶為催化劑，催化分解葡萄糖生成2O2和葡萄糖酸，2O2將AuCl還原生成金單質(zhì)并不斷地在金核（5 nm）上面生長，金納米顆粒的尺寸不斷變大，溶液的顏色由無色變?yōu)榧t色，實(shí)現(xiàn)了PSA的高靈敏可視化檢測，檢出限達(dá)93 amol/L（圖5C）。Soh等[3]在金納米顆粒表面修飾上OA的核酸適配體序列，如圖5D所示，當(dāng)加入OA時，OA與適配體發(fā)生特異性結(jié)合，并遠(yuǎn)離金納米顆粒隨后加入羥胺（N2O）將AuCl還原成金單質(zhì)并在原始的金種上均勻地生長，溶液顏色為紅色； 反之，DNA包裹的金納米顆粒產(chǎn)生不均勻的生長，溶液的顏色為藍(lán)色。通過肉眼便能實(shí)現(xiàn)OA的可視化分析檢測，檢出限為1 nmol/L。endprint

在金納米顆粒表面沉積上不同的貴金屬材料，形成核殼結(jié)構(gòu)，由于材料表面折射率或尺寸的改變所引起金納米材料的LSPR變化，也能用于可視化傳感器的構(gòu)建。hou等[]采用ALP催化分解AAp生成具有還原性的抗壞血酸，將銀離子還原生成銀單質(zhì)，并不斷在金核（6 nm）上進(jìn)行原位生長，形成銀包金的核殼結(jié)構(gòu)。由于銀納米材料具有較高的摩爾吸收系數(shù)，可以實(shí)現(xiàn)禽流感病毒的高靈敏可視化檢測，檢出限為175 pg/mL（圖6A）。采用不同形貌的金納米材料也能用于可視化傳感器的構(gòu)建，其中金納米棒由于具有獨(dú)特的LSPR光學(xué)特性，不同長徑比的金納米棒溶液呈現(xiàn)出不同的顏色，因此基于此原理構(gòu)建的可視化傳感器能夠?qū)崿F(xiàn)多種顏色變化，提高肉眼的識別能力[5， 6]。基于酶催化誘導(dǎo)銀離子原位生長的思路，Gao等[7]報道了一種多色彩可視化檢測方法，如圖6B所示，銀離子在金納米棒表面不對稱生長，改變了金納米棒的長徑比，其LSPR峰發(fā)生移動，溶液的顏色呈現(xiàn)豐富多彩的變化。將金納米棒替換成金納米雙錐，調(diào)控反應(yīng)條件在其表面上原位生長銀單質(zhì)，也能實(shí)現(xiàn)多色彩可視化檢測，并且該方法的檢測靈敏度相比于以金納米棒的顯色方法提高了3個數(shù)量級，通過裸眼識別不同的溶液顏色，便可以對待測物進(jìn)行半定量分析檢測[8]。此外，其它形貌的金納米材料（如金納米籠）也能通過原位生長形成金核銀殼的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生豐富多彩的顏色變化，實(shí)現(xiàn)可視化傳感器的構(gòu)建[9]。

32基于金納米顆?？涛g的可視化分析檢測

雖然基于納米顆粒原位生長的可視化檢測方法具有較好的靈敏度，但是由于反應(yīng)過程中反應(yīng)體積、反應(yīng)容器和氯金酸的質(zhì)量等外界條件的差別，會導(dǎo)致檢測結(jié)果呈現(xiàn)假陽性或假陰性信號。此外，不同的操作者進(jìn)行同一組實(shí)驗(yàn)時，檢測結(jié)果也有可能存在顯著性差異，例如加樣的速度或順序的區(qū)別也會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果[50]。因此，可以預(yù)先制備納米材料，進(jìn)行選擇性氧化刻蝕，提高檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。

Saa等[51]發(fā)現(xiàn)高濃度的辣根過氧化物酶（RP）在2O2的存在下， 有效地氧化刻蝕金納米棒，使得金納米棒的長徑比變小。將該反應(yīng)與葡萄糖氧化酶催化體系相結(jié)合，通過對比反應(yīng)前后溶液顏色種類的變化，實(shí)現(xiàn)血糖的可視化檢測。hang等[52]研究發(fā)現(xiàn)在弱酸性條件下，鉬酸鹽能夠催化2O2和I

Symbolm@@ 生成I2，I2對金納米棒進(jìn)行氧化刻蝕，使得金納米棒的長徑比發(fā)生改變，溶液呈現(xiàn)不同種類的顏色變化（圖7A）。通過芬頓反應(yīng)氧化刻蝕金納米棒也能用于可視化傳感器的構(gòu)建，如圖7B所示，隨著2O2濃度的增加，金納米棒的LSPR峰逐漸藍(lán)移，溶液的顏色呈現(xiàn)豐富多彩的變化，采用過氧化氫酶作為酶標(biāo)記物，控制反應(yīng)過程中2O2的含量，實(shí)現(xiàn)了甲胎蛋白、黃曲霉毒素B1和miRNA的多色彩可視化檢測[53]。在傳統(tǒng)的顯色體系中，3，3'，5，5'四甲基聯(lián)苯胺（MB）由于具有靈敏度高、顯色結(jié)果穩(wěn)定、無致癌性等優(yōu)點(diǎn)被廣泛用作于顯色底物。研究發(fā)現(xiàn)，顯色反應(yīng)產(chǎn)物MB2+會與金納米棒發(fā)生氧化還原反應(yīng)，金納米棒的長徑比逐漸減小，溶液呈現(xiàn)豐富多彩的顏色（圖7C）。因此只需在傳統(tǒng)商業(yè)化酶聯(lián)免疫試劑盒的基礎(chǔ)上，加入金納米棒參與反應(yīng)， 便能一步實(shí)現(xiàn)多色彩可視化檢測。 該方法對于癌胚抗原（CEA）和PSA的可視化檢出限分別為25 ng/mL和75 pg/mL，實(shí)際樣品檢測結(jié)果與傳統(tǒng)方法相近，具有簡便、快捷、易于商品化等優(yōu)點(diǎn)[5]。

基于金納米材料模擬酶性質(zhì)的可視化分析法

研究表明，許多金納米材料具有模擬酶活性（如葡萄糖氧化酶活性、辣根過氧化物酶活性、過氧化氫酶活性等），被廣泛應(yīng)用于可視化傳感器的構(gòu)建[55～62]。Comotti等[63]最早發(fā)現(xiàn)當(dāng)存在有氧氣時，金納米顆?？梢源呋咸烟欠纸馍善咸烟撬岷?O2，相比于其他貴金屬（如，銅、銀、鈀和鉑等）納米材料，金納米顆粒具有較強(qiáng)的葡萄糖氧化酶催化活性。heng等[6]構(gòu)建了一種金納米顆粒自催化生長法，金納米顆粒通過催化葡萄糖分解并不斷在金納米顆粒表面原位生長，改變了納米顆粒的界面性質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了DNA的可視化檢測（圖8A）。

此外，金納米顆粒也具有RP的活性[65～68]，金納米顆粒在催化反應(yīng)過程中，將2O2吸附到金納米材料的表面，此時2O2中的OO化學(xué)鍵會被打開，形成羥基自由基，繼而氧化MB發(fā)生顏色變化[65]。例如，ao等[66]利用帶正電荷的金納米顆粒所具有辣根過氧化物酶催化活性，催化MB氧化生成MB+，溶液的顏色發(fā)生改變，研究發(fā)現(xiàn)多巴胺會抑制金納米顆粒模擬的酶催化活性，因此可以構(gòu)建可視化傳感器用于多巴胺的檢測。Wang等[67]發(fā)現(xiàn)半胱氨酸也會抑制金納米顆粒的RP催化活性，通過半胱氨酸與水中的g2+進(jìn)行特異性結(jié)合，建構(gòu)了可視化傳感器用于g2+和半胱氨酸檢測。

5金納米材料在其它可視化傳感中的應(yīng)用

便攜性檢測設(shè)備（POC）具有使用方便快捷，不需要熟練的操作技術(shù)人員等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛投入到市場應(yīng)用（如血糖儀、免疫試紙條等），并且在現(xiàn)場分析檢測和居家理療等領(lǐng)域發(fā)揮巨大作用[69～71]。膠體金試紙由于無需專業(yè)儀器、檢測耗時短、具有較好的特異性和靈敏度、便于運(yùn)輸和儲存和檢測結(jié)果可視化等優(yōu)點(diǎn)，得到了廣泛的應(yīng)用。然而，與傳統(tǒng)的分子檢測技術(shù)相比，它的檢測靈敏度較差，不能滿足高靈敏檢測的需求。為了提高檢測的靈敏度，Mao等[72]研制了一種基于RP酶催化信號放大的分析方法用于DNA的檢測，通過酶催化產(chǎn)生紅色的不溶物并不斷沉積到金納米顆粒表面，加深了顏色的強(qiáng)度，提高了肉眼可視化分辨能力，因此增強(qiáng)了檢測的靈敏度，對于DNA的檢測范圍可以達(dá)到05 nmol/L ～ 50 pmol/L。通過優(yōu)化RP的結(jié)合量以及檢測步驟，構(gòu)建的RPAuNPs雙重標(biāo)記方法能檢測到001 pmol/L DNA[73]。通過還原劑將金/銀離子還原形成原子，并在膠體顆粒周圍形成直徑為5～10 μm的納米簇，也可用于可視化傳感器的構(gòu)建，該方法使得膠體金的直徑提高了100倍，極大地提高了檢測靈敏度。Li等[7]以N2OCl為還原劑，通過氧化還原反應(yīng)將AuCl還原為金納米簇并組裝到金納米顆粒的表面上，金納米顆粒的尺寸變大，檢測靈敏度相比于傳統(tǒng)方法提高了10～100倍。endprint

此外，通過誘導(dǎo)功能化的金納米顆粒團(tuán)聚，也能作為一種有效的信號擴(kuò)增技術(shù)應(yīng)用于膠體金免疫層析法中。例如，e等[73]介紹了一種基于DNA雜交介導(dǎo)的金納米顆粒團(tuán)聚的信號擴(kuò)增方法。該方法首先采用同時標(biāo)記有檢測抗體和cDNA的金納米顆粒，通過抗體對目標(biāo)抗原的特異性識別對使得金納米顆粒在檢測線上富集。隨后加入修飾有與cDNA互補(bǔ)的金納米顆粒，與原先的金納米顆粒發(fā)生DNA雜交，形成大量的金納米顆粒團(tuán)聚體，極大地提高了檢測的靈敏度。Chapman等[75]將生物素修飾的高聚物包裹于脂質(zhì)體中，當(dāng)存在有磷脂酶時，脂質(zhì)體會被催化分解，生物素修飾的高聚物會被釋放出來并與結(jié)合板中的金納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，使得金納米顆粒發(fā)生聚集。金納米顆粒聚集體在檢測線處被特異性的捕獲，極大提高了檢測的靈敏度。該反應(yīng)在10 min內(nèi)便能實(shí)現(xiàn)對磷脂酶的可視化檢測，檢出限達(dá)1 nmol/L（圖9）。

6結(jié)論與展望

金納米材料因其獨(dú)特的光學(xué)特性，在可視化生物傳感器的構(gòu)建中展現(xiàn)出良好的應(yīng)用潛力?；诮鸺{米材料的不同顯色機(jī)制在可視化檢測中得到廣泛的應(yīng)用， 從常見的紅色到藍(lán)色的雙色變化發(fā)展為多種色彩顏色變化，擴(kuò)大了可視化檢測的應(yīng)用范圍。然而，將這些方法應(yīng)用于商業(yè)化檢測仍需要大量的努力。首先，大批量合成具有較高的均一性和穩(wěn)定性的金納米材料較為困難，目前所采用的合成方法較為繁瑣，對實(shí)驗(yàn)人員的合成水平有一定要求，同時存在較大的批間差異，無法實(shí)現(xiàn)大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。其次，有些檢測方法的檢測靈敏度不能滿足高靈敏檢測的需求，仍需要借助于傳統(tǒng)方法的輔助。此外，大多數(shù)的顯色體系均在溶液中進(jìn)行反應(yīng)，在檢測過程中容易受到外界環(huán)境變化的影響，不適于家居便攜式測定。對于金納米顆粒穩(wěn)定性、均一性問題，可以通過提高合成技術(shù)手段、改進(jìn)合成設(shè)備，實(shí)現(xiàn)大批量的金納米顆粒材料的制備，此外，通過在對納米材料進(jìn)行功能化修飾也能提高其穩(wěn)定性。在檢測靈敏度方面，可以通過引入信號放大系統(tǒng)（如酶催化信號放大、循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)等），提高檢測的靈敏度。最后，可以借鑒膠體金試紙條的思路，將反應(yīng)體系由液相轉(zhuǎn)移至固相載體上，提高使用的便攜性。隨著科技的進(jìn)步，基于金納米材料的可視化傳感器在未來一定會有更為廣闊的應(yīng)用前景。

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AbstractVisualization detection methods are used for determination of the concentration of unknown target by comparing the color change in the intensity or type of reaction solution by naked eye Visualization detection method has some advantages such as simple and rapid operation， low detection cost， fast reaction speed， and detecting target concentration by means of naked eye Gold nanomaterials are widely used in the construction of visual biosensors due to its unique optical properties or example， when changing the distance or morphology of the particles， the plasmon resonance absorption peak of local surface will change accordingly erein， we reviewed the application of gold nanomaterials in visualization biosensors for the detection of target molecules， summed up the main problems of AuNP colormertic methods in the determination of actual samples， and provided an outlook of the future of gold nanoparticlesbased biosensor in application development

KeywordsGold nanoparticles； Visualization biosensor； Review

（Received 1 uly 2017； accepted 20 September 2017）

his work was supported by the National Natural Science oundation of China （Nos 21575027， 21575025）endprint